Toll受體4的表達與胎膜早破患者絨毛膜羊膜炎的關系探討

李凱霞+++劉福民

[摘要] 目的 探討分析Toll受體4（TLR4）的表達與胎膜早破患者絨毛膜羊膜炎的關系。方法 隨機選取2013年1月—2015年4月胎膜早破病例30例（研究組）與正常a晚期妊娠女性30例（對照組），分別測定胎盤組織TLR4定位、表達特點以及白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）水平，予以產(chǎn)后胎膜病理檢查。結果 2組TLR4胎盤表達情況以及胎盤TLR4 mRNA水平差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；研究組血清IL-8水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。最終檢查發(fā)現(xiàn)組織絨毛膜羊膜炎23例，TLR4表達水平差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），TLR4 mRNA水平高于無組織絨毛膜羊膜炎者，組織絨毛膜羊膜炎者IL-6、IL-8水平高于無組織絨毛膜羊膜炎者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。該組胎膜組織病理檢查確認為亞臨床型絨毛膜羊膜炎，三期急性炎性改變，Ⅰ期、Ⅱ、Ⅲ期改變逐漸明顯。結論 TLR4上升以及IL-8上升均與絨毛膜羊膜炎有關聯(lián)，IL-8變化關系到胎膜完整性，對TLR4的監(jiān)測是防控胎膜早破、絨毛膜羊膜炎的關鍵。

[關鍵詞] Toll受體4；表達；胎膜早破；絨毛膜羊膜炎

[中圖分類號] R4.433 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2015）07（a）-0001-03

胎膜早破主要因感染所致，Toll樣受體與固有免疫左右有直接關聯(lián)，而TLRs作用于細胞信號轉(zhuǎn)導等環(huán)節(jié)，TLR4關系到內(nèi)毒素信號傳導過程，且可能與胎膜早破絨毛膜羊膜炎的發(fā)生有關[1]，該研究隨機選取2013年1月—2015年4月胎膜早破病例30例為研究對象，探討分析了TLR4與胎膜早破絨毛膜羊膜炎之間的關系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取2013年1月—2015年4月胎膜早破病例30例（研究組）與正常晚期妊娠女性30例（對照組），研究組年齡22～34歲，平均年齡（26.8±2.4）歲；對照組年齡23～33歲，平均年齡（26.3±2.8）歲，其中15例孕周在28～37周之間（對照1組），另15例孕周≥37周（對照2組）。2組基礎資料對比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

1.2 方法

2組均在剖宮產(chǎn)之時剪取臍帶附著處胎盤垂直斷面中央標本2塊，使用0.9%氯化鈉溶液將標本漂洗干凈，其中1塊以液氮冷凍處理，置于-70℃環(huán)境中備用，另1塊用來提取RNA。

2組孕婦分娩前均常規(guī)抽取肘靜脈血標本各5 mL，高敏放射免疫測定標本中IL-6、IL-8水平，產(chǎn)后均在破口部分剪取胎膜組織標本，以10%甲醛固定送檢。

免疫組化。冰凍切片取出，厚度維持在10 μm，并以冷丙酮固定處理、將內(nèi)源性過氧化物酶去除。山羊血清與0.1%Triton X-100溶液通透細胞封閉處理。將兔抗人TLR2 IgG抗體滴到切片之上，置于4℃濕盒內(nèi)一夜。取出后清洗，將生物素化山羊抗兔IgG/HRP二抗滴入，二氨基聯(lián)苯氨顯色處理，顯色后再以蘇木素染色，梯度乙醇處理后脫水，封片。觀察組織細胞結構變化，若結構依然完整，且發(fā)現(xiàn)棕褐色胞漿，胞核為藍色陽性；細胞結構完整但胞核為藍色，未見棕褐色胞漿，則胞核映襯下可見淺藍色，判定為陰性細胞。

檢測胎盤組織TLR 4的mRNA。組織標本置于冰盒，Trizol液研磨處理，將胎盤組織總RNA以Trizol一步法提取出來，逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA，將TLR2、TLR4引物加入并誘導擴增。分別在94℃環(huán)境下處理5 min、30 s，72℃環(huán)境下處理30 s、54℃環(huán)境下處理30 s，72 ℃延伸處理7 min，進行PCR反應。參照2%瓊脂糖快速電泳β-actin，凝膠成像系統(tǒng)進行擴增產(chǎn)物分析。

1.3 診斷標準

參照第8版謝幸主編的《婦產(chǎn)科學》診斷胎膜早破[2]。胎膜組織病理檢查出現(xiàn)炎性反應，產(chǎn)前階段或分娩后24 h后測量體溫在37.5 ℃之上，有高于標準值的白細胞計數(shù)，惡露有臭味；胎膜病理檢測為炎性，即診斷為絨毛膜羊膜炎[3]。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS 16.0軟件對該研究的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學的分析，計量資料用（x±s）表示，對比應用t檢驗，P<0.05時，差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 TLR4表達情況

2組TLR4胎盤表達情況以及胎盤TLR4 mRNA水平差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；研究組血清IL-6、IL-8水平明顯高于對照組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2 TLR4表達與絨毛膜羊膜炎關聯(lián)

最終檢查發(fā)現(xiàn)組織絨毛膜羊膜炎23例，TLR4表達水平差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），TLR4 mRNA水平高于無組織絨毛膜羊膜炎者，組織絨毛膜羊膜炎者IL-6、IL-8水平高于無組織絨毛膜羊膜炎者差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3 該組胎膜組織病理檢查

組胎膜組織病理檢查確認為亞臨床型絨毛膜羊膜炎，均采用HE染色，圖1為Ⅰ期絨毛膜羊膜炎胎膜組織，圖2為Ⅱ期絨毛膜羊膜炎胎膜組織，圖3為Ⅲ期絨毛膜羊膜炎胎膜組織，三期絨毛膜羊膜炎胎膜組織均呈現(xiàn)出陽性反應，且出現(xiàn)了急性炎性改變，Ⅰ期、Ⅱ、Ⅲ期改變逐漸明顯。

3 討論

生殖道病原微生物的上行性感染等因素會直接導致胎膜早破等現(xiàn)象的發(fā)生。國外學者提出，正常足月妊娠者胎盤免疫組化研究可見TLR2、TLR4正常表達，這是因為上述物質(zhì)在分娩發(fā)動調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮著一定的作用[4]，研究還發(fā)現(xiàn)，TLRs直接影響介導母體胎兒之間的天然免疫工作[5]。該研究為探討分析Toll受體4（TLR4）的表達與胎膜早破患者絨毛膜羊膜炎的關系，使用RT-PCR技術以及免疫組化技術分別測定正常妊娠晚期以及胎膜早破孕婦胎盤組織TLR4 mRNA表達情況以及蛋白表達特點，檢測結果發(fā)現(xiàn)，2組TLR4胎盤表達情況以及胎盤TLR4 mRNA水平差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；研究組血清IL-8水平明顯高于對照組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。最終檢查發(fā)現(xiàn)組織絨毛膜羊膜炎23例，TLR4表達水平差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），TLR4 mRNA水平高于無組織絨毛膜羊膜炎者，組織絨毛膜羊膜炎者IL-8水平高于無組織絨毛膜羊膜炎者差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。提示TLR4在正常妊娠情況下以及胎膜早破情況下有相似的胎盤組織表達特征，胎膜早破確實不是因單一因素產(chǎn)生的。