人腦膠質(zhì)瘤中KAI1/CD82的表達及其臨床意義

賈軍等

[摘要] 目的 探討KAI1/CD82在人腦膠質(zhì)瘤中的表達及其與惡性程度的關(guān)系。方法 收集腦膠質(zhì)瘤病理132例，為膠質(zhì)瘤組，對照組為20例顱腦外傷內(nèi)減壓的腦組織，按照膠質(zhì)瘤級別膠質(zhì)瘤組分為四個亞組。采用免疫組化方法分析膠質(zhì)瘤組與對照組間，以及不同惡性程度膠質(zhì)瘤中KAI1/CD82基因表達。 結(jié)果KAI1/CD82在膠質(zhì)瘤組中表達率顯著高于對照組（P<0.05）。不同惡性程度膠質(zhì)瘤中KAI1/CD82的表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。KAI1/CD82的表達與人腦膠質(zhì)瘤的惡性程度呈正相關(guān)，在Ⅲ-Ⅳ級膠質(zhì)瘤中表達明顯高于Ⅰ-Ⅱ級膠質(zhì)瘤（P<0.05）。通過隨訪發(fā)現(xiàn)KAI1/CD82陽性組復(fù)發(fā)率低于陰性組，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 KAI1/CD82在膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用。檢測KAI1/CD82的表達可能成為監(jiān)測膠質(zhì)瘤進展及臨床上判斷預(yù)后的重要參考指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 膠質(zhì)瘤；KAI1/CD82；免疫組化

[中圖分類號] R5 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2015）03（b）-0112-02

膠質(zhì)瘤（glioma）是顱內(nèi)最常見的原發(fā)惡性腫瘤，患者治療失敗和死亡的主要原因是腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。KAI1/CD82是近年發(fā)現(xiàn)的特異性腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，關(guān)于KAI1/CD82抑制腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的作用機制極其復(fù)雜，尚未完全闡明。目前國內(nèi)外，對KAI1/CD82在膠質(zhì)瘤中的表達及作用研究較少。本實驗通過免疫組織化學(xué)法對KAI1/CD82在不同惡性程度的膠質(zhì)瘤組織中的表達進行研究，探討KAI1/CD82膠質(zhì)瘤惡性程度與表達水平之間的關(guān)系，為進一步治療和判斷預(yù)后提供新的參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取遼寧省盤錦市中心醫(yī)院2011年12月—2012年12月收治、手術(shù)切除并經(jīng)病理組織學(xué)確診的膠質(zhì)瘤132例，為膠質(zhì)瘤組。132例患者中，男58例，女74例，年齡22～67歲、平均49歲。按2000年WHO膠質(zhì)瘤分類標(biāo)準(zhǔn)進行分級： I級28例，Ⅱ級50例，Ⅲ級38例，Ⅳ級16例；24例正常腦組織標(biāo)本均為急性顱腦損傷患者行內(nèi)減壓術(shù)切除的腦組織，為對照組。膠質(zhì)瘤組與對照組患者在年齡、性別、組織部位等一般資料上上無顯著差異，具有可比性。所有標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林溶液固定，石蠟包埋。

1.2 主要試劑及免疫組化染色

兔抗人KAI1/CD82單克隆抗體及免疫組化SP試劑盒均購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。免疫組化技術(shù)采用SP法，標(biāo)本連續(xù)組織切片4～6 μm，常規(guī)采用脫蠟，水化，PBS沖洗，3%H2O2室溫15 min，PBS沖洗，高壓PH9.0抗原修復(fù)1 min30 s，加入一抗4℃過夜。PBS沖洗，加入二抗37℃孵育30min，PBS沖洗，DAB顯色，蘇木素對比染色，水洗分化，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，觀察。用已知陽性組織切片做陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷

以在胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒判定為陽性。根據(jù)染色程度及染色陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞總數(shù)百分比綜合計分。按照陽性細(xì)胞比例計分：≤25%為0分，25%～50%為1分，50%～75%為2分，大于75%為3分；不染色記0分，淡黃色記1分，黃色或深黃色記2分，棕黃色記3分。每張切片的兩項得分之和<4分為陰性表達，≥4分為陽性表達。

1.4 統(tǒng)計方法

所得數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計，χ2檢驗及Speaman相關(guān)分析，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義

2 結(jié)果

2.1 KAI1/CD82蛋白在正常腦組織和腦膠質(zhì)瘤中的陽性表達

腦膠質(zhì)瘤組織中KAI1/CD82在腦膠質(zhì)瘤中陽性率為63.63%（84/132），高于對照組29.17%（7/24）；差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 不同病理級別腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本中KAI1/CD82陽性表達情況

KAI1/CD82蛋白陽性表達率分別為：I級42.86%（12/28），II級56%（28/50），Ⅲ級78.95%（30/38），Ⅳ級87.5%（14/16），將各相鄰級別腦膠質(zhì)瘤KAI1/CD82蛋白陽性表達率進行χ2檢驗，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；將低級別組（I+Ⅱ）與高級別組（Ⅲ+Ⅳ）的Kiss-1陽性表達率進行χ2檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.29，P<0.05）。

KAI1/CD82在I級+ II級與III級+IV級陽性表達率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.29，P<0.05）。

2.3 腦膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)率的比較

通過對腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后1年的隨訪，我們發(fā)現(xiàn)腦膠質(zhì)瘤總復(fù)發(fā)率為42.42%（56/132），KAI1/CD82陽性組復(fù)發(fā)率為33.33%（28/84），KAI1/CD82陰性組復(fù)發(fā)率為62.50%（30/48），KAI1/CD82陽性組的1年復(fù)發(fā)率低于陰性組，兩組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

3 討論

KAI1/CD82是位于人染色體11P11.2上高度保守的抑癌基因，最早是由Dong等研究前列腺癌時發(fā)現(xiàn)的，它編碼含有267個氨基酸的蛋白質(zhì)CD82，具有10個外顯子及9個內(nèi)含子的，是屬于跨膜4超家族成員之一的細(xì)胞表面糖蛋白。后來的研究發(fā)現(xiàn)KAI1/CD82在乳腺癌、肝癌、胃癌、肺癌等多種實體腫瘤中存在不同程度的表達較弱或缺失，它在腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移中起著非常重要的作用。一些研究[1]發(fā)現(xiàn)KAI1/CD82在乳腺正常組織高表達，而在乳腺癌中存在表達減弱，并且它與ER陽性呈正相關(guān)。腫瘤惡性程度越低，KAI1/CD82表達越高，越不容易發(fā)生淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[2]，患者5年生存率也越高。后來一些研究者[3]發(fā)現(xiàn)KAI1/CD82蛋白在肺良性病組的表達高于肺癌組，與臨床分期，病理分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，但與性別，年齡，腫瘤大小和病理類型無關(guān)。KAI1/CD82的高表達能抑制肺癌區(qū)域淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移[4]， Choi UJ 等[5]證實KAI1/CD82的下降通過PI3K/Akt/mTOR信息傳導(dǎo)路徑對H1299肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移表型下調(diào)Rac1的表達。KAI1/CD82在大腸癌中陽性表達約55%，其表達和Dukes'分期，靜脈侵犯，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，腫瘤分化程度和肝轉(zhuǎn)移之間有統(tǒng)計上的顯著相關(guān)。并且KAI1/CD82表達和Dukes分期被確定為重要和獨立的預(yù)后因素[6]。KAI1/CD82表達的減弱或者缺失可能是腫瘤發(fā)生和發(fā)展的潛在因素。不少文獻報道KAI1/CD82在通過Sprouty2的上調(diào)抑制肝癌細(xì)胞遷移，野生型p53和JunB的協(xié)同作用下，調(diào)節(jié)著肝癌細(xì)胞的KAI1/CD82的蛋白表達[8-9]。endprint

KAI1/CD82作為腫瘤轉(zhuǎn)移抑制的細(xì)胞表面分子，在腦部惡性疾病中的研究尚不多見有研究發(fā)現(xiàn)該基因在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的表達與臨床分期呈負(fù)相關(guān)，其表達下調(diào)是神經(jīng)母細(xì)胞瘤分化和轉(zhuǎn)移的一個標(biāo)志。其表達是由NF-κB和NF-κB介導(dǎo)的APPct等控制[10]，可能減緩遷移，促進成熟的少突膠質(zhì)祖細(xì)胞的分化。相反，下調(diào)CD82在腦室管膜下區(qū)細(xì)胞內(nèi)，利用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體表達的shRNA，阻止它們分化成髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞[11]。我國研究者發(fā)現(xiàn)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系的細(xì)胞高表達KAI1/CD82，與人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系細(xì)胞的體外高轉(zhuǎn)移潛能呈負(fù)相關(guān)[12]；CD82/KAI1在惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中表達，且在U251細(xì)胞中表達較CHG-5細(xì)胞高.CD82/KAI1可抑制膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的遷移[13]。

本實驗發(fā)現(xiàn)，在正常腦組織中KAI1/CD82的陽性表達率為29.17%，顯著低于腦膠質(zhì)瘤組織63.63%。因此，KAI1/CD82的陽性表達有提示存在腦膠質(zhì)瘤病變的能力。此外，我們進行膠質(zhì)瘤分級后的分組研究中發(fā)現(xiàn)，KAI1/CD82的表達與人腦膠質(zhì)瘤的惡性程度呈正相關(guān)，在Ⅲ-Ⅳ級膠質(zhì)瘤中表達明顯高于Ⅰ-Ⅱ級膠質(zhì)瘤，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。因此，在臨床中發(fā)現(xiàn)通過隨訪發(fā)現(xiàn)KAI1/CD82的表達較高時可能提示病變分級較高，惡性程度較高。然而，我們通過隨訪研究結(jié)合KAI1/CD82的表達缺失可能是腦膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)的重要因素。以上的研究結(jié)果表明，KAI1/CD82在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用，通過調(diào)節(jié)少突膠質(zhì)祖細(xì)胞的分化，從而限制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移，是一種伴隨膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展而發(fā)揮功能的保護性因子，這可能正是腦膠質(zhì)瘤很少發(fā)生轉(zhuǎn)移的原因。但其具體的作用途徑和機制仍需要我們進一步的研究和探索。

綜上，KAI1/CD82在腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中起著重要作用，檢測KAI1/CD82在腦膠質(zhì)瘤中的表達可能有助于對病情的評估，從而為腦膠質(zhì)瘤的治療和預(yù)后奠定基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2014-10-11）endprint