藏木香組培快繁技術(shù)研究

曾鈺婷等

摘要 由于長期對藏木香野生資源的采挖，使其現(xiàn)已瀕臨滅絕，通過組培快繁技術(shù)進(jìn)行繁殖是解決藏木香資源短缺的有效途徑之一。以藏木香的芽為外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)與植株再生的研究。結(jié)果表明：藏木香的繼代增殖培養(yǎng)基以MS+BA 1.4 mg/L+NAA 0.5 mg/L為宜，每個(gè)外植體可平均產(chǎn)生4.5個(gè)芽；生根培養(yǎng)基以1/2 MS為宜，生根率最高可達(dá)96%。

關(guān)鍵詞 藏木香；離體培養(yǎng)；植株再生

中圖分類號 S567.23+9 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2015）14-0060-01

藏木香，藏名瑪奴，為菊科多年生草本植物，株高1.5 m左右。根圓錐狀或塊狀，木質(zhì)化。莖直立，中上部有分枝。葉披針形，葉緣鋸齒狀，基生葉有長柄，莖生葉無柄，葉背及莖被短絨毛，花黃色，頭狀花序，花果期7—9月，以根入藥。可止痛、安胎、健脾和胃、調(diào)氣解郁，用于治療肋間神經(jīng)痛、胸壁挫傷、岔氣作痛、胎動不安、慢性胃炎、胃腸功能紊亂等癥[1-5]。

目前，藥用植物資源需求量劇增，也是藏藥材資源趨于瀕危的重要因素。保護(hù)藏藥材資源的修復(fù)和再生，防止退化和滅絕，是保障藥用植物資源的可持續(xù)利用和藏藥產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵措施。隨著國內(nèi)外藥用需求量的增大，過度采集導(dǎo)致了藏木香野生資源的急劇下降，價(jià)格大幅上升，而價(jià)格上升更進(jìn)一步刺激了掠奪性開采[1-2，4-6]，導(dǎo)致野生資源更趨日益稀少，處于瀕危狀態(tài)。目前，有關(guān)藏木香的研究主要集中在人工栽培技術(shù)及藥用成分生理、生化研究方面，而關(guān)于藏木香組培快繁技術(shù)的研究尚未見報(bào)道。本研究以藏木香芽為外植體，建立了藏木香離體再生體系，對藏木香實(shí)現(xiàn)資源保存和人工種植，使天然更新與人工撫育相結(jié)合，使藏藥資源的開發(fā)利用與保護(hù)步入良性發(fā)展的軌道，才能達(dá)到經(jīng)濟(jì)、社會、生態(tài)效益的統(tǒng)一[1-2，7]。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)

試驗(yàn)地點(diǎn)設(shè)在西藏農(nóng)牧科學(xué)院蔬菜研究所組培室，試驗(yàn)時(shí)間為2014年4月至2015年1月。

1.2 試驗(yàn)材料

供試材料為從西藏林芝地區(qū)采集的藏木香種子[1-3，6-8]。基本培養(yǎng)基為MS，瓊脂為0.7%，碳源為3%蔗糖，并在121 ℃條件下高壓滅菌20 min[1-5]。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 藏木香無菌體系的建立。取西藏農(nóng)牧科學(xué)院蔬菜研究所科技示范園區(qū)溫室內(nèi)培養(yǎng)逾1個(gè)月的藏木香幼苗，剪去葉子和根，留芽，用70%酒精迅速過一下，用無菌水沖洗3遍，再用0.1%升汞表面消毒3～5 min，倒去消毒液，用無菌水沖洗5～6遍，接種在MS培養(yǎng)基中置12 h光周期，1 500 lx光強(qiáng)下，（21±1）℃的光照培養(yǎng)室中培養(yǎng)[1-4]。

1.3.2 藏木香不定芽的增殖培養(yǎng)。為篩選最佳的增殖培養(yǎng)基，將經(jīng)芽萌發(fā)的藏木香不定芽接種于MS附加不同濃度的6-BA與NAA組合的培養(yǎng)基中，30 d后統(tǒng)計(jì)其增殖系數(shù)。光周期12 h/d，光強(qiáng)1 500 lx，溫度（21±1）℃。

1.3.3 藏木香不定芽的生根培養(yǎng)。將藏木香不定芽接種到添加不同濃度IAA的MS和1/2 MS培養(yǎng)基中進(jìn)行根的誘導(dǎo)，30 d后觀察其生根情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體發(fā)芽情況

藏木香幼苗的芽在接種15 d后開始萌發(fā)生長，由于幼苗腋芽和土壤接觸帶有很多雜菌，不能夠徹底進(jìn)行外植體消毒，外植體污染率達(dá)到60%。

2.2 激素對藏木香不定芽增殖的影響

從表1可以看出，為了繁殖大量的藏木香有效的無菌試管苗，把獲得的無菌不定芽接種于增殖培養(yǎng)基中，每30 d轉(zhuǎn)接繼代1次，研究6-BA、NAA植物生長調(diào)節(jié)劑的組合配比對藏木香不定芽增殖的影響。結(jié)果表明，不定芽萌發(fā)可形成1～6個(gè)叢生芽，增殖系數(shù)以MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0. 5 mg/L最大，達(dá)4.60，但植株葉片發(fā)生卷曲，而MS+6-BA1.4 mg/L+NAA 0. 5 mg/L培養(yǎng)基中且單株增殖至3～6個(gè)植株，增殖系數(shù)為4.50，且植株生長健壯。因此，對于藏木香不定芽的增殖，MS+6-BA 1.4 mg/L+NAA 0.5 mg/L是最好的激素組合。

2.3 生根培養(yǎng)

當(dāng)藏木香不定芽長至1.5 cm以上，帶有2～3個(gè)葉片時(shí)轉(zhuǎn)接到添加不同濃度IAA的MS和1/2 MS的培養(yǎng)基中，結(jié)果如表2所示。可以看出，藏木香不定芽在添加不同濃度IAA的MS和1/2 MS培養(yǎng)基中均產(chǎn)生根系，其中在1/2 MS的培養(yǎng)基中均能生根，生根率最高達(dá)96%。

3 結(jié)論與討論

當(dāng)細(xì)胞分裂素6-BA的濃度太高時(shí)，藏木香植株葉片會發(fā)生嚴(yán)重的卷曲現(xiàn)象[1-6]，這可能是細(xì)胞分裂素的濃度過高所致；而細(xì)胞分裂素6-BA的濃度太低時(shí)無菌苗不會發(fā)生增殖。因此，在藏木香無菌苗增殖培養(yǎng)中要嚴(yán)格控制細(xì)胞分裂素6-BA的濃度。

該試驗(yàn)結(jié)果表明，利用組織培養(yǎng)方法快速繁殖藏木香無性系是可行的，可能成為藏木香快速繁殖的一個(gè)途徑[1-8]。為使試驗(yàn)成果應(yīng)用到實(shí)際藥材生產(chǎn)中去，還需解決降低試管苗成本和提高試管苗成活率等問題，以進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)從無性繁殖系的快速繁殖到藏木香育苗工廠化，為藏木香生產(chǎn)實(shí)踐開辟新道路。

4 參考文獻(xiàn)

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