墨旱蓮化學(xué)成分的分離鑒定*

馬　迪，韓立峰，劉二偉，夏明輝，張　祎，王　濤（.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院天津30093；.天津市中藥化學(xué)與分析重點實驗室，天津30093）

墨旱蓮化學(xué)成分的分離鑒定*

馬迪1，韓立峰2，劉二偉2，夏明輝2，張祎2，王濤2
（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院天津300193；2.天津市中藥化學(xué)與分析重點實驗室，天津300193）

［目的］對墨旱蓮中的化學(xué)成分進行分離鑒定。［方法］采用正相硅膠、反相ODS（十八烷基鍵合硅膠）、凝膠等柱色譜及制備型高效液相色譜（HPLC）法分離純化，并利用質(zhì)譜分析（MS）、核磁共振波譜（NMR）等方法對化合物結(jié)構(gòu)進行鑒定。［結(jié)果］從墨旱蓮體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇提取物中分離鑒定了9個化合物，分別鑒定為2，2′；5′，2″-三聯(lián)噻酚（1）、5-醛基-2，2′；5′，2″-三聯(lián)噻酚（2）、5-羥甲基-2，2′；5′，2″-三聯(lián)噻酚（3）、2，2′；5′，2″-三聯(lián)噻酚-5-羧酸（4）、5-醛基-5′-（3-丁烯-1-炔基）-2，2′-二聯(lián)噻酚（5）和5-丁-1′-炔-3′-羥基-4′-氯-（2-戊-1″，3″二炔）-噻酚（6），二氫獼猴桃內(nèi)酯（7），黑麥草內(nèi)酯（8），原兒茶酸乙酯（9）。［結(jié)論］化合物6～9為首次從鱧腸屬植物中分離得到。

墨旱蓮；化學(xué)成分；結(jié)構(gòu)鑒定

墨旱蓮，為菊科植物鱧腸（Eclipta prostrata L.）的干燥全草，具有滋補肝腎、涼血止血之功效［1-2］。現(xiàn)代藥理研究表明，墨旱蓮具有止血［3］、保肝［4］、抗腫瘤［5］，治療血小板減少性紫癜［6-7］，抗疲勞［8］，抗失眠［9］等作用。化學(xué)成分研究表明其主要含有香豆草醚類、三萜類、黃酮類、噻酚類以及揮發(fā)油、有機酸等化學(xué)成分［10-11］。筆者對墨旱蓮的化學(xué)成分進行了分離鑒定，從該植物乙醇提取物的石油醚和乙酸乙酯萃取部分中分離得到9個化合物，經(jīng)質(zhì)譜（MS）和核磁共振波譜（MMR）方法對這些化合物進行了結(jié)構(gòu)鑒定，6～9為首次從鱧腸屬植物中分離得到。

1　儀器與材料

布魯克AVANCEⅢ500超導(dǎo)核磁共振波譜儀［四甲基硅烷（TMS）為內(nèi)標(biāo)，瑞士Bruker公司］；安捷倫6430系列三重四級桿質(zhì)譜儀（美國Agilent公司）。分析型高效液相色譜儀［Agilent 1200 series HPLC（美國Agilent公司）］；色譜柱：Agilent zorbax C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），制備型高效液相色譜儀［Agilent 1200 series HPLC（美國Agilent公司），G1361A，G1365D］；制備柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm×21.2 mm，7μm）。

柱層析硅膠（青島海洋化工廠分廠），開放C18柱色譜填料為ODS-A（120 A，50 μm，日本YMC公司），Sephadex LH-20（美國GE公司），可剪裁薄層層析板GF254（天津思利達科技有限公司），展開劑：氯仿-甲醇（系列比例），薄層顯色劑：10%的硫酸乙醇溶液；分析純石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇及色譜純甲醇等有機溶劑（天津市康科德科技有限公司），分析純氯仿（天津市江天化工技術(shù)有限公司）。

墨旱蓮藥材購于河北安國，經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)張麗娟教授鑒定為菊科植物鱧腸（Eclipta prostrata L.）的干燥全草。

2　提取分離

墨旱蓮藥材20 kg，用70%乙醇回流提取，減壓回收濃縮，真空干燥得干膏2150g。取其中約1000g，先用水懸浮，用不同溶劑萃取，分別得石油醚（255g）、乙酸乙酯（150g）和水（600 g）萃取物。對石油醚萃取物進行硅膠柱層析分離，以石油醚-乙酸乙酯（100∶1→0∶100）進行梯度洗脫，薄層色譜（TLC）檢識合并相同流分，得到17個流分（Fr.1-17）。Fr.1經(jīng)反相高效液相色譜分離得到了化合物1（88mg）；Fr.5經(jīng)反相ODS柱色譜，乙腈-水（30∶70→100∶0）梯度洗脫，得到9個流分（Fr.5.1-9）。Fr.5.6（328mg）經(jīng)PHPLC分離得到化合物2（98mg）和5（45mg）。Fr.8經(jīng)反相ODS柱色譜，乙腈-水（20∶70→100∶0）梯度洗脫，得到7個流分（Fr.8.1-7）。Fr.8.3經(jīng)反相高效液相色譜分離得到化合物7（23mg）；Fr.8.7經(jīng)PHPLC分離得到化合物6（43 mg）。Fr.11經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜，甲醇洗脫，得10個流分（Fr.11.1-10）；Fr. 11.10經(jīng)PHPLC分離得到化合物3（61mg）。對乙酸乙酯萃取物進行硅膠柱層析分離，以二氯甲烷-甲醇（1∶0→0∶1）進行梯度洗脫，TLC檢識合并相同流分，得到15個流分（Fr.E1-15）。Fr.E5經(jīng)反相ODS柱色譜，甲醇-水（10∶90→100∶0）梯度洗脫，得到10個流分（Fr.E5.1-10）。Fr.E5.2經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜以及PHPLC等手段，分離得到了化合物8（22mg）和9（114mg）；同理，F(xiàn)r.E5.7經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜以及PHPLC等手段，分離得到了化合物4（17mg）。化合物1～9的結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1　墨旱蓮中分離得到的化合物

3　結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色粉末，易溶于甲醇。在正離子電噴霧電離-質(zhì)譜（ESI-MS）中，可以看到準(zhǔn)分子離子峰m/z（質(zhì)核比）：248.8［M+H］+，推測其分子量為248。1H-NMR［500 MHz，氘代氯仿（CDCl3）］譜中δ7.08［br s（寬單峰），2H］為3′和4′位質(zhì)子信號。δ7.02 ［2H，dd（雙二重峰），J=3.5，5.0 Hz，H-4、4″］，δ 7.17 （2H，dd，J=1.0，3.5 Hz，H-3、3″）和δ7.22（2H，dd，J= 1.0，5.0 Hz，H-5、5″），提示存在對稱結(jié)構(gòu)。具體碳譜數(shù)據(jù)如下δ：123.7（C-3、3″）、124.3（C-3′、4′）、124.5 （C-5、5″）、127.9（C-4、4″）、136.2（C-2′、5′）、137.1 （C-2、2″）。1H、13C-NMR譜數(shù)據(jù)與文獻［12］對照基本一致，確定化合物1為2，2′；5′，2″-三聯(lián)噻酚。

化合物2：黃色粉末，易溶于甲醇。在正離子ESI-MS譜中，可以看到準(zhǔn)分子離子峰m/z：276.9［M+H］+，推測其分子量為276。1H-NMR（500MHz，CDCl3）譜中δ9.86為5位醛基質(zhì)子信號；7.67［1H，d（二重峰），J=4.0 Hz］和δ7.24（1H，overlapped）為A環(huán)上4和3位氫信號；δ7.28（1H，overlapped）和δ7.27（1H，overlapped）分別為B環(huán)上H-4′和3′的信號；δ7.23（1H，overlapped），7.13（1H，d，J=4.0 Hz）和δ7.05（1H，dd，d，J=4.0，5.0 Hz）分別為C環(huán)上H-3″，5″和4″的信號。碳譜數(shù)據(jù)如下δ：124.0（C-3）、124.5 （C-3″）、124.7（C-5″）、125.4（C-4′）、126.9（C-3′）、128.1（C-4″）、134.5（C-2′）、136.4（C-5′）、137.3（C-4）、139.2（C-2″）、141.6（C-5）、146.8（C-2）、182.4（5-CHO）。核磁數(shù)據(jù)與參考文獻［13］對照，基本一致，可確定化合物2為5-醛基-2，2′；5′，2″-三聯(lián)噻酚。

化合物3：淡黃色粉末，易溶于甲醇。在正離子ESI-MS譜中，可以看到準(zhǔn)分子離子峰m/z：278.8［M+H］+，推測其分子量為278。1H-NMR（500MHz，CDCl3）譜的低場區(qū)有7個氫。7.22（1H，d，J=5.0Hz），δ7.17（1H，d，J=3.0 Hz）和7.02（1H，overlapped）分別為C環(huán)上H-5″，3″和4″位氫信號；δ7.06（1H，d，J= 3.5 Hz）和δ7.05（1H，d，J=3.5 Hz）分別為B環(huán)上H-4′和3′的信號；δ7.03（1H，overlapped）和6.92（1H，d，J=3.0 Hz）分別為A環(huán)上H-3和4的信號。在中低場區(qū)有一個明顯的寬單峰：δ4.81（2H，br s，5-CH2OH）。13C-NMR（125 MHz，CDCl3）譜中總共顯示有12個碳信號，根據(jù)HSQC，推知碳譜中有重疊信號，具體碳譜數(shù)據(jù)如下δ：60.2（5-CH2OH）、123.3（C-3）、123.8（C-3″）、124.3（C-3′、4′）、124.5（C-5″）、126.3（C-4）、127.9（C-4″）、136.1（C-5′）、136.4（C-2′）、137.1（C-2″）、137.4（C-2）、143.1（C-5）。再結(jié)合文獻［14］，確證化合物3為5-羥甲基-2，2′；5′，2″-三聯(lián)噻酚。

化合物4：棕黃色固體。在正離子ESI-MS譜中，可以看到準(zhǔn)分子離子峰m/z：292.8［M+H］+，推測其分子量為292。1H-NMR［500 MHz，氘代甲醇（MeOD）］譜中7.68（1H，d，J=4.0 Hz）和δ 7.26（1H，d，J=4.0 Hz）分別為A環(huán)上H-4和3位氫信號；δ7.38（1H，dd，J=1.0，5.0 Hz），7.28（1H，dd，J=1.0，4.0Hz）和δ7.06（1H，dd，J=4.0，5.0Hz）分別為C環(huán)上H-5″，3″和4″的信號；δ7.30（1H，d，J=4.0 Hz）和7.19 （1H，d，J=4.0 Hz）分別為B環(huán)上H-3′和4′的信號。13C-NMR（125MHz，MeOD）譜中總共顯示有13個碳信號，根據(jù)HSQC和HMBC等二維譜可歸屬碳譜數(shù)據(jù)，具體碳譜數(shù)據(jù)如下：125.2（C-3）、125.4（C-3″）、125.7（C-3′）、126.4（C-5″）、127.2（C-4′）、129.2（C-4″）、134.1（C-5）、135.5（C-4）、136.1（C-2′）、137.7（C-2″）、139.4（C-5′）、144.9（C-2）、167.6（5-COOH）。再結(jié)合文獻［15］，確證化合物4為2，2′；5′，2″-三聯(lián)噻酚-5-羧酸。

化合物5：黃色粉末。在正離子ESI-MS譜中，可以看到準(zhǔn)分子離子峰m/z：248.9［M+H］+，推測其分子量為248。1H-NMR（500MHz，CDCl3）譜中δ9.86為5位醛基質(zhì)子信號；7.67（1H，d，J=4.0Hz）和δ7.24（1H，d，J=4.0Hz）為A環(huán)上4和3位氫信號；δ7.22（1H，d，J=4.0Hz）和δ7.14（1H，d，J=4.0Hz）分別為B環(huán)上H-3′和4′的信號；δ6.02（1H，dd，J=11.5，17.5 Hz，H-8′）；5.76（1H，dd，J=1.0，17.5Hz）和δ5.60（1H，dd，d，J=1.0，11.5Hz）為9′位的烯氫信號。具體碳譜數(shù)據(jù)如下δ：82.7（C-6′）、94.3（C-7′）、116.6 （C-8′）、124.6（C-3）、124.8（C-5′）、126.0（C-3′）、127.8（C-9′）、133.1（C-4′）、137.2（C-2′）、137.2（C-4）、142.1（C-5）、146.1（C-2）、182.5（5-CHO）。核磁數(shù)據(jù)與參考文獻［16］對照，基本一致，確定化合物5為5-醛基-5′-（3-丁烯-1-炔基）-2，2′-二聯(lián)噻酚。

化合物6：黃色固體。在正離子ESI-MS譜中，可以看到準(zhǔn)分子離子峰m/z：278.8［M+H］+，推測其分子量為278。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）譜的低場區(qū)有2個氫。δ7.10（1H，d，J=4.0Hz）和7.06（1H，d，δ=4.0Hz）分別為噻酚環(huán)上H-3和4位氫信號；中低場區(qū)可以觀測到：δ4.82（2H，dd，J=4.5，6.5Hz）為H-3′位氫信號；δ 3.79（1H，dd，J=4.5，11.5Hz）和3.73（1H，dd，J=6.5，11.5 Hz）分別為H-4′位的氫信號；在高場區(qū)有一個明顯的甲基峰信號：δ2.04（3H，s，H-5″）。13C-NMR（125MHz，CDCl3）譜中總共顯示有13個碳信號，具體碳譜數(shù)據(jù)歸屬如下δ：4.8（C-5″）、48.7（C-4′）、63.1（C-3′）、64.1（C-3″）、66.3（C-2″）、79.1（C-1′）、79.7（C-1″）、83.6（C-4″）、90.7（C-2′）、123.4（C-5）、124.5（C-2）、132.7（C-4）、133.6 （C-3）。再結(jié)合文獻［17］，確證化合物6為5-丁-1′-炔-3′-羥基-4′-氯-（2-戊-1″，3″二炔）-噻酚。

化合物7：黃色固體。在正離子ESI-MS譜中，可以看到準(zhǔn)分子離子峰m/z：181.1［M+H］+，推測其分子量為180。1H-NMR（500MHz，CDCl3）譜中δ5.65（1H，s）為A環(huán)上H-3位的烯氫信號；高場區(qū)可觀測到δ2.23（1H，br d，J=12.0 Hz，H-7a），1.73（3H，m，H-6a，6b，5a），1.47（1H，ddd，J=4.5，12.0，12.0 Hz H-7b）和δ 1.29（1H，m，H-5b）；此外低場區(qū)還可看到3個甲基信號：δ1.56（3H，s，H-8）、1.27（3H，s，H-9）、δ1.22（3H，s，H-10）。13C-NMR（125 MHz，CDCl3）譜中出現(xiàn)對應(yīng)的11個碳信號，根據(jù)HSQC和HMBC等二維譜進一步歸屬碳譜數(shù)據(jù)，具體數(shù)據(jù)如下δ：19.7（C-6）、24.2（C-10）、24.3（C-8）、29.8（C-9）、36.5（C-4）、40.1（C-7）、41.7（C-5）、87.4（C-7a）、112.4（C-3）、172.2（C-2）、182.7（C-3a）。再結(jié)合文獻［18］，確證化合物7為二氫獼猴桃內(nèi)酯。

化合物8：黃色油狀物。在正離子ESI-MS譜中，可以看到準(zhǔn)分子離子峰m/z：197.0［M+H］+，推測其分子量為196。1H-NMR（500MHz，MeOD）譜的低場區(qū)有1個烯氫信號：δ5.74（1H，s，H-3）；中低場區(qū)δ4.21（1H，m，H-6）為6位的連氧氫信號。高場區(qū)幾組特征信號，2組ddd峰：δ 2.41（1H，ddd，J=3.5，3.5，13.5 Hz，H-7a）、1.98（1H，ddd，J=3.5，3.5，14.5 Hz，H-5a）；和1組dd峰：δ1.52（1H，dd，J=3.5，14.5 Hz，H-5b）；1.74（1H，overlapped，H-7b）為2個亞甲基上的氫信號。此外，低場區(qū)還有3個明顯的單峰：δ1.27（3H，s，H-9）、1.40（3H，s，H-10）和1.76（3H，s，H-8），為3個甲基的氫信號。13C-NMR（125 MHz，MeOD）譜中總共顯示有11個碳信號。在低場區(qū)有3個碳信號：δ185.7和113.4為雙鍵碳信號；δ174.5為酯羰基信號。具體碳譜數(shù)據(jù)如下δ：27.0（C-10）、27.5 （C-8）、31.1（C-9）、37.2（C-4）、46.5（C-7）、48.0（C-5）、67.3（C-6）、89.0（C-7a）、113.4（C-3）、174.7（C-2）、185.7（C-3a）。核磁數(shù)據(jù)與參考文獻對照［19］，基本一致，確定該化合物8為黑麥草內(nèi)酯。

化合物9：白色無定形粉末。在正離子ESI-MS譜中，可以看到準(zhǔn)分子離子峰m/z：183.0［M+H］+，推測其分子量為182。在1H-NMR（500MHz，MeOD）譜低場區(qū)，可以看到一組ABX芳香氫質(zhì)子信號：δ7.43 （1H，d，J=2.0 Hz，H-2），7.42（1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-6），6.80（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），一組乙基氫質(zhì)子信號：δ4.29（2H，q，J=7.0 Hz，H-8）；δ1.35（3H，t，J= 7.0 Hz，H-9）。在13C-NMR（125MHz，MeOD）譜上出現(xiàn)6個相應(yīng)的芳香碳信號：δ122.9（C-1），117.4（C-2），146.2（C-3），145.7（C-4），115.9（C-5）和123.6 （C-6），一個羧基碳信號：δ168.5（C-7），一組乙基碳信號δ61.7（C-8），14.7（C-9）。經(jīng)1H、13C-NMR譜數(shù)據(jù)推測和文獻查閱［20］，確定化合物9為原兒茶酸乙酯。

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Isolation and identification of chemical constituents from Eclipta prostrata L.

MA Di1，HAN Li-feng2，LIU Er-wei2，XIA Ming-hui2，ZHANG Yi2，WANG Tao2
（1．First Teaching Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；2.Key Laboratory of Traditional Chinese Medicinal Chemistry and Analytical Chemistry of Tianjin，Tianjin 300193，China）

［Objective］To isolate the chemical constituents of Eclipta prostrata L.and elucidate their structures. ［Methods］The compounds were isolated by silica gel，ODS，Sephadex LH-20 column chromatography and PHPLC，and their structures identified by MS and NMR.［Results］Nine compounds were isolated from 70%ethanol extract of Eclipta prostrata L.and identified as 2，2'；5'，2''-terthiophene（1），α-formylterthienyl（2），5-hydroxymethyl-2，2'；5'，2''-terthiophene（3），2，2'；5'，2"-terthiophene-5-carboxylic acid（4），5'-carboxaldehyde-5-（3-butene-1-ynyl）-2，2'-bithiophene（5），4'-chloro-1'-（5-penta-1，3-diyn-1-yl-2-thienyl）-but-2'-yn-3'-ol（6），dihydroactinidiolide（7），loliolide （8）and protocatechoic acid ethyl ester（9），respectively.［Conclusion］Compounds 6-9 are obtained from Eclipta prostrata for the first time.

Eclipta prostrata L.；chemical constituents；structure identification

R284

A

1673-9043（2015）03-0169-04

10.11656/j.issn.1673-9043.2015.03.11

天津市高等學(xué)校科技發(fā)展基金一般資助項目（2012 0203）；高等學(xué)校博士學(xué)科點專項科研基金（20121210110007）。

馬迪（1982-），男，主管藥師，主要從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。

王濤，E-mail:wangt@263.net。

（2015-01-04）