降解型長效孕激素緩釋注射埋植劑的制備方法

邵海浩宋斌陳旭峰王鳳英（.上海市計劃生育科學研究所 上海 0003; .上海達華藥業有限公司 上海 074)

降解型長效孕激素緩釋注射埋植劑的制備方法

邵海浩1宋斌2陳旭峰1王鳳英1
（1.上海市計劃生育科學研究所 上海 200032; 2.上海達華藥業有限公司 上海 202174)

目的：研究降解型長效孕激素緩釋注射埋植劑的制備方法。方法：以左旋聚乳酸及己內酯改性聚乳酸來調節含有孕激素微球的降解速率，以溶媒揮發法為制劑的制備方法。結果及結論：經優化改良后，制得的制劑分散性好，二氯甲烷殘留量符合國家藥典標準，制劑體外釋放實驗結果表明，3個月后仍能穩定釋放達40 μg。

孕激素 左旋聚乳酸 緩釋 溶媒揮發法 注射埋植劑

左旋聚乳酸 （poly L-lactic acid，PLLA） 是一種新型的并廣泛應用于醫學領域的生物可降解高分子材料，其具有良好的生物相容性，在體內代謝最終產物為二氧化碳和水，代謝的中間產物乳酸也是體內正常代謝的產物，對人體不會產生不良反應，使用非常安全[1]。但僅依靠PLLA的分子量及其分布來調節其降解速度具有很大的局限性，所以，應用聚乳酸及改性聚乳酸等生物醫學工程高分子材料在緩釋微球注射制劑方面是非常有前途的，對PLLA及改性聚乳酸的深入研究是很有意義的[2]。孕激素，如左炔諾孕酮（levonorgestrel，LNG）， D-甲炔諾酮、左旋18-甲炔諾酮、左旋甲基炔諾酮、左旋甲基炔諾孕酮、左旋甲炔諾酮等，是目前應用較廣的一種避孕藥，它可以抑制排卵并阻止孕卵著床，同時使宮頸黏液濃度增大，阻止精子前進，主要用作探親避孕藥和緊急避孕藥，也可用于治療月經不調，子宮功能性出血及子宮內膜異位癥等。但目前市售的口服避孕藥，對于藥物用量及時間要求繁瑣，漏服則會導致突破性出血甚至避孕失敗。

本文研究一種降解型長效孕激素緩釋注射埋植劑的制備方法，單純聚乳酸作為釋藥載體其溶蝕速率較快，15 d左右基本降解完畢[3]，本研究應用PLLA及己內酯改性聚乳酸來調節含有孕激素微球的降解速率，使其可以達到穩定緩釋3個月。

1 材料與方法

1.1 材料

PLLA、己內酯改性聚乳酸（山東省醫療器械研究所）；左炔諾孕酮（北京紫竹藥業）；聚乙烯醇、二氯甲烷、乙腈、吐溫-80（上海天蓮精細化工有限公司）；高效液相色譜儀（日本島津SHIMADZU LC-20A）；氣相色譜儀（日本島津SHIMADZU GC2010, TurboMatrix HS40頂空分析自動進樣器）。

1.2 制備方法

本研究的降解型長效孕激素緩釋注射埋植劑選用溶媒揮發法，操作步驟如下：將含有左炔諾孕酮與PLLA及己內酯改性聚乳酸中的1種或2種溶于二氯甲烷中[4]，在攪拌條件下滴入聚乙烯醇溶液中，在25 ℃下高純氮吹5 h以揮發二氯甲烷，然后經常規方法從混懸液中收集微球，無菌處理后灌裝，即得降解型長效孕激素緩釋注射埋植劑。

1.3 體外釋放實驗

將適量緩釋注射埋植劑混懸于緩沖液中，將裝有混懸液的半透膜裝置置于125 ml廣口瓶內，瓶內裝有介質50 ml超純水，再置于37 ℃的恒溫水浴箱內，振幅6 cm，速度60 r/min。每24 h取出，測量釋放液并更換新的介質，釋放量可接受范圍在體外釋放35~70 μg/d，釋放液用HPLC檢測。

1.4 緩釋注射埋植劑含量測定

采用HPLC分析測定緩釋注射埋植劑中孕激素的含量，取50 mg注射劑加入10 ml乙腈內，超聲后加甲醇定容，取上層清液離心，速度4 000 r/min，離心后移取適量溶液至100 ml甲醇中定容，定容后取樣進針。

體外釋放及含量測定實驗HPLC 條件：將流動相調整為甲醇與水80：20（v/v），將梯度程序調整為等度，流速為1 ml/min，波長為240 nm，柱溫35 ℃，進樣量為80 nl，出峰時間為6.7 min，采集時間為10 min。

1.5 二氯甲烷殘留量測定

取10 mg注射埋植劑放入容量瓶內，加入4 ml水，密封，超聲震蕩后放入水浴鍋內加熱，取上層氣體1 ml進樣，采用氣相色譜儀分析。

1.5.1 溶液制備

對照儲備溶液的制備：精密稱取環氧乙烷50 mg，置25 ml容量瓶中，加超純水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 ml溶液，置50 ml容量瓶中，加超純水稀釋至刻度，搖勻，作為對照儲備溶液。

對照溶液的制備：精密量取2 ml對照儲備溶液，置100 ml容量瓶中，加超純水稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。精密量取5 ml對照溶液，置20 ml頂空瓶中，密封。

供試品溶液的制備：取本品1根，抽出T狀縱臂后精密稱定，用刀片將IUD橫向切開，將藥物核心與不透明膜剝離，置于20 ml頂空瓶中，精密加入超純水5 ml，振搖，密封，作為供試品溶液。

1.5.2 色譜條件

柱溫：起始溫度20 ℃，保持7 min，FID檢測器溫度為260 ℃，進樣口溫度為200 ℃，分流比30：1，載氣為高純氮氣。

頂空條件：爐溫為80 ℃，平衡時間為30 min，傳輸系統溫度為60 ℃，傳輸管溫度為140 ℃，加壓時間為10 s，取樣時間為5 s，樣品傳輸時間為20 s。

1.5.3 測定方法

對照品、樣品供試液依法進樣，按外標法以峰面積計算，即得。含二氯甲烷不得超過0.01%。

2 結果

2.1 孕激素緩釋注射埋植劑的處方篩選

2.1.1 PLLA分子量對包封率的影響

PLLA作為緩釋注射埋植劑的主要包封材料，其分子量直接影響到注射劑的包封率，隨著PLLA分子量的增大，其黏度也隨之提高，包封率相應提高，但若PLLA分子量過大，其黏度導致孕激素無法充分混懸于混懸液中，從而導致包封率降低，分子量與包封率的研究數據見表1。

表1 分子量與包封率

2.1.2 內酯改性聚乳酸/ PLLA比例對包封率的影響

相同分子量的PLLA與己內酯改性聚乳酸的不同比例會影響到注射埋植劑的包封率，己內酯改性聚乳酸在疏水性上占有優勢，但是隨著己內酯改性聚乳酸的比例不斷增加，會導致包封率下降，并導致降解速率過慢。已內酯改性聚乳酸/ PLLA比例對釋放周期的影響見表2。

表2 已內酯改性聚乳酸/ PLLA比例對釋放周期的影響

2.2 制備工藝驗證

此制備方法采用的溶媒揮發法經過改良優化，可以得到包封率在80%的緩釋制劑，所得制劑微球外觀平滑，表面無左炔諾孕酮殘留。

批次20140820的體外釋放結果:取分子量為2 000的PLLA 1 g，加1：1的己內酯1 g，加左炔諾孕酮10 mg，二氯甲烷40 ml。包封率為82.4%，二氯甲烷的殘留量符合國家標準，微球的均一性也達到了制劑的質量標準。體外釋放90 d的驗證結果見圖1。

圖1 批次20140820的體外驗證

2.3 體外釋放實驗

本研究顯示，緩釋注射埋植劑加入混懸液后對其產生聚集抑制作用，對其體外釋放效果有明顯提高。本研究的緩釋注射埋植劑在前3 d突釋，10 d之后釋放量趨于平緩，左炔諾孕酮呈現持續平穩釋放，70 d后釋放量降低至40 μg，并持續釋放3個月。

2.4 二氯甲烷殘留量結果

2.4.1 制備時間對二氯甲烷殘留量的影響

以同樣的方法、同樣的投料量，不同的高純氮吹氣時間，制備3批注射埋植劑，以測定制備時間對二氯甲烷殘留量的影響。每批測定3次，結果見表3。

表 3 制備時間對二氯甲烷殘留量的影響

結果表明，該法制備的制劑在5 h的二氯甲烷殘留量均小于0.06%，符合藥典規定，故采取高純氮吹氣5 h的制備方法。

2.4.2 3批固定制備時間制劑二氯甲烷殘留量的測定

測定3批固定制備時間制劑的二氯甲烷殘留量，每批測定3次，結果見表4。

表 4 固定制備時間不同批次制劑的二氯甲烷殘留量

結果顯示，該法制備的制劑中二氯甲烷的殘留量均小于0.06%，符合國家藥典規定，故本制備方法可以實施。

3 結論

本研究已申請國家專利《長效孕激素緩釋注射埋植劑及其制備方法》，申請號：201210052937.4。在優化制劑工藝的同時又使得制劑分散性較好，二氯甲烷殘留量符合國家藥典規定[5]，制劑可穩定釋放3個月以上。本研究的聚合材料經藥物緩釋一段時間后，可降解為無毒安全的小分子并被人體吸收，制劑經注射后可解決女性經口服帶來的繁瑣步驟并可避免口服制劑給人體其他器官帶來的潛在危害。本文所標的左炔諾孕酮制劑作為將來臨床應用的又一選擇。它的避孕有效率和制劑的穩定性在動物試驗中已經得到了肯定，而且本項目得到了美國比爾蓋茨基金的資助

本實驗需要進一步探討和研究的是：①微球尺寸的均一，是制劑質控的重要標準之一，因為攪拌速度和溫度的控制，對微球的形成會有很大的影響。②溶劑殘留量控制也是本制劑的關鍵之一，加氮氣量的大小、溫度、時間的長短，均會影響到溶劑的殘留。③輔料和藥物降解速率的等同度，是可能面臨的一個問題。

[1] 樊國棟, 陳佑寧, 張光華. 醫用聚乳酸類高分子材料的應用[J]. 中國組織工程研究與臨床康復, 2007, 11(18): 3617-3620.

[2] 張海龍, 高玲美, 邵洪偉. 聚乳酸載藥微球的制備及應用研究進展[J]. 西北藥學雜志, 2010, 25(2): 158-160.

[3] 符旭東, 高永良. 緩釋微球的釋放度試驗及體內外相關性研究進展[J]. 中國新藥雜志, 2003, 12(8): 608-6l1.

[4] Vichaibun V, Chulavatnatol M. A new assay for the enzymatic degradation of polylactic acid[J]. Sci Asia , 2003(29): 297-300．

[5] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典二部（2010版）[M]. 北京:中國醫藥科技出版社, 2010: 61-65．

5種常見癌癥最新篩查指南

5月19日，美國內科醫師協會在《Annals of Internal Medicine》上刊出一份最新的常見癌癥篩查指南，并強烈推薦本國醫生使用。與以往指南相比，新的篩查建議更強調針對無特異風險的普通人群，更關注篩查方案的有效性，以避免假陽性結果帶來不必要的進一步診治。由于出發點不同，其中部分建議與以往指南、我國指南差異較大，摘譯重點如下，以供讀者探討。

乳腺癌。① 對40~49歲、無特異性風險的女性，告知、討論個體乳房X射線篩查的獲益和危害；對告知后仍要求篩查者，行2年1次的乳房X射線檢查。② 對50~74歲女性，鼓勵行2年1次的乳房X射線檢查。③ 在40歲以下或75歲以上的女性，或健康狀態欠佳、預期壽命少于10年的女性，不鼓勵行乳腺癌篩查。④ 對任何年齡的、無特異風險的女性，不使用MRI或層析成像進行篩查，取消每年1次的乳房X射線檢查。

宮頸癌。① 對小于21歲女性，不進行宮頸癌篩檢。② 對21~29歲（已有性生活）女性，每3年1次宮頸細胞涂片檢查（注：我國為每年1次）。③ 對30~65歲女性，每5年1次宮頸細胞涂片+HPV檢測。④ 在30歲以下女性，不建議行HPV檢測。⑤ 65歲以上的女性中，有連續3次細胞學檢查陰性結果或連續2次細胞學檢查陰性且近10年HPV檢測陰性（要求最近一次檢測在5年內）者，可停止篩檢。⑥ 在任何年齡，因宮頸癌行子宮切除術和宮頸切除者，不再行宮頸癌篩檢。⑦ 不使用骨盆雙手檢查進行宮頸癌篩查。

結直腸癌。① 對50~75歲患者，建議任選以下一種篩查方式：每年1次高靈敏性的大便潛血檢查FOBT或糞便免疫熒光檢查FIT；每5年1次乙狀結腸鏡檢查；每3年1次高靈敏性的FOBT或FIT，聯合每5年1次的乙狀結腸鏡檢查；每10年1次結腸鏡檢查。② 對以上4種提及的篩查方式，篩查不超出推薦的頻率。③ 對10年內行結腸鏡篩檢的成人患者，不再行間斷的糞便檢查或乙狀結腸鏡檢查。④ 對小于50歲或大于75歲患者，以及健康狀態欠佳、預期壽命小于10年的患者，不再行結直腸癌篩檢。

卵巢癌。對無特異風險女性，不進行卵巢癌篩檢。

前列腺癌。① 50~69歲男性中，對主動詢問基于PSA的前列腺癌篩查術，告知其PSA檢測的局限性和潛在的風險。② 對50~69歲男性，未進行相關告知討論者和沒有表現出明確篩查意向者，不予進行PSA檢測。③ 對小于50歲或大于69歲的男性，以及預期壽命小于10年者，不進行PSA檢測。

美國內科醫師協會表示，新的篩查建議，不可避免將導致一些癌癥患者的漏診，但如果按以往的篩檢指南，以檢出率最大化為目標，則會因為過度治療、過度診斷而對更廣泛的群體產生損害。

（摘自《醫學界》）

A method for the preparation of degradable long-acting progesterone sustained-release injectable implant

SHAO Haihao1, SONG Bin2, CHEN Xufeng1, WANG Fengying1
（1. Shanghai Institute of Planned Parenthood Research, Shanghai 200032, China; 2. Shanghai Dahua Pharmaceutical Co. Ltd., Shanghai 202174, China)

Objective: To establish a method for the preparation of degradable long-acting progesterone sustainedrelease injectable implant. Methods: The degradation rate of microspheres containing progesterone was regulated by poly-L-lactic acid and caprolactone-modified polylactic acid. The implant was prepared by solvent evaporation. Results: The prepared formulation showed an excellent dispensability and the residue of methylene chloride conformed to Chinese pharmacopoeia standard. The results of in vitro release of the formulation demonstrated that the stable release could be maintained at 40μg within three months.

progesterone; poly L-lactic acid; controlled –release; solvent evaporation; implantable injection

R944.9

A

1006-1533(2015)11-0067-03

2015-05-08）