遵義市118例手足口病的核酸檢測統計學分析

庭永君 陳德林 世 琨 楊 宇

遵義市118例手足口病的核酸檢測統計學分析

庭永君 陳德林 世 琨 楊 宇

目的 研究2011年遵義市爆發的手足口病核酸檢測與分型的關系，了解此次手足口病核酸檢測的臨床意義。方法 采用信號引物轉移定性聚合酶鏈反應測定患者鼻咽分泌物、大便和痰標本中的薩科奇病毒A16型（coxsackievirus，CA16）、腸道病毒71型（enterovirus71，EV71）和腸道病毒通用型(universal enterovirus，EV+）三種核酸RNA的載量，用全自動羅氏480PCR分析儀進行核酸陰陽性分析。結果 手足口病核酸RNA定性檢出陽性率為58.2%，這次流行以EV+為主占45.1%，其次EV71占31.1%，CA16占16.4%，各組間差異有統計學意義（P＜0.05)。而且混合感染比例占31.1%，各組間差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 這次遵義市手足口病流行感染主要是以EV+為主，以及EV+與EV71或CA16混合感染的手足口病，其次是單純的EV+，EV71和CA16單一病毒感染的手足口病。

手足口病；腸道病毒通用型 EV+；柯薩奇病毒A16；腸道病毒71型 EV71

手足口病是由腸道病毒引起的傳染病，多發于5歲以下兒童，主要表現有口痛、厭食、低熱[1-2]。手、足、口部可出現小皰疹或潰瘍。大部分患兒在一周左右自然愈合，少部分患兒會出現心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜炎等并發癥，病情嚴重者會導致死亡。由于地域性的差異，流行病的特點也有所不同[3]。因此，手足口病爆發時探究其病原體類型，分析其在該地的流行病學特點對后續的研究和防治具有十分重要的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇貴州省遵義市第一人民醫院兒科2011年9月～2013年5月收治的118例手足口病患者作為實驗組，其中男83例，女35例，年齡6個月～8歲，平均年齡為（7.31±1.25）歲；以無菌專用棉拭子采集患者鼻咽分泌物密封，加入3～5mL無菌生理鹽水，旋緊管蓋并密封送檢。對照組選取同期本院門診健康兒童鼻咽分泌物標本78份，其中男38例，女40例，年齡6個月～9歲，平均年齡（7.12±2.13）歲；加入3～5mL無菌生理鹽水，旋緊管蓋并密封送檢。實驗組與對照組患者在性別、年齡方面差異無統計學意義，具有可比性。

1.2 試劑 本次研究所用試劑包括：EV+RNA、EV71 RNA和CA16 RNA，所用試劑從中山大學達安基因股份有限公司生產的核酸柱中提取，均為批檢合格產品，于-2℃環境下儲存[4-5]。

1.3 儀器 Lightcycler?480(羅氏480)、eppendorf系列移液器、臺式高速離心機（型號centrifuge 5424）、金屬恒溫器（型號thermomixer compact）、生物安全柜（BIOSafe12）。

1.4 方法

1.4.1 按照實時熒光定量PCR操作規程和Lightcycler? 480(羅氏480)儀器操作規程進行檢測，利用每一個擴增檢測到達指數擴增期起始所需要的擴增循環數來進行定性檢測[6]。根據標準曲線和陰陽性質控條件進行定性結果判定分析，確定檢測結果有效。以CA16（EV71、EV+）基因組編碼區的高度保守區為靶區域，設計特異性引物及熒光控探針，通過一步法RT-PCR擴增對CA16RNA（EV71RNA、EV+RNA）進行定性檢測。

1.4.2 質量控制 陰性質控品的增長曲線不是“S”型曲線或無CT值；陽性質控品的增長曲線呈“S”型曲線且CT值≤30。結果判斷：（1）對于CA16：若無典型“S”型擴增曲線或CT值≥34.8，則判斷為CA16陰性；反之則判斷為CA16陽性。（2）對于EV71：與 CA16一致。

1.5 統計學方法 采用SPSS14.0軟件進行統計分析，正態計量資料采用“±s”表示，組間比較采用t檢驗。計數資料用例數（n）表示，組間率（%）的比較采用χ2檢驗；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 本次研究發現，實驗組的118例患者都來自臨床最終確診為手足口病，除1例死亡外，117例治愈出院。見表1。

表1 手足口病核酸檢測三種病毒EV+EV71 CA16陰性、陽性關系表[n(%)]

2.2 此次遵義市手足口病爆發流行以混合感染為主，腸道病毒通用型和腸道病毒71型同時陽性26例，占22.0%；腸道病毒通用型和腸道柯薩奇病毒A16同時陽性12例，占10.2%；腸道病毒通用型，腸道病毒71型和柯薩奇病毒A16同時陽性2例，占1.7%。對照組78例全部為陰性。見表2。

表2 手足口病核酸檢測三種病毒混合感染及單種病毒感染關系表[n(%)]

3 討論

手足口病是由腸道病毒引起的傳染病，腸道病毒感染可導致手足口病、皰疹性咽峽炎、病毒性腦炎、無菌性腦膜炎、心肌炎等，嚴重者可導致死亡[4-5]。此次對遵義市爆發性流行的手足口病由于病情重，而且沒有采取皰疹液和大便進行檢測，進行RT-PCR檢測總的陽性率為60.1%，陽性率明顯高于唐彥等的報道[6]。

此次遵義市爆發性流行的手足口病來勢力兇猛，而且病情較重，以混合病原體感染為主，占33.7%，并非單一病原體所致。

我國手足口病大多呈現CA16和EV71交替流行趨勢[7]，但每次流行往往并非單一病原體感染，而此次遵義市手足口病流行單種病原體感染比例也較高占26.3%，以腸道病毒通用型EV+為主，其次腸道病毒71型，最后是腸道柯薩奇病毒A16，與陳慧等的報道[8]有區別。

綜上所述，遵義市此次手足口病有別于其它地方報道的手足口病流行，以混合感染為主，而且以腸道病毒通用型為主的病原體感染，此次爆發流行的手足口病以秋冬季節為高峰，加上疾病主要分布在市區為主，感染主要以嬰幼兒為主，在近年來醫療技術有了較大進步，因此得到了有效控制。

[1] 孫軍玲，張靜.手足口病流行病學研究進展[J].中華流行病學雜志，2009，30(9):973-975.

[2] 李暉，方苓，莫艷玲，等.2008年廣東兒童手足口病流行病學及病原學相關臨床特征分析[J].中華傳染病雜志，2009，27(12):753-755.

[3] 韓建康，張宏，姚文庭，等.113例實驗室確診手足口病流行病學特征和臨床特點分析[J].中華實驗和臨床病毒學雜志，2009，23(6):464-466.

[4] 吳淑蓮，白琚.手足口病并發中樞神經系統感染危險因素的回顧性分析[J].廣東醫學，2011，32(22):2976-2978.

[5] Kirtaniya BC，Sachdev V，Singla A，et al.Marsupialization: a conservative approach for treating dentigerous cyst in children in the mixed dentition[J].J Indian Soc Pedod Prev Dent，2010，28(3):203-208.

[6] 唐彥，候俊，徐軍，等.實時熒光PCR檢測手足口病病原體方法的建立及初步應［J］.中華實驗和臨床病毒學雜志，2011，5（8）：617-618.

[7] 王利花，李軍.手足口病的流行病學及病原學研究進展[J].中國衛生事業管理，2010，6:419-421.

[8] 陳慧，馬江濤，馬學昱，等.寧夏手足口病患者病原學監測分析［J］.寧夏醫學雜志，2009，31（6）：515.

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.6.108

貴州 563002 貴州省遵義市第一人民醫院檢驗科 （庭永君陳德林 世琨 楊宇）