HPLC法測定益氣養陰合劑中厚樸酚和厚樸酚和延胡索乙素的含量

劉傳統 祁紅

摘要：目的 建立測定益氣養陰合劑中厚樸酚、和厚樸酚和延胡索乙素含量的方法。方法 采用高效液相色譜法.色譜柱為HypersiIODS2（150 mm×4.6 mm，5μm），流動相分別為甲醇：水（75：45，v/v）、甲醇-0. 1010磷酸溶液（用三乙胺調至6.0）（55：45 .V/V），流速為1.0mL/min.檢測波長為294 nm，280 nm。結果 厚樸酚、和厚樸酚和延胡索乙素的的進樣量分別在0.208～0. 624μg，0.272～0.816μg，0.212～0.636μg范圍內與各自峰面積積分值呈良好的線性關系（r分別為0.9999、0.9998、0.9998）；二者精密度、穩定性、重復性試驗的RSD <2%；平均加樣回收率分別為98.26%（ RSD=0.55%，n=9），98. 18%RSD=0.80%，n=9），98.47%（ RSD =0.75%，n=9）。結論該方法簡單、準確、重復性好，可用于益氣養陰合劑的質量控制，.

關鍵詞：益氣養陰合劑；厚樸酚和厚樸酚；延胡索乙素；高效液相色譜法；含量測定

中圖分類號：R284

文獻標志碼：A

文章編號：1007 - 2349（ 2015） 01 - 0059 - 03盞氣養陰合劑處方源于本院中醫的臨床有效經驗方，由黃先，人參，黃精，枸杞子，女貞子，車前子（包），菟絲子，延胡索，乳香，沒藥，姜厚樸，甘草，粉丹皮等中藥組成，臨床上主要JH下治療帶狀皰疹神經痛后遺癥。為控制產品質量，確保臨床療效，采Hj高效液相色譜法對主要藥味姜厚樸的主要成分厚樸酚、和厚樸酚的含量進行含量測定，對主要藥味延胡索的主要成分延胡索乙素的含量進行含量測定。1 材料1.1 儀器島津LC - 10AT高效液相色譜儀，SPD - 10Avp紫外檢測器，CLASS - VP色譜T作站。Meter AE240電子天平。1.2 藥品與試劑 益氣養陰合劑（自制，批號：140122、140214，140220）；厚樸酚（中國藥品生物制品檢定研究院，批號：110729 - 200412，供含量測定用用）；和厚樸酚（中國藥品生物制品檢定研究院，批號：110730 - 201313，供含量測定用）；延胡索乙素（中國藥品生物制品檢定研究院，批號：110726 - 201112，供含量測定用）甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純。2方法與結果2.1 厚樸酚、和厚樸酚的含量測定2.1.1 色譜條件[1]色譜柱：大連依利特Hypf：rs11ODS2（ 150 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇：水（75：25，v/v）；流速：1.0mL/ min；檢測波長：294 nm；柱溫：35℃；進樣最：對照品10 μL，供試品10μL。理論塔板數按厚樸酚汁算心小低于5000。2.1.2供試品溶液的制備取本品10 mL，用稀乙醇溶液稀釋至25 mL，離心，取上清液，置棕色量瓶中，即得。2.1.3對照品溶液的制備 取厚樸酚、和厚樸酚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含厚樸酚54.4 vg的溶液，含和厚樸酚41.6 Vg的溶液，即得。2.1.4缺姜厚樸陰性對照溶液的制備 取本處方中缺姜厚樸的其余藥材，按本品制法制成陰牲樣品，再按“2.1.2”項下.的方法制備缺姜厚樸的陰性對照溶液。2.1.5線性關系考察精密吸取厚樸酚、和厚樸酚對照品溶液5、8、10、12、15μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以厚樸酚、和厚樸酚的進樣量（x）為橫坐標，峰面積積分值（y）為縱坐標，進行線性回歸，得和厚樸酚回歸方程為y= 2178123x+ 22078. 39（r=0.9999）。結果表明，和厚樸酚的進樣量在0.208～0.624μg范圍內與其峰面積積分值呈良好的線性關系。得厚樸酚回歸方程為y= 2066916x+ 2525. 511（r=0. 9998）。結果表明，厚樸酚的進樣量在0.272～0.816 μg范圍內與其峰面積積分值呈良好的線性關系。2.1.6精密度試驗精密吸取厚樸酚、和厚樸酚對照品溶液10 μL，重復進樣5次，按上述色譜條件測定，記錄峰面積。結果顯示，RSD=1.27%（n=6），表明儀器精密度良好。2.1.7穩定性試驗取同一供試品溶液適量，分別于0，l，2，4，8，2.1.9加樣回收率試驗精密量取已知含量的同一批樣品適量，分別精密加入厚樸酚、和厚樸酚對照品，按”2.1.2”項下方法制備供試品溶液，再按上述色譜條件進樣測定，計算加樣回收率，結果見表1.12，24 h按上述色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果顯示.RSD=1.45%（n=7），表明供試品溶液24 h內穩定性良好。2.1.8重復性試驗 取同一批樣品適量，共6份，分別按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，再按上述色譜條件進樣測定，記錄峰面積，以外標法計算樣品中厚樸酚、和厚樸酚的含量。結果顯示，每1mL樣品平均含和厚樸酚0.0624 mg，厚樸酚0.143 mg，RSD=1.34% （n =6），表明本方法重復性良好。2.1.9空白試驗取陰性樣品溶液10 mL，按2.1.2項下進行測定，結果缺姜厚樸的陰性樣品溶液在厚樸酚、和厚樸酚對照品色譜峰相同保留時間處未顯色譜峰，表明：陰性樣品沒有干擾（見圖1）。2.1.10樣品含量測定 取3批益氣養陰合劑各適量，分別按“2. 12”項下制備供試品溶液，冉按上述色譜條件進樣測定記錄峰面積，以外標法計算樣品中厚樸酚、和厚樸酚的含量，每批樣品平行測定3次，結果見表2.色譜圖見圖1.2.2延胡索乙素的含量測定2.2.1 色譜條件[2]色譜柱：大連依利特Hypersi10DS2（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇：0.1%磷酸溶液（用三乙胺調PH至6.0）（55：45，v/v）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：280 nm；柱溫：35℃；進樣量：10μL。理論塔板數按延胡索乙素計算應不低于6000。2.2.2供試品溶液的制備取本品10 mL，加甲醇溶液至25 mL稀釋，離心，取上清液，置棕色量瓶中，即得。2.2.3對照品溶液的制備取延胡索乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含42.4μg的溶液，即得。2.2.4缺延胡索陰性對照溶液的制備取本處方中缺延胡索的其余藥材，按本品制法制成陰性樣品，再按“2.2.2”項下的方法制備缺延胡索的陰性對照溶液。2.2.5線性關系考察精密吸取延胡索乙素對照品溶液5、8、10、12、15μL，，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以延胡索乙素的進樣量（x）為橫坐標，峰面積積分值（y）為縱坐標，進行線性同歸，得同歸方程為Y=889408. 3x+ 10557. 46（r=0.9998）。結果表明，延胡索乙素的進樣量在0. 212～0.636μg范圍內與其峰面積積分值呈良好的線性關系。2.2.6精密度試驗 精密吸取延胡索乙素對照品溶液10μL，重復進樣6次，按上述色譜條件測定，記錄峰麗積。結果顯示，RSD=1.17（n=6），表明儀器精密度良好。2.2.7穩定性試驗取同一供試品溶液適量，分別于0，2，4，6，8，10，12 h按上述色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果顯示，RSD=1.45%（n=7），表明供試品溶液12 h內穩定性良好。2.2.8重復性試驗 取同一批樣品適量，共6份，分別按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，冉按上述色譜條件進樣測定，記錄峰面積，以外標法計算樣品中延胡索乙素的含量，結果顯示，每1mL樣品平均含延胡索乙素0.089 mg，RSD=1.23%（n=6），表明本方法重復性良好。2.2.9空白試驗取陰性樣品溶液10 ml，按2.2.2項F進行測定，結果缺延胡索的陰性樣品溶液在延胡索乙素對照品色譜峰相同保留時間處未顯色譜峰，表明：陰性樣品沒有干擾（見圖2）。2.2. 10加樣回收率試驗 精密量取已知含量的同一批樣品適量，分別精密加入延胡索乙素對照品，按”2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按上述色譜條件進樣測定，計算加樣回收率，結果見表1.2.2. 11樣品含量測定取3批益氣養陰合劑各適量，分別按“2.2.2”項下制備供試品溶液，再按上述色譜條件進樣測定記錄峰面積，以外標法計算樣品中延胡索乙素的含量，每批樣品平行測定3次，結果見表2.色譜圖見圖2.3討論

筆者在本質量控制中建立了厚樸酚、和厚樸酚的含量測定方法。在流動相的選擇中，筆者比較了甲醇一水（ 75：25.v/v）與乙腈一水（45：55，v/v）的分離效果，結果表明后者分離度不符合要求，而后者對應的咖啡酸保留試劑與分離度均符合要求。故選擇甲醇一水（75：25，v/v）為流動相，筆者為測定延胡索中延胡索乙素含量，在流動相選擇中，比較了甲醇：0.1%磷酸溶液（用三乙胺調PH至6.0）（55：45，v/v）、乙腈-0. 6%冰醋酸溶液（用三乙胺調PH至6.0）（41：59，v/v），結果表明后分離度不符合要求，而甲醇：0.1%磷酸溶液系統分離效果好，故選擇甲醇：0.1%磷酸溶液（用三乙胺調PH至6. 0） （55：45，v/v）為流動相，

綜上所述，本方法簡單、準確、重復性好，可用于益氣養陰合劑的質量控制。參考文獻：[I]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[s]（一部）.中國醫藥科 技出版禮，2010：1235.[2]國家藥典委員會，中華人民共和國藥典[S]（一部）中國醫藥科 技出版社，2010：882.（收稿日期：2014-08-12）