品種及生長(zhǎng)年限對(duì)泰山四葉參多糖含量的影響△

陳寶芳，劉政波，畢研文，仉勁

(泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東 泰安 271000)

品種及生長(zhǎng)年限對(duì)泰山四葉參多糖含量的影響△

陳寶芳*，劉政波，畢研文，仉勁

(泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東 泰安 271000)

目的：研究品種及生長(zhǎng)年限對(duì)泰山四葉參多糖含量的影響。方法：采用苯酚-硫酸法測(cè)定多糖含量，以葡萄糖為對(duì)照品，測(cè)定波長(zhǎng)490 nm。結(jié)果：泰參2號(hào)1～4年生多糖含量分別為10.28%、14.24%、12.77%、11.27%；泰參3號(hào)1～4年生多糖含量分別為10.95%、12.85%、14.13%、13.06%。結(jié)論：泰山四葉參不同品種多糖含量有差異，泰山2號(hào)及3號(hào)兩品種多糖含量皆高于對(duì)照泰參1號(hào)。生長(zhǎng)年限對(duì)泰山四葉參品種多糖含量的影響表現(xiàn)為：生長(zhǎng)期1～2年或1～3年隨生長(zhǎng)年限延長(zhǎng)多糖含量逐年增加，2～3年生多糖含量達(dá)到高峰，3年以后則表現(xiàn)下降趨勢(shì)。

泰山四葉參；品種；生長(zhǎng)年限；多糖含量

四葉參codonopsislanceolatabenth.et hook.F.系桔梗科Campanulaceae黨參屬Codonopsis多年生藤蔓草本植物，又名輪葉黨參、羊乳，泰安當(dāng)?shù)厮追Q(chēng)泰山四葉參[1]。以根入藥，有清熱解毒、祛痰鎮(zhèn)咳、強(qiáng)壯滋補(bǔ)的作用，浸泡白酒，常飲能舒筋活血 健身補(bǔ)氣，被譽(yù)為“泰山之寶”[2]。現(xiàn)代藥理研究泰山四葉參具有較好的抗氧化能力和降血糖作用[3-6]。多糖類(lèi)是構(gòu)成生命的基本物質(zhì)，中草藥植物中的多糖更是當(dāng)前藥物研究熱點(diǎn)之一[7]。四葉參根中含豐富的多糖類(lèi)成分[8]，王德才等[9-12]對(duì)四葉參多糖提取及含量測(cè)定進(jìn)行了研究，目前涉及四葉參不同品種的多糖含量測(cè)定與比較未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)參考文獻(xiàn)[9-12]方法，采用苯酚-硫酸法測(cè)定泰山四葉參3個(gè)品種1～4年生根的多糖含量，為今后確定泰山四葉參的合理采收時(shí)間及質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的建立提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥材來(lái)源

1.1.1 藥材來(lái)源 四葉參采自泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院育種基地育成品種泰參2號(hào)、泰參3號(hào)(雜交種)，泰參1號(hào)為對(duì)照品種，參試品種均采用生長(zhǎng)1～4年的四葉參鮮根，收獲時(shí)間2013年10月30日。采集樣本首先洗凈，晾干表面水分。臺(tái)式調(diào)節(jié)式切片機(jī)(型號(hào)DXQ-130B)切片、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(型號(hào)DHG-9143B5-111)在80 ℃下烘干降至水分含量10%稱(chēng)重，粉碎后過(guò)4號(hào)篩冷藏備用。

1.1.2 試劑與儀器 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品(山東齊都藥業(yè)有限公司，純度≥98%)；精制泰山四葉參多糖(本實(shí)驗(yàn)室自制)；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純；島津UV-2450型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；RE-5205型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；JAl2003B型電子分析天平(上海精天儀器有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 泰山四葉參多糖的提取與精制 稱(chēng)取泰山四葉參粗粉80 g，加4倍量石油醚回流脫脂2次，每次2 h；濾渣加4倍量80%乙醇回流提取2次，每次2 h。經(jīng)脫脂、醇提后的濾渣在60 ℃烘干，分別加6、5、4倍量蒸餾水在沸水浴中浸提3次，每次3 h，合并濾液，減壓濃縮至400 mL左右。以每100 mL濃縮液加50 mL氯仿正丁醇(4∶1)液，劇烈振蕩30 min，靜止過(guò)夜，以4000 rpm·min-1離心12 min，去除下層氯仿及中層變性蛋白，取上部水層再重復(fù)去蛋白操作，至無(wú)明顯中層為止。收集去蛋白后的上部水層，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)減壓濃縮至150 ml左右，加無(wú)水乙醇至溶液含醇量達(dá)80%，靜置過(guò)夜，以4000 rpm·min-1離心12 min，收集沉淀物，再依次用無(wú)水乙醇、乙醚、丙酮洗滌各2次。沉淀物置60 ℃真空干燥箱中干燥，即得精制多糖17 g。

1.2.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 精密稱(chēng)取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖對(duì)照品100 mg，加適量水溶解，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，配成1 mg·mL-1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液備用。

1.2.3 5%苯酚溶液的配制 取密封完好的無(wú)色的苯酚10 g，加蒸餾水200 mL溶解，置棕色瓶?jī)?nèi)放冰箱備用。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 分別吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液10、20、40、60、80、100 μL置于大試管中，各補(bǔ)加蒸餾水至2.0 mL，葡萄糖濃度分別為5、10、20、30、40、50 μg·mL-1，然后各加入5%苯酚溶液1 mL，緩慢沿壁加濃硫酸5 mL，混勻，放置5 min后，再沸水浴加熱15 min，流水冷卻至室溫，在波長(zhǎng)490 nm處測(cè)定吸光度。以蒸餾水代替葡萄糖溶液作空白對(duì)照。結(jié)果表明，葡萄糖濃度在5～50 μg·mL-1范圍內(nèi)，吸光度與濃度具有良好的線性關(guān)系。以濃度(C，μg·mL-1)為縱坐標(biāo)，吸光度(A)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=0.014 9X-0.008 5，r=0.998 6。

1.2.5 換算因子的測(cè)定 精密稱(chēng)取干燥至恒重的精制泰山四葉參多糖35 mg，置100 mL容量瓶中加蒸餾水，定容至刻度，作為多糖儲(chǔ)備液。精密吸取多糖儲(chǔ)備液0.2 mL 3份，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制作方法測(cè)定其吸光度。經(jīng)測(cè)定，3份多糖儲(chǔ)備液的吸光度分別為0.628、0.627、0.641，平均0.632，從回歸方程中求出多糖液中折合葡萄糖的濃度為85.97 μg·mL-1。按下式計(jì)算換算因子，測(cè)得F=0.407 1。

F=W/C·D(W為多糖的重量/μg，C為多糖液中折合葡萄糖的濃度/μg·mL-1，D為稀釋因素)

1.2.6泰山四葉參多糖含量的測(cè)定 精密稱(chēng)取3份泰山四葉參粉末各0.5 g，分別置圓底燒瓶中加80%乙醇150 mL回流提取3 h，趁熱抽濾，濾渣用80%乙醇洗滌3次。然后濾渣連同濾紙置燒瓶中，加蒸餾水150 mL沸水浴加熱提取3 h，趁熱抽濾，用熱水洗滌燒瓶和濾渣，洗液并入提取液中，待冷后轉(zhuǎn)移于250 mL容量瓶中，補(bǔ)加蒸餾水定容至刻度，如此制作樣品溶液3份，置冰箱中備用。

精密吸取樣品溶液0.15 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制作方法測(cè)定其吸光度。每份樣品溶液重復(fù)操作3次，取平均吸光度。3份樣品溶液的平均吸光度分別為0.335，0.334，0.333，平均0.334。從回歸方程中求出樣品溶液中折合試管中葡萄糖濃度為45.97 μg·mL-1。按下式計(jì)算泰山四葉參中多糖的百分含量。

多糖含量(%)=C·D·F/W×100%(W為四葉參樣品的重量/μg，C為樣品液中折合葡萄糖的濃度/μg·mL-1，D為稀釋因素)

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 葡萄糖含量標(biāo)準(zhǔn)曲線

不同生長(zhǎng)年限四葉參多糖含量由圖1可知，得到的葡萄糖含量標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：Y=0.014 9X-0.008 5，r=0.998 6，在波長(zhǎng)490 nm處測(cè)定吸光度。以濃度(C)為縱坐標(biāo)，吸光度(A)為橫坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明，葡萄糖濃度在5～50 μg·mL-1范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

表1 四葉參不同濃度下的吸光度

圖1 葡萄糖含量標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 不同品種相同生長(zhǎng)年限泰山四葉參多糖含量及差異性分析

從表2結(jié)果與分析看出，1年生泰山四葉參多糖含量比較，泰參3號(hào)>泰參2號(hào)>泰參1號(hào)，泰參3號(hào)與對(duì)照差異顯著；2年生泰山四葉參多糖含量比較，泰參2號(hào)>泰參3號(hào)>泰參1號(hào)，泰參2號(hào)多糖含量達(dá)到高峰，與對(duì)照差異極顯著；3年生泰山四葉參多糖含量排序?yàn)椋﹨?號(hào)>泰參2號(hào)>泰參1號(hào)，三品種之間比較差異達(dá)極顯著水平。4年生泰山四葉參品種間多糖含量比較，位序與3年生相似，不同點(diǎn)是泰參3號(hào)多糖含量下降幅度小于泰參2號(hào)。相同生長(zhǎng)年限的泰山四葉參品種間多糖含量比較結(jié)果表明，泰參2號(hào)以2年生質(zhì)量為佳，泰參3號(hào)以3年生品質(zhì)為佳。

2.3 生長(zhǎng)年限對(duì)泰山四葉參品種多糖含量的影響及多重比較

表3、圖2為不同生長(zhǎng)年限泰山四葉參品種的多糖含量比較，分析表明，泰參2號(hào)、泰參1號(hào)1～2年生根多糖含量隨生長(zhǎng)年限而增加，2年生多糖積累達(dá)到高峰，與其它年限之間比較達(dá)極顯著水平，3～4年生隨生長(zhǎng)期延長(zhǎng)多糖積累表現(xiàn)下降，兩品種的多糖積累趨勢(shì)相同。泰參3號(hào)1～3年生根多糖含量隨生長(zhǎng)年限而增加，3年生根多糖含量最高，與

表2 泰山四葉參不同品種相同生長(zhǎng)年限多糖含量及分析

1～2年生根多糖含量比較達(dá)極顯著水平，4年生多糖含量表現(xiàn)下降趨勢(shì)。其多糖積累趨勢(shì)與其它兩品種不盡一致，可能與泰參3號(hào)為雜交種有關(guān)。綜合分析表明，三品種的多糖含量以2～3年生的較高，3年以上多糖含量降低。提示泰山四葉參藥材若以多糖為利用目的，種植2～3年即可。

表3 同一品種不同生長(zhǎng)年限泰山四葉參多糖含量及分析

圖2 1～4年生泰山四葉參不同品種多糖含量差異

3 結(jié)論與討論

采用苯酚-硫酸法測(cè)定泰山四葉參多糖含量，葡萄糖濃度在5～50 μg·mL-1范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。結(jié)果表明，泰山四葉參品種之間多糖含量有一定差別。本研究結(jié)論與孫磊等[13]不同丹參品種酚酸B含量存在差異結(jié)論一致。

本實(shí)驗(yàn)首次測(cè)定分析了泰山四葉參不同品種的多糖含量，結(jié)果表明，泰山四葉參三品種的多糖含量以泰參2號(hào)，泰參3號(hào)品種較高。泰山四葉參連續(xù)生長(zhǎng)3年或3年以上多糖含量開(kāi)始下降，與周茂金[14-15]2～4年生四葉參多糖含量逐年增加的結(jié)論有所不同，可能與品種特性、產(chǎn)地、生態(tài)環(huán)境、生長(zhǎng)年限、采收季節(jié)、藥材質(zhì)量有較大變化有關(guān)，具體原因尚待研究。

多糖是泰山四葉參主要成分之一，具有免疫藥理活性，在實(shí)際應(yīng)用中建議以多糖含量作為評(píng)價(jià)四葉參藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，與傳統(tǒng)黨參質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)相符[16]。

本研究中，4年生及以上四葉參田間生長(zhǎng)勢(shì)變?nèi)酰蚀蟮砥ご植冢|(zhì)地疏松，甚至有空心和爛心。因此選擇合適的品種及適時(shí)采收是泰山四葉參藥材質(zhì)量控制的重要環(huán)節(jié)。

栽培上應(yīng)根據(jù)四葉參藥材品質(zhì)與產(chǎn)量并重的雙重指標(biāo)，合理確定采收期，建議泰山四葉參栽培年限以2～3年生為佳。

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EffectsofVarietiesandGrowthYearsonPolysaccharideContentofCodonopsislanceolata

CHEN Baofang*，LIUZhengbo，BIYanwen，ZHANGJin

(TaianAcademyofAgriculturalSciences，Taian271000，China)

Objective：To study the effects of varieties and growth years on polysaccharide content ofCodonopsislanceolata.Methods：The content of polysaccharide was determined by the phenol-sulfuric method and the detection wavelength was 490nm.The glucose was taking as standard for the determination.Results：The content of polysaccharide was 10.28%，14.24%，12.77% and 11.27% for Tai Shen 2 and 10.95%，12.85%，14.13%，13.06% for Tai Shen 3 of different growth years from 1 to 4 years old.Conclusion：There were significant differences in the polysaccharide content ofC.lanceolataof different varieties and growth years.The contents of polysaccharide for Tai Shan 2 and Tai Shan 3 were higher than that of Tai Shan 1.UP to 3 years of growth stage，polysaccharide content in plant were increased with the increasing years of planting，and then the content will be decreased as the increasing years.

CodonopsislanceolataBenth.et Hook.F；Variety；Growth years；Polysaccharide content

2014-09-01)

泰山四葉參新品種選育及加工利用(201340629)

*

陳寶芳，高級(jí)農(nóng)藝師，研究方向：中草藥育種與質(zhì)量評(píng)價(jià)；Tel：(0538)8515961，E-mail：chenbaofangts@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.1.011