三種不同方法提取吳茱萸果實揮發油成分的GC-MS分析

劉應蛟，徐貝，喻亞飛，龔力民，曾曉艷，劉塔斯*（湖南中醫藥大學藥學院，湖南長沙410208）

三種不同方法提取吳茱萸果實揮發油成分的GC-MS分析

劉應蛟，徐貝，喻亞飛，龔力民，曾曉艷，劉塔斯*
（湖南中醫藥大學藥學院，湖南長沙410208）

目的用GC-MS法分析吳茱萸果實中揮發油的化學成分，為其不同方法提取提供實驗依據。方法采用水蒸氣蒸餾法、索氏提取法和超聲提取法對吳茱萸果實揮發油進行提取，用GC-MS法測定，結合NIST05數據庫對分離的化合物進行鑒定，并采用歸一法計算各組分的相對峰面積。結果3種不同方法提取吳茱萸果實揮發油的化學成分有差異，分別分離鑒定出57、51和38個組分，共有成分25個，其中主要成分為β-月桂烯、β-羅勒烯、α-蒎烯、β-芳樟醇、［1S-（1α，2β，4β）］-1-乙烯基-1-甲基-2，4-二（1-甲基乙烯基）-環己烷、石竹烯、吉馬烯、α-布藜烯和氧化石竹烯等。結論采用水蒸氣蒸餾法和索氏提取法得到具有一定藥理活性的石竹烯、α-蒎烯、欖香烯及β-羅勒烯等成分時，能夠達到同樣的提取效果。因此可以綜合考慮所需要的組分而選擇合適的提取方法。

吳茱萸；水蒸氣蒸餾法；索氏提取法；超聲提取法；揮發油；GC-MS

〔Abstract〕Objective To analyze the chemical components of the essential oil of from Evodiae Fructus with GC-MS and provide experimental basis for its different exaction methods.Methods The volatile oils of Evodiae Fructus were extracted by steam distillation，Soxhlet extraction and ultrasonic extraction methods.The chemical compounds were identified by GCMS method and NIST05 database.The relative content of each component was calculated by area normalization.Results There are some differences in chemical compounds of the essential oil from Evodiae Fructus by three different methods.57，51 and 38 components of volatile oil were identified separately，and there were 25 same components.The main components are β-Myrcene，β-ocimene，α-pinene，β-Linalool，［1S-（1α，2β，4β）］-1-ethenyl-1-methyl-2，4-bis（1-methylethenyl）-cyclohexane，caryophyllene，germacrene D，α-bulnesene and caryophyllene oxide etc.Conclusion The steam distillation and Soxhlet extractionmethods showed the same effectin extracting of chemical compounds with some pharmacological activities，such as caryophyllene，α-pinene，elemene and β-ocimene etc.So the needs of components should be taken into consideration for the right extraction method.

〔Keywords〕Evodiae Fructus；steam distillation；Soxhlet extraction；ultrasonic extraction；volatile oil；GC-MS

吳茱萸為蕓香科（Rutaceae）植物吳茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.、石虎Evodia rutaecarpa （Juss.）Benth.Var.officinalis（Dode）Huang或疏毛吳茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.Var.bodinieri（Dode）Huang的干燥近成熟的果實［1］。始載于《神農本草經》，味辛、苦，性大熱，有小毒。具有散寒止痛、降逆止嘔、助陽止瀉等功效，用于厥陰頭痛、寒疝冷痛、腳氣疼痛、五更泄瀉等癥［2］。近代研究證明，其具有鎮痛、鎮靜、抗菌、降壓、耐缺氧等藥理作用［3］。本文采用三種不同的提取方法，探討其異同，為吳茱萸果實揮發油成分的優化提取提供實驗基礎。

1　實驗材料

1.1藥材

吳茱萸果實采自于湖南省沅汨科技種植有限公司。經湖南中醫藥大學藥學院中藥鑒定教研室劉塔斯教授鑒定為吳茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.的干燥近成熟的果實。

1.2儀器

日本島津GC-MSQP2010型氣相色譜質譜聯用儀。GC-MS Solution色譜工作站。標準譜庫為美國NIST質譜檢索數據庫。

1.3試劑

乙酸乙酯、無水硫酸鈉、石油醚（60～90℃）和乙醚均為分析純。

表1　吳茱萸果實揮發油的化學成分分析結果

2　方法

采用水蒸氣蒸餾法、索氏提取法和超聲提取法對吳茱萸果實揮發油進行提取，用GC-MS法測定，結合NIST05數據庫，人工圖譜解析，按各色譜峰的質譜裂片圖與文獻核對，確定吳茱萸果實揮發油成分，并用歸一法計算各組分的相對峰面積［4-5］。

2.1提取方法

2.1.1水蒸氣蒸餾法取吳茱萸果實參照2010年版《中華人民共和國藥典》一部附錄XD揮發油提取法甲法進行提取，蒸餾6 h，收集油層，用無水硫酸鈉脫水，此揮發油為黃色透明油狀物，以乙酸乙酯為溶劑稀釋，即得樣品1。

續表1

2.1.2索式提取法取吳茱萸果實粗粉25 g，置于索式提取器中，加入石油醚250 mL，60℃回流1 h，合并提取液，即得樣品2。

2.1.3超聲提取法取吳茱萸果實粗粉25 g，加入石油醚250 mL，稱質量，超聲1 h，放冷至常溫補重，過濾，取續濾液得樣品3。

2.2色譜及質譜條件

2.2.1色譜條件色譜柱：Rtx-5 MS（30 m× 0.25 mm×0.25 μm）；載氣He；流速1.0 mL/min；進樣口溫度250℃；程序升溫：初始溫度80℃，以4℃/min升溫到160℃，2℃/min升溫到200℃，8℃/min升溫到240℃，保持8 min；進樣量1 μL，分流比20∶1。離子源溫度230℃。

2.2.2質譜條件離子源EI；電子能量70 eV；溶劑延遲時間3 min；質量掃描范圍50～500 amu。

圖1　吳茱萸果實揮發油總離子流圖

3　結果與討論

從吳茱萸果實揮發油總離子流圖（見圖1）可以看出三種不同方法提取吳茱萸果實揮發油的化學成分有些差異，分別分離鑒定出57、51和38個組分，分別占揮發油總相對峰面積的98.36%、 92.55%和80.09%。共有成分25個，其中主要成分為β-月桂烯、α-水芹烯、β-羅勒烯、α-蒎烯、β-芳樟醇、石竹烯、吉馬烯、α-愈創烯和氧化石竹烯等。3種方法提取吳茱萸果實揮發油分析結果見表1。

水蒸氣蒸餾法提取的揮發油顏色為淡黃色，具有特殊刺激的濃郁香味，耗時較長，但揮發油成分被檢測最多，而其它兩種方法得到揮發油的顏色較深，耗時較短。不同提取方法對吳茱萸果實揮發油成分的影響較大。水蒸氣蒸餾法提取揮發油中莰烯、α-品烯、（+）-歐松油烯、海茴香烯、異松油烯、紫蘇烯、大根香葉烯B等成分在索氏提取法和超聲法中未被檢出。4（10）-側柏烯、2-乙烷基-6-甲基-1，5-庚二烯、α-檸檬醛、檀香三烯、法尼醇、欖香醇等只在索氏提取法中被檢出；葎草烯、綠葉烯、9-炔十八酸、亞麻酸、二十烷等只在超聲提取法中被檢出。主要成分β-月桂烯、β-羅勒烯、石竹烯、α-蒎烯、欖香烯、β-芳樟醇等均可用索氏提取法和水蒸氣蒸餾法提取。

據研究報道，石竹烯具有一定的平喘作用且具抗菌活性，可用于治療老年慢性支氣管炎［6］；α-蒎烯對白色念珠菌有明顯的抑菌和殺菌作用［7］；對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌有一定的抑制作用，可能與其所含的石竹烯、欖香烯、α-蒎烯、及β-羅勒烯等主要成分密切相關［8］。在提取得到石竹烯、α-蒎烯、欖香烯及β-羅勒烯等時，索氏提取法可以取代水蒸氣蒸餾法。因此可以綜合考慮所需要的化學組分而選擇合適的提取方法。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：160.

［2］江蘇新醫學院.中藥大辭典（上冊）［M］.上海：上海科學技術出版社，1977：1 120.

［3］蓋玲.吳茱萸對大鼠佐劑性關節炎的治療作用［J］.中成藥，2001，23 （1）：807.

［4］江寧，龔力民，劉塔斯，等.吳茱萸葉揮發油成分的GC-MS分析［J］.湖南中醫藥大學學報，2010，30（1）：43-45.

［5］李吉來，陳飛龍，賀豐，等.石菖蒲揮發油成分的GC-MS分析及不同提取方法的比較研究［J］.中藥材，2001，24（7）：494-495.

［6］國家醫藥管理局中草藥情報中心站.植物藥有效成分手冊［M］.北京：人民衛生出版社，1986.

［7］夏忠弟，余俊龍.α-蒎烯對白色念珠菌生物合成的影響［J］.中國現代醫學雜志，2000，10（1）：44-46.

［8］趙晨曦，梁逸曾，李曉寧.香揮發油化學成分與抗菌活性研究［J］.天然產物研究與開發，2006（18）：381-385.

（本文編輯楊瑛）

Determination of the Constituents of Volatile oil from Evodiae Fructus Extracted with Three Different Exaction Methods by GC-MS

LIU Yingjiao，XU Bei，YU Yafei，GONG Limin，ZENG Xiaoyan，LIU Tasi*
（Pharnacy College，Hunan University of Chinese Medicine，Changsha，Hunan 410208，China）

R284.2；R917

B

10.3969/j.issn.1674-070X.2015.02.009.027.04

2014-07-07

湖南省中藥鑒定學精品課程項目；國家中醫藥管理局中藥鑒定與資源三級科研實驗室項目。

劉應蛟，男，在讀碩士研究生，研究方向：中藥質量與資源。

*劉塔斯，女，教授，博士研究生導師，E-mail：liutasi@126.com。