無子刺梨組織培養和快速繁殖技術研究

趙雪慧等

摘要：以無子刺梨（Rosa sterilis）去葉片及皮刺的健壯枝條為外植體，通過對從誘導到組培苗生根各步的反復試驗，摸索總結出無子刺梨組織培養和快速繁殖各步的最佳配方。結果表明，最佳初代誘導培養基為LM+1.0 mg/L KT+0.5 mg/L BA+0.02 mg/L TDZ+0.05 mg/L NAA ；最佳增殖培養基為LM+1.0 mg/L KT+1.0 mg/L BA+0.02 mg/L TDZ +0.05 mg/L NAA；最佳生根培養基為LM+0.1 mg/L NAA。

關鍵詞：無子刺梨（Rosa sterilis）；植物組織培養；快速繁殖

中圖分類號：S661.2；Q943.1 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）17-4321-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.17.056

刺梨（Rosa sterilis） 為薔薇科薔薇屬植物，又名繅絲花，在中國主要分布在貴州、云南、四川、湖北、陜西等省，經引種栽培，山西、山東、河南、安徽等省也有分布[1]。刺梨具有喜陽耐旱、耐瘠薄等特性[2]。刺梨果實營養非常豐富，據測定，100 g鮮果含水分81 g、蛋白質0.7 g、碳水化合物13 g、鈣0.07 g、維生素D 2.8 g、維生素C 2.5 g。刺梨除鮮食外，還可以加工成果汁、果酒、飲料、果脯和果醬等各種食品，是老少皆宜的營養品[3]。刺梨以根和果實入藥，據《本草綱目拾遺》記載，刺梨具有消食健脾、收斂等功效。刺梨不僅富含維生素C、鞣酸及相關的多酚類物質[4，5]，近年還發現刺梨富含超氧化物歧化酶（SOD）、多糖（PRRT）以及多種微量元素等，這些成分具有清除體內自由基、降低脂質過氧化物（Lipid peroxide，LPO）、減少脂褐素、增強免疫功能、防止動脈粥樣硬化、抗細胞突變作用，并能防止非膽堿能（Non adronergic non cholinergic，NNC）在體內的形成及致癌作用[1]。

無子刺梨為貴州植物園1985年發表的一個刺梨新種。其成熟果實暗橙黃色，果面皮刺基本脫落，種子敗育，故名無子刺梨。無子刺梨生長快，根系發達，適宜山地造林，是退耕還林等工程造林的優選品種之一[6]。無子刺梨栽植3年開始掛果，果實味清香爽口，酸甜適度，鮮食加工均宜，被譽為“新山珍”[7]。其鮮果的VC含量達1 133 mg/100 g，相比于有子刺梨，其單寧含量較低，果實所含的糖分、超氧化物歧化酶和維生素均較高，可溶性固形物達18%，并含有B、Zn、Mo、Cu、Fe等多種礦物質元素，品質更加優異，具有較高的經濟價值[8]。但由于無子刺梨屬野生資源，分布范圍窄，資源較少，加上沒有種子，所以自然繁殖較慢[9，10]。為此，有必要發揮組織培養快速繁殖的技術特點，建立起一套完整成熟的組織培養工序，從而實現無子刺梨的快速推廣種植。

1 材料與方法

1.1 材料

無子刺梨采自西南林業大學樹木園無子刺梨扦插基地。用枝剪剪取葉面無病蟲害痕跡的健壯枝條，脫去莖桿上所有葉片及皮刺，再用刷子蘸取濃洗衣粉水刷洗枝條表面，再用流水沖洗干凈枝條上的洗衣粉水。

1.2 外植體消毒及初代培養

將外植體剪成帶有一個腋芽的小段，在超凈工作臺內用75%酒精浸泡1 min后轉入升汞中浸泡10 min和13 min，再用無菌水漂洗3遍轉接入誘導培養基中，27 d后統計結果。培養基為LM培養基加上KT、BA、TDZ、NAA這4種植物激素。針對這4種激素，設計4因素3水平的L9（34）正交試驗，因素與水平見表1。蔗糖與卡拉膠添加量分別為30 g/L和5 g/L。參照無子刺梨原產地生境，在光照度為1 500 lx，溫度22 ℃的培養條件下培養觀察。

1.3 增殖培養

培養40 d左右，待小段莖桿腋芽處發出叢生芽后，將叢生芽截下轉入增殖培養基中培養。待叢芽基部長出愈傷組織之后，再分株培養，以此方式進行增殖。增殖培養基（LM+1.0 mg/L KT +1.0 mg/L BA +0.02 mg/L TDZ +0.05 mg/L NAA）是在誘導培養基的基礎上進行的進一步調整。

1.4 壯苗的生根培養與煉苗

在壯苗生根培養基LM+0.1 mg/L NAA、LM+0.2 mg/L NAA中培養40 d左右，待根長長后，即可將苗從培養瓶中移至培養缽中煉苗。

2 結果與分析

2.1 采樣氣候對染菌率的影響

在材料采集方面，通過對比不同天氣下和同一天的不同時段采集的材料的接種成活率和染菌率發現，在晴天12：00～14：00時采集的枝條其成活率較高，染菌率最低，而陰雨天氣采集的枝條接種染菌率偏高。經分析認為，此時段高溫和光照可能減少了枝條表面的水分，使細菌附著生長條件不佳，所以染菌率較低，成活率較高。

2.2 升汞浸泡時間對無子刺梨染菌率和發芽率的影響

升汞浸泡10 min和13 min后無子刺梨外植體莖段染菌率和發芽率的統計結果如表2所示。由表2可知，在同等條件下，升汞浸泡13 min的外植體莖段染菌率比10 min的低，而發芽率比10 min的高，說明浸泡13 min比浸泡10 min好。

2.3 無子刺梨外植體誘導培養結果

外植體莖段誘導培養正交試驗優化結果如表3所示。由表3可以看出，KT最佳量為水平1，BA為水平1，TDZ為水平2，NAA為水平1，即最佳組合配方為LM+1.0 mg/L KT+0.5 mg/L BA+0.02 mg/L TDZ+0.05 mg/L NAA。觀察結果也表明，該培養基中的外植體莖段發芽率最高，芽叢茂盛且顏色嫩綠，無枯黃和稀疏現象，誘導效果最好，結果如圖1所示。endprint

2.4 無子刺梨苗增殖培養結果

用增殖培養基LM+1.0 mg/L KT +1.0 mg/L BA +0.02 mg/L TDZ +0.05 mg/L NAA進行增殖，結果如圖2所示，增殖率均達300%以上，增殖效果良好。

2.5 無子刺梨苗生根培養結果

LM+0.1 mg/L NAA培養條件下無子刺梨苗的生根情況明顯優于LM+0.2 mg/L NAA培養條件下，結果如圖3所示，其生根數量適中，分布均勻，韌度較強，適宜煉苗。

2.6 無子刺梨煉苗及盆栽、大田栽培結果

待生根苗有一定數量后轉入普通腐殖土中煉苗，在溫室中進行盆栽，盆栽中的無子刺梨苗出現短暫的適應性萎枯，但經過3～4 d后即恢復葉片舒展和生長，且由于光線和溫度等原因，葉片轉為深綠，植株逐漸長高，結果如圖4所示。之后轉入室外土地栽培，6個月之后生長情況如圖5所示。

3 小結與討論

無子刺梨是貴州省的特有新種，有廣闊的開發利用前景，試驗參考韋景楓等[10]的經驗，對其組織培養快速繁殖技術進行了研究，對組織培養過程中遇到的染菌等問題也進行了探討，使該技術可操作性更強。

試驗中發現并非所有的細菌或者真菌都會妨礙組織培養苗在培養瓶內的生長，其中一類紅色黏菌不僅不抑制無子刺梨生長，反而對其生長有促進作用。在有紅色黏菌存在的情況下，無子刺梨葉面更綠，植株更壯實。且并非所有植物的愈傷組織都能獨立呈現高活性的分化能力，在試驗中經反復對比驗證，均發現無子刺梨單獨的愈傷組織（即沒有叢生芽的愈傷組織）的分化能力遠遠不及帶有叢生芽的愈傷組織，甚至好多單獨的愈傷組織無法獨立分化生長，而帶叢生芽的愈傷組織接入新培養基時則能順利分化出更多的叢生芽，且生長較快。據此猜測無子刺梨叢生芽對其愈傷組織有某種指導分化和促進生長的作用。

參考文獻：

[1] 王 薇，夏炳南.刺梨的研究進展[J].中國藥學雜志，1996，31（11）：643-645.

[2] 王鳳香.刺梨的生態生物學特性及其開發利用前景[J].生物學通報，2000，35（7）：45.

[3] 劉 航，邵 麗.刺梨的開發價值及栽培技術要點[J].現代園藝，2013（12）：121.

[4] 羅登義.刺梨的探索與研究[M].貴陽：貴州人民出版社，1987.

[5] TAKASHI Y， XINMIN C， T SUTOMIC H， et al. Roxbina A and B from Rosa Roxburghii fruits chempharm Bull [J].Tannins and related polyphenols of rosaceous medicinal plants Ⅳ，1987，35（5）：1817.

[6] 韋景楓，鐘 漫，程友忠，等.無籽刺梨試管苗移栽及其影響因素的探討[J].中國林副特產，2010，6（1）：30-31.

[7] 姜永新，高 健，趙 平，等.無子刺梨新鮮果實揮發性成分的GC-MS分析[J].食品研究與開發，2013，34（14）：91-94.

[8] 鄧朝義，方仕能，黃 勇.貴州特有種子植物無子刺梨形態特征研究及分類學訂正[J].種子，2009，28（9）：62-68.

[9] 高相福.刺梨離體快繁成套技術研究[J].貴州農學院學報，1994，13（2）：35-38.

[10] 韋景楓，陶文丞，張聲濤，等.無籽刺梨組培快繁技術研究[J].黑龍江生態工程職業學院學報，2007，20（5）：24-25.endprint