黃芩藥材多指標綜合評價的研究△

劉征輝，魏靜娜，趙琳琳，馬西蘭，郭永澤，程奕*

(1.天津海世達檢測技術有限公司，天津 300381；2.天津市現代中藥質量檢驗中心，天津 300381；3.天津市農業質量標準與檢測技術研究所，天津 300381)

黃芩藥材多指標綜合評價的研究△

劉征輝1，2，魏靜娜1，2，趙琳琳1，2，馬西蘭1，2，郭永澤3，程奕3*

(1.天津海世達檢測技術有限公司，天津 300381；2.天津市現代中藥質量檢驗中心，天津 300381；3.天津市農業質量標準與檢測技術研究所，天津 300381)

目的：建立黃芩藥材中4種活性成分(黃芩苷，漢黃芩苷，黃芩素，漢黃芩素)薄層鑒別及高效液相色譜同時定量的方法。方法：以CPACELL PAK C18色譜柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)，流動相甲醇-0.1%磷酸溶液洗脫，測定波長275 nm，柱溫30 ℃，流速1.0 mL·min-1。結果：4種成分的線性關系良好，精密度、穩定性、重復性的RSD均低于3.0%，加樣回收率為95.4～98.3%。結論：該方法簡便、靈敏、準確，可用于黃芩藥材的質量控制。

高效液相色譜；黃芩藥材；黃芩苷；漢黃芩苷；黃芩素；漢黃芩素

黃芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)屬唇形科植物，主要分布于黑龍江、吉林、遼寧、山東、河北、山西、河南、陜西、甘肅、內蒙古等地，其入藥部位為根。據藥典記載黃芩味苦性寒，有瀉火解毒、清熱燥濕、抗炎鎮痛、止血安胎等功能，對暑溫胸悶嘔吐、肺熱咳嗽、血熱妄行、高熱煩渴、濕熱下痢等具有良好功效。目前《中國藥典》及文獻大多采用高效液相色譜法測定黃芩苷的含量[1-5]。由于黃芩中的功效成分主要為黃酮類，而黃酮類成分在儲存過程中也會相互轉換，且各成分均具有清熱解毒活性，藥典標準僅以黃芩苷一種成分來衡量其質量有一定片面性，故試驗采用HPLC 同時測定黃芩藥材中4 種活性成分的含量。該方法簡單快速，重復性好，可作為黃芩藥材的質量控制方法，也為相關制劑質量標準的提高提供參考依據。

1 儀器與試藥

Waters Alliance 2695-2996高效液相色譜儀，CAMAG薄層分析系統，分析電子天平(METTLER AB 54)。黃芩苷(110715-200514)，黃芩素(111595-200604)，漢黃芩素(111514-200403)均購于中國藥品生物制品檢定所；漢黃芩苷(20 mg；98%)，購于天津金測分析技術有限公司。甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。黃芩藥材(2年生，3年生，4年生，5年生)，采收于2013年9月份，由中國藥材集團承德藥材有限責任公司提供(恒溫恒濕存放于公司標本室)，經張學文主任中藥師鑒定為承德產熱河黃芩。

2 室驗方法的建立

2.1 薄層鑒別方法的建立

取本品粉末1.0 g，加乙酸乙酯-甲醇(3∶1)混合溶液20 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2.0 mL使溶解，取上清液作為供試品溶液。另取黃芩對照藥材1.0 g，同法制成對照藥材溶液。取黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg、0.5 mg、0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取項下的供試品溶液與上述對照品溶液各2 μL，分別點于同一聚酰胺薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10∶3∶1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈365 nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯3個相同的暗色斑點。具體薄層色譜圖見圖1。

1.黃芩藥材；2.黃芩藥材；3.黃芩苷；4.黃芩素；5.漢黃芩素；6.黃芩對照藥材。圖1 黃芩薄層色譜圖

2.2 液相色譜條件的建立

2.2.1 色譜條件 色譜柱：CPACELL PAK(5 μm，250 mm×4.6 mm)，PDA檢測器(190 nm～400 nm)，流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液(49∶51)；流速1.0 mL·min-1；檢測波長275 nm，進樣量10 μL，柱溫：30 ℃。

2.2.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取漢黃芩素、黃芩素、黃芩苷、漢黃芩苷3.80 mg、3.48 mg、3.04 mg、3.63 mg于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容到刻度，作為對照品儲備液。精密吸取的儲備液各1 mL，置5 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，即對照品混合溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 稱取2年生、3年生、4年生、5年生的黃芩干燥粉末0.306 1 g、0.308 8 g、0.307 4 g、0.303 5 g，分別加70%乙醇溶液60 mL回流提取3 h，冷卻，過濾，濾液置100 mL容量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌濾紙和殘渣，洗液并入100 mL量瓶中，用70%乙醇溶液定容至刻度，即得供試品溶液。

分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，按“2.2.1”項下色譜條件測定，不同生長年限的黃芩的液相色譜圖如圖2所示。

2.3 線性關系考察

分別精密量取對照品儲備液0.1、0.5、1.0、2.0、4.0、5.0 mL置于25 mL 棕色量瓶中，加體積分數50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得系列對照品溶液。分別取10 μL平行進樣測定3 次，以峰面積平均值A 對進樣量C(μg)進行線性回歸，得回歸方程，見表1。

表1 指標成分標準曲線列表

a2年生；b3年生；c4年生；d5年生；e混標。圖2 不同生長年限黃芩藥材的指標性成分比較

2.4 精密度試驗

精密吸取混合對照品溶液10 μL，按“2.2.1”項下色譜條件連續進樣6次，測得黃芩苷，漢黃芩苷，黃芩素，漢黃芩素峰面積RSD 分別為0.37%、0.19%、0.45%、0.21%(n=6)，其RSD均小于3.0%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩定性試驗

取同一批次的供試品溶液，室溫下放置，分別于制備后0、3、6、9、12、15 h進樣測定。結果黃芩苷，漢黃芩苷，黃芩素，漢黃芩素峰面積RSD 分別為0.97%、1.35%、0.96%、1.43%(n=6)，表明供試品溶液在15 h內穩定。

2.6 重復性試驗

取同一批次樣品，照“2.2.3”項下方法，平行制備6份供試品溶液，分別進樣測定，結果黃芩苷，漢黃芩苷，黃芩素，漢黃芩素平均含量分別為14.7%、1.0%、0.37% 及0.10%，RSD分別為1.35%、0.98%、1.24%、1.11%(n=6)，表明本法重復性良好。

2.7 回收率試驗

取已知含量的同批次本品6份，每份0.15 g，精密稱定，分別精密添加含黃芩苷對照品溶液20.0 mL，漢黃芩苷對照品溶液10.0 mL，黃芩素對照品溶液5.0 mL，漢黃芩素對照品溶液1.0 mL，照“2.2.3”項下方法制備回收率用供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件測定，進樣測定峰面積并計算回收率，結果平均回收率分別為97.4%、98.3%、96.9%、95.4%，RSD為1.25%。

3 試驗結果與分析

3.1 一般指標

按照中國藥典對黃芩藥材所含水分、灰分和浸出物進行分析測定，得到黃芩的這些指標均符合中國藥典2010年版一部黃芩標準的相關規定，并且這些一般指標與年份關系不大。其結果如表1所示。

表2 不同生長年限黃芩指標性成分列表 %

3.2 有效成分測定結果

表3 樣品測定結果 %

由表3可知，黃芩藥材中有效成分的含量基本上是按照年份的增加而增加，可見生長年限越長功效成分含量相對也越高。

4 討論

4.1 檢測波長的選擇

采用二極管陣列檢測器在190～380 nm內分別掃描混合對照品溶液中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素及漢黃芩素的色譜峰紫外吸收。其最大吸收波長分別為277.2、273.7、274.9、274.9 nm(如圖3所示)，故設定檢測波長275 nm。

4.2 流動相的考察

試驗過程中以甲醇-0.1%磷酸溶液分離黃芩藥材中黃芩苷，漢黃芩苷，黃芩素，漢黃芩素四個活性成分，參照文獻色譜條件[6-8]，適當調節流動相比例至(49∶51)，上述4 種成分得到較好分離效果。

圖3 各指標性成分的紫外吸收圖

4.3 多指標同時定量

《中國藥典》黃芩項下其質量控制是單獨測定黃芩苷，由于黃酮類成分在在一定環境下會相互轉換，藥典標準單以黃芩苷來衡量其質量有一定片面性，本試驗采取液相色譜法同時測定黃芩藥材中4種活性成分[9-10]。本方法較藥典方法所控制指標更全面合理，為黃芩藥材質量標準的提高研究提供技術依據。市面上以黃芩為原料的中成藥[11-15]較多，但均以黃芩苷單一成分來控制。多指標成分同時定量是中藥質量標準提高研究的主要方向，本試驗方法正是實現了這一目標，將可以廣泛應用與這類中成藥中以綜合評價其質量。

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Multi-indexComprehensiveEvaluationofRadixScutellariae

LIU Zhenghui1，2，WEIJingna1，2，ZHAOLinlin1，2，MAXilan1，2，GUOYongze3，CHENGYi3*

(1.TianjinHigh-standardQualityTestingLab.，Tianjin300081，China；2.TianjinCenterforQualityTestingofTCM，Tianjin300081，China；3.TianjinInstituteofAgricuLturalQualityStandardandTestingTechnology，Tianjin300381，China)

Objective：：To establish a method for quantitative determination of four active ingredients(baicalin，wogonoside，baicalein，wogonin)in Radix Scutellariae by TLC and HPLC.Methods：The chromatographic separation was achieved on a CPACELL PAK C18column(5 μm，250 mm×4.6 mm)，the mobile phase was methanol -0.1% phosphate acid aqueous solution at a flow rate of 1.0 mL·min-1，the detection wavelength was 275 nm，and the column temperature was 30 ℃.Results：The established method showed a good linear relationship for four components，the RSD were less than 3.0%，recovery was 95.4%～98.3%.Conclusion：The method is simple，sensitive，accurate and can be used for quality control of Radix Scutellariae.

HPLC；Radix Scutellariae；Baicalin；Wogonoside；Baicalein；Wogonin

2014-09-16)

十二五國家科技支撐計劃項目(2011BAI07B04)，華北地區黃芩規范化種植基地優化升級及系列產品綜合開發研究。

*

程奕，研究員，主要從事農產品、土壤肥料及中藥檢測及科研工作；Tel：(022)23678678，E-mail：cychengyi99@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.1.008