兩種培養方法聯合檢測在女性生殖道支原體感染中的應用

代 莉，吳鴻君，司志霖

（遂寧市第一人民醫院檢驗科，四川遂寧629000）

支原體是引起人類泌尿生殖道感染的重要病原體，是能在無生命培養基中生長繁殖的最小原核細胞型微生物，可引起女性陰道炎、宮頸炎及不孕癥等［1］。所以，如果能夠準確檢測人型支原體（Mh）和解脲支原體（Uu）將對臨床臨床診斷和治療有非常大的幫助。已有的文獻報道表明，支原體培養應當包括液體增菌和固體平板培養這2個步驟才算完整［2］，但是目前臨床上普遍采用的方法是單一的液體培養法，用于Uu和Mh的培養檢測。僅僅通過第一步的培養結果，從而報告支原體感染的陽性或者陰性是不嚴謹的，非常容易造成臨床上的誤診、誤治，應引起醫務工作者的高度重視。所以聯合應用液體培養法與固體培養法檢測具有重要意義，筆者對兩種方法聯合檢測的臨床意義進行了探討分析，現將本研究的結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年2月至2013年5月于本院婦產科門診就診的女性患者，這些患者均為疑似生殖道支原體感染，共340例，年齡22～56歲。

1.2 標本采集 按《全國臨床檢驗操作規程》采集，由臨床醫生取宮頸或陰道后穹窿分泌物立即送檢。

1.3 儀器與試劑 選用普通的光學顯微鏡（CX21奧林巴斯）與HF151UVCO2培養箱。支原體固體培養平板由中山達安基因有限公司提供；液體培養基由鄭州安圖綠科生物工程有限公司提供。

1.4 方法 嚴格按試劑說明書進行檢測及結果判斷。

1.5 統計學處理 采用SPSS19.0統計學軟件進行統計學分析。計量資料以百分率表示，組間率的比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 支原體的檢出情況 經液體培養鑒定，340例生殖道疑似支原體感染者的標本中共檢出支原體陽性177例，總檢出率為52.1%（177／340），其中檢出的Uu單一感染者144例，檢出率為42.4%（144／340）；Mh 單 一 感 染 者 檢 出9 例，檢 出 率 為2.6%（9／340）；Uu和Mh雙重感染檢出24例，檢出率為7.1%（24／340），Uu檢出率明顯高于Mh檢出率。經固體培養法，檢出支原體陽性148例，總檢出率為43.5%。見表1。

表1 兩種培養方法檢測結果（n）

2.2 藥敏試驗 分離出的支原體對11種抗菌藥物的耐藥率見表2

表2 177例陽性標本對11種抗菌藥物的耐藥率（%）

3 討 論

支原體介于細菌與病毒之間，是一類沒有細胞壁的原核細胞型微生物，是能在無生命培養基中繁殖的最小微生物。致病性支原體對人體上皮細胞具有極強的親和性，支原體定位于人體呼吸道和生殖道黏膜，從而能造成黏膜的局部細胞損傷，這可能是其致病原因［3］。

目前人類泌尿生殖道中分離到的支原體致病力較強的主要是Uu和Mh。Mh在泌尿生殖道中分解精氨酸，支原體中Uu在生長過程中分解尿素。國內外商品化的支原體液體培養基所依據的原理如下，Uu、Mh對尿素和精氨酸的分解，使液體培養基pH 值上升，導致指示劑呈紅色來提示支原體的生長。液體培養法簡便快速，還可以提供陽性標本的藥敏實驗結果，為臨床醫生合理使用抗菌藥物提供依據。但是由于是以化學反應來判斷支原體的有無。雖然試劑的研發者已經在里面添加了抑制革蘭陰性、陽性菌的藥物，但并不能抑制除支原體外所有微生物的生長。這導致了化學反應的特異性有限，會受到許多因素的干擾，試驗容易產生假陽性。所以，僅憑顏色的變化來判斷支原體的生長的方法是不準確的，并不能確定有支原體的生長，這種方法僅能作為支原體的初篩實驗。Uu 和Mh能夠于固體培養基上生長，同時形成特征性較強的菌落［4］，以此作為確診實驗比較繁瑣，難以掌握且缺乏較好的培養基［5］。筆者對兩種培養方法進行研究分析，固體培養法陽性率為43.5%，液體培養法檢出率為52.1%，經χ2檢驗，兩種檢測方法比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

本研究中，感染的支原體種類主要為Uu，而且以Uu單獨感染為主。Uu可引起宮內感染，導致胎兒或嬰兒多種問題，其傳播途徑主要是性傳播，并因慢性持續性感染導致男性和女性不育癥［6］。本實驗中Uu和Mh混合感染不多，Mh單獨感染較少，結果與其他文獻報道一致［7－9］。由于支原體無細胞壁結構，因此β－內酰胺類藥物對其治療無效，四環素類、大環內酯類和喹諾酮類藥物在這類支原體的感染治療中較為常用，但抗菌藥物的濫用易誘導生成支原體耐藥株［10］。從藥敏試驗結果來看，Mh對美滿霉素、強力霉素耐藥率較低，Uu對美滿霉素、強力霉素、交沙霉素耐藥率較低。已有的國外研究表明，Mh對16環Jos 較敏感，而對14、15 環大環內酯藥物ERY、Rox、AZM 具有“天然耐藥性”［11］。本研究的結果與其一致。本實驗結果中，四環素類藥物敏感性較好，傳統治療泌尿生殖道感染的一些抗菌藥物如喹諾酮類氧氟沙星、司帕沙星、加替沙星，Uu、Mh對其都具有較高的耐藥率（22.2%～71.7%），可能與此類藥物濫用現象嚴重有關，也可能是病原體獲得tetM 耐藥基因所致［12］。從研究結果來看，不經支原體培養及藥敏實驗而經驗用藥很容易導致支原體感染治療的失敗。對有泌尿道感染癥狀的患者進行支原體培養及藥敏試驗十分重要，在臨床應根據藥敏有選擇地使用。

綜上所述，用固體培養法提高檢驗特異性，用液體培養法進行藥敏實驗，兩者聯合應用是控制支原體培養假陽性的可靠方法，同時治療時根據藥敏試驗結果選擇抗菌藥物，是避免經驗用藥的無效性和減緩耐藥株產生的有效方法，具有較好的臨床應用價值。

［1］明巖.妊娠期女性泌尿生殖道Uu 與Mh 感染調查及藥敏分析［J］.中華醫院感染性雜志，2010，20（1）：1625－1626.

［2］MurrayPR.Manual of ClinicalMicrobiology［M］.8th ed.Washington：ASM Press，2003.

［3］陳忠領，羅凱亮，劉甦，等.女性生殖道支原體感染及耐藥性分析［J］.國際檢驗醫學雜志，2011，32（5）：599－600.

［4］劉長德，張艷，殷敏，等.解脲脲原體和人型支原體培養方法的比較研究［J］.現代檢驗醫學雜志，2008，23（6）：90－91.

［5］楊曉華，譚南，林愛心.泌尿生殖道支原體液體培養法檢測的實驗評價［J］.檢驗醫學與臨床，2010，7（6）：531－532.

［6］張文波，吳移謀，尹衛國，等.解脲脲原體耐氟喹諾酮類藥物突變體的分離及其突變位點的研究［J］.中華醫學雜志：英文版，2002，115（10）：1573－1575.

［7］張有忠.泌尿生殖道支原體和脲支原體感染及耐藥性分析［J］.中華醫院感染學雜志，2010，20（16）：2527－2528.

［8］李進，黎敏，魯衛平.8546例泌尿生殖道標本解脲支原體和人型支原體檢測及藥敏分析［J］.國際檢驗醫學雜志，2014，35（20）：2762－2764.

［9］王艷軍，雷海云.烏魯木齊市2560例泌尿生殖道支原體感染及耐藥性分析［J］.國際檢驗醫學雜志，2014，35（9）：1220－1221.

［10］陳紅萍.婦科門診患者生殖道解脲脲支原體感染的流行病學調查和藥敏分析［J］.中華醫院感染學雜志，2010，20（10）：1485－1487.

［11］Pereyre S，Gonzalez P，De Barbeyrac B，et al.Mutations in 23S rRNA account for intrinsic resistance to macrolides in Mycoplasma hominis and Mycoplasma fermentans and for acquired resistance to macrolides in M.hominis［J］.Antimicrob Agents Chemother，2002，46（10）：3142－3150.

［12］Blanchard A，Crabb DM，Dybvig K，et al.Rapid detection of tetM in Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum by PCR：tetM confers resistance to tetracycline but not necessarily to doxycycline［J］.FEMS Microbiol Lett，1992，74（2／3）：277－281.