甲基化衍生—高效液相色譜法檢測北五味子中的代森錳鋅

張悅等

摘要：利用甲基化衍生-高效液相色譜法檢測北五味子[Schisandra chinensis（Turcz.）Bail.]中代森錳鋅殘留量。以BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）為固定相；乙腈∶水（18∶82，V/V）為流動相；檢測波長為 272 nm。結果表明，代森錳鋅的平均回收率達97.0%，RSD為1.36%，最低檢出限（LOD）為0.02 mg/kg，最低檢測濃度（LOQ）為0.05 mg/kg，結果符合農(nóng)藥殘留試驗準則要求。北五味子樣品中均未檢出代森錳鋅。

關鍵詞：甲基化；代森錳鋅；北五味子[Schisandra chinensis（Turcz.）Bail.]

中圖分類號：O657.7+2 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）12-3000-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.12.051

Determination of Mancozed in Schisandra chinensis（Turcz.）Bail. by

Methylation-derived UPLC

ZHANG Yue， ZHANG Zheng-hai， LI Ai-min，WANG Yu-fang， CHENG Xiao-dan， ZHAO Wei-wei

（Institute of Special Animal and Plant Science， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Changchun 130112， China）

Abstract： A methylation-derived UPLC for detecting mancozeb residue in Schisandra chinensis（Turcz.）Bail. was studied in this paper. The analysis was performed on the column of BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm） with the mobile phase of acetonitrile-water（18∶82，V/V）， the wavelenth detected was 272 nm. The results showed that the average recovery reached 97.0% with RSD of 1.36%. The LOD and LOQ were 0.02 and 0.05 mg/kg，respectively. This satisfied results were fit for the testing standard of pesticide residue.No mancozeb residues was detected in the samples.

Key words： methylation； mancozeb； Schisandra chinensis（Turcz.）Bail.

代森錳鋅（Mancozed）屬乙撐二硫代氨基甲酸酯（鹽）類殺菌劑（EBDCs），是鋅離子與代森錳的配位絡合物，分子式（C4H6MnN2S4）xZny（x∶y=1∶0.091，MW≈270），溶解性差，不溶于水和常見有機溶劑，具有廣譜低毒低殘留高效力特性，對北五味子[Schisandra chinensis（Turcz.）Bail.]黑斑病具有良好的防治效果[1]。EBDCs本身無食品安全風險，但是在生產(chǎn)、貯存和使用過程中降解產(chǎn)生的主要代謝產(chǎn)物乙撐硫脲（ETU）卻具有致癌、致畸、致突變作用，危害人體健康。北五味子為傳統(tǒng)中藥，出口韓國、日本及東南亞地區(qū)，檢測代森錳鋅的殘留量對提高我國北五味子產(chǎn)值具有重要意義。

目前代森錳鋅測定主要包括分光光度法、毛細管電泳法、頂空氣相色譜法和甲基化衍生液相色譜法等[2]。其中分光光度法和毛細管電泳法靈敏度低，僅能檢測高濃度樣品；頂空氣相色譜法通常被列為各國標準分析方法，但該法分析的是EBDCs類殺菌劑產(chǎn)生的二硫化碳總量，缺乏專一性；甲基化衍生原理最早被Gustafsson和Thompson應用于福美雙的含量分析，馬婧瑋和潘燦平等人在其基礎上建立起代森錳鋅的分析方法，其原理為在堿性條件下，用乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）將代森錳鋅轉化為代森鈉，代森鈉能與碘甲烷發(fā)生甲基化反應，得到甲基化產(chǎn)物，最后由HPLC檢測甲基化產(chǎn)物。該法盡管消耗溶劑多、耗時長、前處理復雜，但其精確度高[3，4]，反應式如圖1。

1 材料與方法

1.1 材料

北五味子取自中國農(nóng)業(yè)科學院特產(chǎn)研究所左家試驗基地（N44°04′，S126°05′），以6年生結果樹作為試驗植株，在6月中旬（黑斑病的發(fā)病前期）噴施不同濃度（400，600和800 mg/L）的代森錳鋅，以1，2，3標示，每處理10株，設3個平行，并設置保護行，于9月上旬統(tǒng)一采收，自然條件下晾干，粉碎。

1.2 儀器與試劑

RE-200A旋轉蒸發(fā)器（上海亞榮）；FA2004B電子天平（上海精科）；ACQUITY超高效液相色譜儀，配備二極管陣列檢測器（美國Waters）；64R低溫高速離心機（美國Beckman）。

純度88%代森錳鋅標準品（北京上立方聯(lián)合化工技術研究院）；70%代森錳鋅粉劑（江蘇省利民化工有限責任公司）；乙腈（分析純）；碘甲烷；乙二胺四乙酸二鈉；L-半胱氨酸鹽酸鹽；四丁基硫酸氫銨等。

1.3 方法

1.3.1 溶液配制 溶液A為50 g L-半胱氨酸鹽酸鹽與93.46 g乙二胺四乙酸二鈉以及18 g氫氧化鈉配制成pH 9.5的1 L混合溶液；溶液B為在225 mL氯仿和75 mL正己烷的混合溶液中加入1 mL碘甲烷，配制成含0.05 mol/L碘甲烷的混合溶液；溶液C為20 mL 1，2-丙二醇和80 mL二氯甲烷的混合溶液。

1.3.2 代森錳鋅標準溶液的配制 稱取代森錳鋅標準品0.011 3 g于10 mL的容量瓶中，用溶液A溶解并定容，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3.3 前處理 取1，2，3組北五味子樣品，各稱取10 g于250 mL三角瓶中，分別加入50 mL 溶液A，封口膜封口。于25℃、180 r/min條件下振蕩10 min后轉移至離心管中，3 800 r/min離心5 min，取上清液加入25 mL溶液A渦旋5 min， 同上離心5 min，合并上清液于250 mL三角瓶中；邊攪拌邊加入8 mol/L氫氧化鈉， pH 8.0時加入2.5 mL 0.41 mol/L四丁基硫酸氫銨水溶液，然后加入溶液B，振搖10 min后靜置10 min，收集有機層。有機層用少量無水硫酸鈉干燥后轉移至旋蒸瓶中，迅速加入2.5 mL溶液C，30 ℃減壓濃縮，加入1 mL乙腈溶解后，過0.45 μm有機濾膜，待測。

1.3.4 液相色譜條件 色譜柱為BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm），流動相為乙腈：水（18∶82，V/V），流速0.5 mL/min，柱溫25 ℃，檢測波長272 nm，進樣量2 μL。

2 結果與分析

2.1 方法學分析

代森錳鋅甲基化衍產(chǎn)物保留時間為4.80～4.82 min，色譜圖見圖2。

用溶液A稀釋得到不同濃度的代森錳鋅標準溶液，各吸取1 mL同上法分析，結果表明，代森錳鋅在1～50 mg/L范圍內(nèi)線性關系良好。

去衍生化樣品于同一色譜條件下，連續(xù)進樣5次[5]，測定色譜峰面積。結果表明，峰面積的相對標準偏差值為0.64%，表明儀器精密度良好。

在同一色譜條件下，標準品溶液在相同步驟衍生化0、2、3、4 h后，測定其峰面積，計算得RSD值為1.29%，表明代森錳鋅衍生化產(chǎn)物在4 h內(nèi)穩(wěn)定。

取相同代森錳鋅標準品溶液5份，同上法分析，得RSD值為1.19%，表明重復性良好。

取5份北五味子樣品各1 mL，分別加入代森錳鋅標準品溶液8.85 μg，同上法分析，計算回收率結果見表1。

在樣品中添加一定量的代森錳鋅標準品溶液，處理后分析，最低檢出限（LOD）3倍信噪比為0.02 mg/kg；最低定量濃度（LOQ）為0.05 mg/kg，低于國家推薦小粒水果MRL值（5 mg/kg）。

2.2 樣品分析

取噴施了不同劑量的樣品，經(jīng)處理分析，色譜圖見圖3，測定結果見表2。由圖3和表2可知，樣品中未檢出代森錳鋅。

3 討論

本試驗利用代森錳鋅甲基化衍生原理，采用超高效液相色譜檢測了北五味子中代森錳鋅殘留量，其平均回收率為97.0%，在農(nóng)藥殘留試驗準則范圍內(nèi)[5]；最低檢出限（LOD）為0.02 mg/kg；最低檢測濃度（LOQ）為0.05 mg/kg，滿足國家推薦小粒水果MRL值（5 mg/kg）的檢測要求。

北五味子為傳統(tǒng)藥材，主要受到黑斑病和白粉病困擾，在生長期噴灑適量代森錳鋅可以起到良好的防治效果，但其在農(nóng)產(chǎn)品表面的殘留存在潛在的食品安全風險，為此，本試驗利用甲基化衍生-超高效液相色譜法檢測了其在生長期噴灑不同3組濃度的代森錳鋅的北五味子果實。結果表明，在間隔近3個月后代森錳鋅在北五味子上無殘留。

參考文獻：

[1] 李愛民.五味子栽培與選種技術[M].北京：金盾出版社，2008.

[2] 王艷麗，陳武瑛，廖曉蘭.代森錳鋅殘留分析研究進展[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2010（21）：195-196.

[3] 馬婧瑋，董姝君，游文宇，等.甲基化衍生-高效液相色譜法檢測代森錳鋅在花生中的殘留[J].農(nóng)藥學學報，2007，9（3）：297-300.

[4] SN/T 0711-2011，出口茶葉中二硫代氨基甲酸酯（鹽）類農(nóng)藥殘留量的檢測方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法[S].

[5] NY/T788-2004，農(nóng)藥殘留試驗準則[S].