E－cadherin和Snail表達(dá)水平與乳腺癌新輔助化療療效的關(guān)系分析

董佳寒 蘇靜 陳航航

(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院乳腺外科 河南鄭州 450052)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，新輔助化療已作為局部晚期乳腺癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方案。Kaufmann M等發(fā)現(xiàn)新輔助化療獲得完全緩解的患者無病生存率(disease free survival，DFS)及總生存率(overall survival，OS)明顯改善［1］，但并不是每個(gè)乳腺癌患者均能從新輔助化療中獲益，反而帶來治療的延遲或疾病進(jìn)展。近些年，E－cadherin和Snail在腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中的作用成為研究的熱點(diǎn)。本研究利用活檢獲得化療前的乳腺癌組織，通過免疫組化SP法檢測(cè)E－cadherin和Snail的表達(dá)，探討二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)新輔助化療的療效及預(yù)后的意義。

1 材料與方法

1.1 資料收集 2008年1月至2012年6月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院乳腺外科確診的原發(fā)性Ⅱ～Ⅲ期，按國(guó)際抗癌聯(lián)盟標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，無其他惡性腫瘤病史乳腺癌患者169例，新輔助化療前經(jīng)活檢證實(shí)病理類型均為浸潤(rùn)性乳腺癌?；颊呔鶠榕?，年齡26～76歲，平均年齡45.8歲，一般情況良好，初診時(shí)腫塊均可捫及，中位隨訪是50個(gè)月。所有患者在就診前均未接受過任何治療，在首次治療均證實(shí)無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及無化療禁忌證?；顧z確診后所有患者均行TAC方案化療4個(gè)周期后手術(shù)?；顧z標(biāo)本均行常規(guī)石蠟切片及免疫組化。

1.2 治療方案及療效評(píng)估 所有患者均行TAC方案:吡柔比星 50 mg/m2，d1，環(huán)磷酰胺 500 mg/m2，d1，多西他賽75 mg/m2，d1，靜脈滴注。21 d為1個(gè)周期。4個(gè)周期后，行臨床體檢及影像學(xué)檢查，評(píng)估療效，并根據(jù)臨床評(píng)估決定手術(shù)方式。

新輔助化療前行卡尺及彩超測(cè)量腫塊的最大徑及垂直徑，同一患者在化療前后采用同一種測(cè)量手段，每周期復(fù)查1次。臨床療效評(píng)估根據(jù)WHO實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)分為:完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩(wěn)定(SD)、疾病進(jìn)展(PD)。CR+PR為有效，SD+PD為無效。

1.3 乳腺癌標(biāo)本收集及處理 標(biāo)本取自活檢獲得的乳腺癌組織，用10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，行4 μm連續(xù)切片，進(jìn)行HE染色和E－cadherin、Snail免疫組化染色。

1.4 實(shí)驗(yàn)材料 鼠抗人Snail(H－130)抗體購(gòu)自美國(guó)Biotechnology公司，即用型鼠抗人E－cadherin抗體為福州生物技術(shù)中心，免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑購(gòu)于北京中杉金橋生物公司，用已知陽性片作為陽性對(duì)照，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.5 免疫組化結(jié)果判定 陽性切片E－cadherin免疫組化位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，Snail免疫組化位于細(xì)胞核，均為淡黃色或棕黃色顆粒，免疫組化強(qiáng)度參照Formwitz評(píng)分方法，根據(jù)陽性細(xì)胞的百分率(每片隨機(jī)觀察5個(gè)40×10倍視野，對(duì)其中的陽性細(xì)胞計(jì)數(shù))及顯色情況分級(jí)，根據(jù)二者的乘積，將染色情況分為4級(jí):0分為(－)，1～4分為(+)，5～8分為(++)，9～12分為(+++)。－～+為低表達(dá)，++～+++分為高表達(dá)。隨訪信息通過電話隨訪或門診隨訪獲得。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0軟件分析，采用χ2檢驗(yàn)及Spearman等級(jí)相關(guān)分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 E－cadherin和Snail在乳腺癌組織中的表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系 在169例乳腺癌組織中，其中E－cadherin高表達(dá)82例，低表達(dá)87例;Snail高表達(dá)99例，低表達(dá)70例(圖1);E－cadherin表達(dá)均與臨床分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P＜0.05);與年齡、月經(jīng)狀況、腫瘤大小以及ER和PR狀態(tài)無關(guān)。Snail表達(dá)均與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P＜0.05);與年齡、月經(jīng)狀況、組織分級(jí)、腫瘤大小以及ER和PR狀態(tài)無關(guān)。見表1。

2.2 乳腺癌組織中E－cadherin和Snail的表達(dá)與臨床獲益率的關(guān)系 E－cadherin低表達(dá)組的臨床總有效率高于高表達(dá)組，而在化療抵抗(SD+PD)方面，E－cadherin高表達(dá)組明顯多于低表達(dá)組。這表明E－cadherin低表達(dá)與新輔助化療獲益率高相關(guān)。Snail低表達(dá)組的臨床總有效率高于Snail高表達(dá)組，化療抵抗(SD+PD)Snail高表達(dá)組高于低表達(dá)組。這表明Snail低表達(dá)與新輔助化療獲益率低相關(guān)。見表2。

2.3 乳腺癌中E－cadherin和Snail表達(dá)的相關(guān)性兩者在乳腺癌組織中的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)(r=－0.241，P=0.002)。見表3。

3 討論

圖1 E－cadherin和Snail在乳腺癌中的表達(dá)(SP×400)

表1 乳腺癌組織中E－cadherin和Snail的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(n)

表2 化療前E－cadherin和Snail的表達(dá)與乳腺癌新輔助化療療效的關(guān)系(n)

表3 乳腺癌中E－cadherin和Snail表達(dá)的相關(guān)性(n)

乳腺癌新輔助化療作為局部晚期乳腺癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方案已經(jīng)獲得國(guó)內(nèi)外高度認(rèn)可。但是臨床研究發(fā)現(xiàn)還有約25%的患者并不能從新輔助化療中獲益，所以在新輔助化療前評(píng)估化療療效顯得尤為重要。研究顯示，上皮－間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)［2］。其細(xì)胞機(jī)制為上皮標(biāo)記基因的表達(dá)與細(xì)胞間黏附力的喪失，間質(zhì)標(biāo)記基因、細(xì)胞遷移與運(yùn)動(dòng)力的獲得和細(xì)胞形態(tài)的改變［3］。EMT和癌細(xì)胞脫離原發(fā)部位在浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過程中起重要作用［4］。E－cadherin和Snail在ETM中發(fā)揮重要作用。E－cadheri參與和維持細(xì)胞間連接，其表達(dá)的缺失或者細(xì)胞與細(xì)胞間連接的功能減弱是EMT過程中重要的一步。E－cadherin表達(dá)減少或缺失是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的重要促進(jìn)因素［5］。E－cadherin在同時(shí)伴有侵襲和轉(zhuǎn)移行為的多種不同類型的腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)通常是下調(diào)的［6－7］，其表達(dá)下調(diào)與預(yù)后不良有關(guān)［8］。既往也發(fā)現(xiàn)人體惡性腫瘤細(xì)胞中E－cadherin的低表達(dá)，腫瘤浸潤(rùn)能力強(qiáng)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率高，生存率低。研究發(fā)現(xiàn)，約70%的原發(fā)性乳腺癌中存在E－cadherin的表達(dá)減少或缺失。本研究結(jié)果與上述文獻(xiàn)研究結(jié)果一致，E－cadherin的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、臨床TNM分期，以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。E－cadherin呈低表達(dá)組的臨床總緩解率高于高表達(dá)組，這提示E－cadherin低表達(dá)與新輔助化化療獲益率高相關(guān)。

Snail屬于轉(zhuǎn)錄抑制因子，具有阻遏抑癌基因CDH1編碼的因子，而基因CDH1編碼了關(guān)鍵黏附蛋白E－cadherin，從而導(dǎo)致E－cadherin的轉(zhuǎn)錄抑制，進(jìn)而導(dǎo)致EMT的發(fā)生并提高細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的能力［9］。在人類多種惡性腫瘤，Snail的表達(dá)上調(diào)與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移及較差的預(yù)后密切相關(guān)［10］。本研究結(jié)果Snail的表達(dá)與腫瘤大小、臨床TNM分期，以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，表明Snail的表達(dá)與乳腺癌的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Snail呈低表達(dá)組的臨床總緩解率高于高表達(dá)組，這提示Snail高表達(dá)與新輔助化化療獲益率低相關(guān);研究發(fā)現(xiàn)，Snail表達(dá)上調(diào)，E－cadherin表達(dá)下降，二者表達(dá)呈逆反關(guān)系［11］。本研究結(jié)果顯示，E－cadherin低表達(dá)與新輔助化化療獲益率高相關(guān)，Snail高表達(dá)與新輔助化化療獲益率低相關(guān)。E－cadherin和Snail的表達(dá)經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析，兩者在乳腺癌中的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)(r=－0.241，P=0.002)，與大多文獻(xiàn)報(bào)道一致。因此，聯(lián)合檢測(cè)E－cadherin與Snail可為評(píng)估乳腺癌新輔助化療療效提供參考指標(biāo)。

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