加味玉屏風(fēng)散對變應(yīng)性鼻炎大鼠模型中免疫球蛋白E的影響

田翠玲 雷小平 楚紅梅 稅民鴻 王定松 李維 鐘毅 唐嗣泉

加味玉屏風(fēng)散對變應(yīng)性鼻炎大鼠模型中免疫球蛋白E的影響

田翠玲 雷小平 楚紅梅 稅民鴻 王定松 李維 鐘毅 唐嗣泉

目的 探討加味玉屏風(fēng)散對變應(yīng)性鼻炎(allergic Rhinitis，AR)大鼠模型中免疫球蛋白E（IgE）的影響。方法 采用卵清蛋白對SD雌性大鼠做全身致敏與局部攻擊方法制作變應(yīng)性鼻炎大鼠模型，給予加味玉屏風(fēng)散灌胃后，心臟取血行ELISA法檢測免疫球蛋白E。結(jié)果 4組間比較,模型組中血漿免疫球蛋白E含量顯著高于正常組(P＜0.01)；2個治療組中免疫球蛋白E的含量明顯低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。2個治療組間免疫球蛋白比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 加味玉屏風(fēng)散能使變應(yīng)性鼻炎大鼠模型中免疫球蛋白E減少，可起到抗過敏反應(yīng)的作用。

鼻炎；變應(yīng)性；玉屏風(fēng)散；免疫球蛋白E

變應(yīng)性鼻炎(allergic rhinitis,AR)的發(fā)病機(jī)理屬于特異性IgE抗體介導(dǎo)的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，現(xiàn)發(fā)病率呈現(xiàn)逐漸增高的趨勢，此病為耳鼻喉科常見的難治性疾病，西醫(yī)多采用抗組胺和糖皮質(zhì)激素等治療，但其易復(fù)發(fā)，而中醫(yī)藥在改善患者體質(zhì)方面常有佳效，可減少變態(tài)反應(yīng)性疾病的復(fù)發(fā)治療。因此，本研究通過觀察玉屏風(fēng)散加味對AR大鼠模型中免疫球蛋白E的改變，探討加味玉屏風(fēng)散治療變應(yīng)性鼻炎機(jī)理，進(jìn)一步探討其調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能及改善患者的高敏狀態(tài)機(jī)理，為臨床治療提供科學(xué)的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 成年SD大鼠40只，體質(zhì)量180～240 g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)動物研究室提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及藥品 玉屏風(fēng)散加味：黃芪60 g、白術(shù)30 g、防風(fēng)30 g、細(xì)辛9 g、蒼耳子12 g、薄荷15 g、白芷15 g組成，由成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥房提供，按中醫(yī)傳統(tǒng)方法煎煮，濃度0.85 g生藥，灌胃。卵清蛋白（美國Sigma公司）；氫氧化鋁粉末（成都市科龍化工試劑產(chǎn)）；氯雷他定片：（上海先靈葆雅制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H 10970410）。ELISA試劑盒(美國RD公司)。

1.3 動物造模 成年SD大鼠40只，按體質(zhì)量隨機(jī)分成正常對照組、模型對照組，玉屏風(fēng)散加味組，氯雷他定組，每組各10只。參照章如新等[1]方法造模給予卵清蛋白2 mg，氫氧化鋁30 mg混懸液，行腹腔注射基礎(chǔ)致敏，隔日1次，共7次。再用5%卵清蛋白50 μL/側(cè)滴鼻做局部激發(fā)，每日1次，共7次。正常對照組以生理鹽水致敏，方法和步驟相同。

1.4 給藥方法 造模結(jié)束后第2天，將藥按人鼠劑量換算后給大鼠灌胃，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。玉屏風(fēng)散加味組：給予加味玉屏風(fēng)散按原方劑量煎取汁，中藥生藥12.6 g/kg灌胃；氯雷他定組：將氯雷他定片研磨后溶于生理鹽水中，給予氯雷他定片1 mg/ kg灌胃；正常對照組及模型對照組以生理鹽水代替。每組每日1次灌胃，每周6次，共2周。給藥期間乃給予持續(xù)局部抗原攻擊，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

1.5 標(biāo)本采集 在末次激發(fā)后30 min后，以10%水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射麻醉后，心臟取血，凝固30 min，1000 r/ min離心15 min，取出血清分裝，備ELISA檢查用。

1.6 實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)前20 min從冰箱中取出試劑盒；建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；加樣洗板；用抗大鼠IgE單抗包被于酶標(biāo)板上，IgE與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗大鼠IgE抗體，形成免疫復(fù)合物，加入終止液混勻。在492 nm處測吸光值。根據(jù)樣品OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上測定相應(yīng)大鼠IgE含量。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件分析，結(jié)果用“x±s”表示，進(jìn)行方差分析，選用LSD兩兩比較，比較前進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 大鼠模型評分標(biāo)準(zhǔn)及結(jié)果 大鼠模型于激發(fā)第3～5天后，大鼠出現(xiàn)明顯的噴嚏、清涕、搔鼻癥狀，一直持續(xù)到致敏結(jié)束后，正常對照組僅偶有抓鼻現(xiàn)象，個別大鼠打噴嚏，于末次激發(fā)后30 min內(nèi)，分別觀察動物搔鼻動作、噴嚏、清涕鼻部癥狀，各指標(biāo)采用疊加量化記分法，總分超過5分者為模型成功，評分標(biāo)準(zhǔn)見表1。模型對照組與正常對照組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。

表1 大鼠鼻部癥狀評分標(biāo)準(zhǔn)

2.2 免疫球蛋白E（IgE）檢測結(jié)果 正常對照組IgE低于模型對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義意義（P＜0.01）；模型對照組

IgE明顯高于玉屏風(fēng)散加味組和氯雷他定組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），2個治療組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表2。

3 討論

研究表明玉屏風(fēng)散能提高Thl／Th 2比值[2]，能使CD4＋／CD8

＋、IL-2分泌顯著上升，下調(diào)ICAM-1、IL-4的表達(dá)，減少P物質(zhì)釋放含量，提高IgG、IgA水平，調(diào)節(jié)cAMP、cGMP水平及比值，顯著改善免疫低下[3-5]；玉屏風(fēng)散尚能通過抑制嗜酸性粒細(xì)胞的活性，降低鼻粘膜組胺含量，提高紅細(xì)胞免疫功能改善AR患者的高敏狀態(tài)等。玉屏風(fēng)散具有雙向調(diào)節(jié)免疫功能[6-8]，提高IgG含量及巨噬細(xì)胞的吞噬功能，白細(xì)胞吞噬指數(shù)明顯上升[9]，可提高機(jī)體的細(xì)胞免疫功能，對于免疫抑制者，可使其TH細(xì)胞數(shù)明顯增加[10]。

本研究表明，模型大鼠經(jīng)玉屏風(fēng)散加味治療后癥狀明顯減輕，免疫球蛋白E顯著減少，而AR是IgE介導(dǎo)的鼻黏膜的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，這就提示我們玉屏風(fēng)散加味治療過敏性性鼻炎正是針對變應(yīng)性鼻炎發(fā)病的基本環(huán)節(jié)進(jìn)行治療。臨床上，玉屏風(fēng)散能明顯改善變態(tài)反應(yīng)性疾病患者的高敏狀態(tài)，玉屏風(fēng)散能抑制血清中IgE的產(chǎn)生，抑制變應(yīng)性鼻炎肥大細(xì)胞脫顆粒，抑制變態(tài)反應(yīng)的遲發(fā)相反應(yīng)的作用，以抑制其過敏癥狀[11]，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、改善過敏體質(zhì)、增強(qiáng)機(jī)體的抗病能力[2]，從而減輕呼吸道炎癥，降低呼吸道高反應(yīng)性，顯著緩解臨床癥狀，提高患者生活質(zhì)量。

表2 變應(yīng)性鼻炎大鼠模型評分及血清IgE水平(x±s，ng/mL)

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Objective To study the effects of Modified Yuping Feng San on Immunoglobulin E (IgE) of rat model with allergic rhinitis (AR). Methods Rat model of allergic rhinitis was produced by using ovalbumin on SD female rats. ELISA was used to detect heart blood immunoglobulin E after the model rats were given orally Modified Yuping Feng San. Results When compared between these four groups, the proportion of IgE in model group was significantly higher than normal group (P＜0.01). The counts of IgE in two treatment groups were less than model group, the difference was statistically significant (P＜0.01). Conclusion Modified Yuping Feng San can reduce IgE counts in the AR rat model, may play a role in anti-allergic.

Rhinitis; Allergy; Yu Ping Feng san; IgE

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.25.009

四川 611730 四川郫縣人民醫(yī)院眼科耳鼻咽喉科（田翠玲 雷小平楚紅梅 稅民鴻 王定松 李維 鐘毅） 川北醫(yī)學(xué)院耳鼻咽喉頭頸外科 （唐嗣泉）