朱頂紅新品種蘇紅離體增殖的影響因素

韋慶華　周玉珍　婁曉鳴等

摘要：以朱頂紅蘇紅的母株小鱗莖為外植體，通過在培養基中添加不同濃度組合的生長調節物質與抗褐化、污染的紫薯提取液、甲基紫提高增殖系數、降低褐化與污染。結果表明：在MS+6-BA 2.0 mg/L、NAA 0.01 mg/L+0.01 g/L 甲基紫培養基中，增殖系數最高，可達11.4，并能有效控制真菌污染和褐化。在繼代培養1～13代時，增殖系數基本保持在9～11，繼代14次以后增殖系數明顯降低。

關鍵詞：朱頂紅蘇紅；離體增殖技術；甲基紫；褐化現象；增殖系數；外植體；生長調節；真菌污染；繼代培養

中圖分類號： S682.2+50.4+3 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2015）03-0036-02

朱頂紅為石蒜科朱頂紅屬多年生鱗莖類草本植物，近幾年作為高檔盆栽花卉品種的種球都從國外引進[1]，我國缺少自主知識產權的品種與配套的規模化離體繁殖技術。蘇州農業職業技術學院長期從事朱頂紅品種資源引進與選育研究，近年從雜交后代中篩選出一批優良單株，通過分生擴繁形成株系，有些品系通過了江蘇省農作物品種審定委員會的鑒定，其中朱頂紅新品種蘇紅（Hippeastrum hybridumcv.Suhong）以其花大色艷且重瓣而深受市場青睞，因此離體快繁技術成為該新品種種球生產的關鍵技術。本試驗通過對朱頂紅新品種蘇紅離體增殖技術研究，為朱頂紅種球的大量繁殖提供技術依據。

1 材料與方法

1.1 材料

外植體材料取自朱頂紅新品種蘇紅種球，該品種花色草莓紅（RAL3018）和純白色（RAL9010）相間，重瓣，花瓣18～20瓣，冠徑18 cm，小花數4朵，株高32 cm，花期4—5月。試驗在蘇州農業職業技術學院相城科技園組培室內進行。

1.2 方法

1.2.1 初代培養

春季取母球側邊新長出的小籽球，洗凈，剝除外層的鱗片，保留1～2張長約2 cm的嫩葉，用洗衣粉將鱗莖清洗干凈后，在流水下沖洗1 h，用濾紙吸干表面水分后進行初代消毒處理，在超凈工作臺上用75%乙醇浸泡30 s，倒出乙醇，再倒入0.1%氯化汞浸泡12 min，用無菌水清洗5次，將小籽球的鱗莖橫切成帶鱗莖盤的0.5 cm小塊接入初代培養基MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L中，在培養室中培養[2]，平均50 d轉接1次，經3次同一培養基轉接培養，球徑長至0.4～0.5 cm時轉入增殖培養基中，培養條件為：溫度（25±1） ℃，光照12 h/d，光照度3 000 lx 左右。

1.2.2 繼代（增殖）培養

將初代培養的小球莖轉入添加不同生長調節物濃度的增殖培養基（MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L、MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.01mg/L、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L、MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L）中，將初代培養的種球按四分法切割，每小切塊帶有部分鱗莖盤，50 d后對增殖系數與發生根數進行統計。每瓶增殖系數=增殖后球莖發生數量/接種數，每處理統計10瓶，用于數據分析。

1.2.3 紫薯提取液制作與甲基紫添加方法

紫薯提取液制作方法參考Lu等的方法[3]并進行改良。稱取250 g紫薯+750 g純凈水，先將稱好的紫薯微波爐煮熟，紫薯和純凈水混合煮沸10 min，將紫薯碾碎后與同煮的水混合，用80目篩過濾混合液，得過濾液400 mL。紫薯液添加量分別為0、50、150、200 mL/L，加入增殖培養基中備用，用增殖培養基添加0.01 g/L甲基紫作為對照，每處理50瓶，轉接30 d后對培養瓶苗的污染與褐化率進行統計，50 d后統計增殖生長情況。

2 結果與分析

2.1 不同生長調節劑對鱗莖增殖的影響

把鱗莖切割小塊轉接在添加不同生長調節劑的增殖培養基中進行培養，結果見表1。表1顯示，增殖培養基MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L、MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L中培養的鱗莖增殖系數差異不顯著（P>0.05），其中培養基MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L中鱗莖的增殖系數最高，為11.0，但根數最少，為0.2條，根系細弱；培養基MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L中的增殖系數最低，為3.8，而平均根條數最多，為4.9條，且根系粗壯，與MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L、MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 001 mg/L、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L增殖培養基中鱗莖增殖系數差異顯著。由此可以看出，初代培養基 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L已不適宜繼續用于增殖培養中。

在培養基MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L中的細胞分裂素6-BA的濃度相同，提高生長素NAA的濃度則不利于增殖系數的提高，即在增殖培養中產生的根系越少，鱗莖的增殖系數越高，NAA應該控制在0.01 mg/L。增殖培養基MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L、MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 001 mg/L中培養的鱗莖增殖系數和根數差異不顯著（P>005），可見細胞分裂素6-BA濃度的提高并不利于鱗莖的增殖，還出現了小球的玻璃化現象，因此增殖培養的最佳配方為MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L。

2.2 紫薯提取液、甲基紫對增殖培養的影響