長(zhǎng)白山野生細(xì)葉杜香菌根真菌的分離及其特征

姜云天 顧地周 李玉梅

摘要：本文以野生細(xì)葉杜香為試材，初步對(duì)其菌根真菌進(jìn)行分離與培養(yǎng)，并對(duì)其菌落特征進(jìn)行描述。結(jié)果表明：分離得到36株真菌菌株，菌落形態(tài)特征歸為4種類(lèi)型。菌落顏色各異，菌落邊緣規(guī)則、無(wú)孢子產(chǎn)生、無(wú)分泌物，菌落呈絨氈狀或棉絮狀。

關(guān)鍵詞：細(xì)葉杜香;菌根真菌;分離

基金項(xiàng)目：吉林省教育廳項(xiàng)目（吉教科合字〔2012〕第361號(hào)）

中圖分類(lèi)號(hào)： O657.7 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： ?A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI編號(hào)： ? 10.14025/j.cnki.jlny.2015.18.024

細(xì)葉杜香（Ledum palustre L. var. angustum N. Busch），又名狹葉杜香、喇叭茶、山白茶、絆腳絲，為杜鵑花科（Ericaceae）杜香屬（Ledum palustre）常綠小灌木[1]。在我國(guó)主要分布于東北地區(qū)的大、小興安嶺和長(zhǎng)白山區(qū)[2]。細(xì)葉杜香體內(nèi)含有多種有效成分，其葉及嫩枝、花、果實(shí)均含有芳香油，具有止咳、祛痰、消炎及止癢等功效，主要用于防治急慢性支氣管炎、流感、皮膚病等疾病[3];在長(zhǎng)白山區(qū)，民間有用葉制成藥膏治療月經(jīng)不調(diào)和不孕[4]。杜香除了具有藥用價(jià)值外，由于其特有的芳香還可作為天然香料應(yīng)用于日用化工、制藥皂、腳氣水、洗發(fā)水等系列產(chǎn)品[5]。目前，俄羅斯、韓國(guó)等學(xué)者將杜香提取物添加到食品中，將其制成軟飲料、罐頭、面條、酸奶、冰淇淋等多種功能食品。此外，杜香嫩葉還被用于制作保健茶等保健品。近年來(lái)，隨著人們保健意識(shí)的增強(qiáng)，杜香需求量越來(lái)越大。為了合理開(kāi)發(fā)利用野生細(xì)葉杜香資源，人們采用種子、扦插及組織培養(yǎng)等方式對(duì)其進(jìn)行人工繁殖，但是由于該植物存在根系與生境中某些真菌共生的特性，人工繁殖后的種苗出現(xiàn)存活率低、生長(zhǎng)緩慢等問(wèn)題。因此，為了探討野生細(xì)葉杜香生境中與之共生的真菌類(lèi)型，本研究以長(zhǎng)白山野生細(xì)葉杜香為試材，對(duì)其菌根真菌進(jìn)行分離與培養(yǎng)，并對(duì)其菌落特征進(jìn)行描述，以期為細(xì)葉杜香菌根真菌的鑒定提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌株，分離自長(zhǎng)白山北坡海拔1300米的針闊混交林下生長(zhǎng)的野生細(xì)葉杜香（Ledum palustre L. var. angustum N. Busch）。

1.2 試驗(yàn)方法

2014年7月，從長(zhǎng)白山北坡采集附帶根際土壤的細(xì)葉杜香根樣，用冰盒帶回實(shí)驗(yàn)室。先用流水將根系上的土壤和附帶物沖洗干凈，然后剪成3～4厘米根段，用70%的酒精消毒30秒，再放入0.1%升汞中消毒4～6分鐘，用無(wú)菌水沖洗5～6次后吸干根段上的水分，再將其切成約0.5厘米的小根段，接種于馬丁—孟加拉紅培養(yǎng)基（簡(jiǎn)稱(chēng)MD）和PDA培養(yǎng)基上，每個(gè)三角瓶中放3個(gè)根段，25℃下暗培養(yǎng)。待根段剪口處長(zhǎng)出菌絲后，用滅菌的接種針挑取真菌菌絲，轉(zhuǎn)接于新的馬丁—孟加拉紅培養(yǎng)基和PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行純化培養(yǎng)，直至得到單一菌株。培養(yǎng)14天記錄單一菌株菌落直徑及菌落特征。

2 結(jié)果與分析

2.1 分離菌株的菌落特征

經(jīng)過(guò)MD和PDA兩種培養(yǎng)基分離純化培養(yǎng)，從細(xì)葉杜香菌根中分離得到36株真菌菌株，根據(jù)分離培養(yǎng)菌株的菌落形態(tài)特征初步將其歸類(lèi)為4個(gè)類(lèi)型（見(jiàn)表1）。兩種培養(yǎng)基上分離的菌株均無(wú)孢子產(chǎn)生;菌落外形規(guī)則，呈圓形;菌落無(wú)分泌物產(chǎn)生。但是在菌落顏色、質(zhì)地和生長(zhǎng)速度上存在較大差異，其中，MD培養(yǎng)基上分離得到的菌株生長(zhǎng)較緩慢，菌株編號(hào)為a的菌落顏色呈黃褐色，邊緣白色隆起，絨氈狀，菌落直徑為4.8厘米;菌株編號(hào)為b的菌落顏色則呈白色，中間隆起，棉絮狀，菌落直徑為2.1厘米。PDA培養(yǎng)基上分離的菌株生長(zhǎng)速度相對(duì)較快;菌株編號(hào)為c的菌落直徑達(dá)到6.5厘米，菌落呈黑色，邊緣褐色，產(chǎn)生白色菌絲，絨氈狀;而菌株編號(hào)為d的菌落直徑達(dá)到9.6厘米，菌落中間部位微隆起，橘中帶白，邊緣橘色，輻射狀。4種類(lèi)型的菌落形態(tài)特征見(jiàn)圖版1。

表1 ?分離菌根真菌菌落特征

3 討論

兩種培養(yǎng)基分離的真菌類(lèi)型不同，但菌根真菌的菌落大多為絨氈狀或棉絮狀，菌落邊緣規(guī)則，無(wú)孢子產(chǎn)生，這與杜鵑花科植物分離出的部分真菌特征相似，但是具體屬于哪種真菌還需從分子生物學(xué)角度做進(jìn)一步的鑒定。

參考文獻(xiàn)

[1] 趙子峰，沙偉，趙子云.我國(guó)的杜香屬植物及杜香屬植物的應(yīng)用[J].生物學(xué)教學(xué)，2006，31（04）：8-9.

[2] 孟彩云，巴俊杰，畢力格.HPLC法測(cè)定細(xì)葉杜香中熊果酸的含量[J].中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2010（01）：51-52.

[3] 王曉琴，渠弼.細(xì)葉杜香中的化學(xué)成分[J].中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2010（01）：53-54.

[4] 吉林省中醫(yī)中藥研究所.長(zhǎng)白山植物藥志[M].長(zhǎng)春： 吉林人民出版社，1982：863-864.

[5] 姜云天，陳艷秋，朱俊義，等.細(xì)葉杜香高效快繁體系建立及種質(zhì)試管保存研究[J].西南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2009， 31（02）：118-123.

作者簡(jiǎn)介：姜云天，碩士，通化師范學(xué)院生物系，講師，研究方向：植物生理與生態(tài)的教學(xué)。