不同分子亞型青年乳腺癌表皮生長因子受體表達及其臨床病理分析

李榮崗 孫麗霞 劉瓊茹 廖悅華 余衛東 周 偉

中山大學附屬江門醫院 廣東省江門市中心醫院病理科，廣東 江門 529030

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，多發生于絕經前后女性，但近年來其發病率呈明顯年輕化趨勢，青年乳腺癌患者所占的比例也明顯增加。目前對于青年乳腺癌的年齡界定尚未界定，而國內文獻大多定義為35歲以下的乳腺癌患者。一般認為，青年乳腺癌患者在生物學行為和預后方面與其他年齡組患者不同[1-2]。乳腺癌可依據其分子表達特點分為不同的亞型。目前臨床上常根據雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）和人表皮生長因子受體2（human epidemlalgrowth factor receptor-2，HER2）的表達狀況，將乳腺癌分為管腔上皮型（包括 Luminal A 和 B）、HER2過表達型 （ER、PR 陰性，HER2陽性過表達）和基底樣型（ER、PR和HER2均陰性表達）[3]。表皮生長因子受體（EGFR）在多種實體腫瘤中異常表達或高表達，與腫瘤治療和預后密切相關，近年來研究發現其與乳腺癌浸潤和轉移等不良預后相關[4]。本研究分析EGFR在不同亞型青年乳腺癌中的表達情況，并探討其與臨床病理的關系，以期對臨床的個體化治療及預后提供參考價值。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

收集廣東省江門市中心醫院2003年5月～2014年7月經手術切除及病理證實的青年浸潤性乳腺癌182例的手術切除標本。患者均為女性，年齡18～35歲，平均（28.5±0.1）歲，占同期乳腺癌的 9.52%（182/1912），雙側罹患率差異無統計學意義（左側∶右側為1.05∶1.00，P＞0.05），與文獻報道一致[5]。本研究經醫院倫理委員會研究通過，所有患者均同意并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 制片 所有手術切除標本均經10%中性福爾馬林固定，固定時間為12～24 h，常規脫水、石蠟包埋，4 μm 連續切片，Leica（型號 ST5020）全自動 HE染色儀染色，Leica（型號CV5030）全自動封片機封片；同時，連續切取10張硅化白片備用。

1.2.2 檢測方法 應用BenchMARK XT全自動免疫組化儀，采用Envision二步法檢測腫瘤組織中ER、PR、HER2及 EGFR 表達情況；ER（克隆號 EP1）、PR（克隆號EP2）和EGFR（克隆號UMAB96）購自北京中杉金橋生物科技有限公司，HER2購自Ventana（克隆號4B5）。所有組織均設陽性及陰性對照。

1.2.3 結果判讀 ER和PR均定位于細胞核，評分標準采用ASCO/CAP發布的檢測指南[6]，以檢測樣本中至少1%的腫瘤細胞核陽性即判定為陽性。HER2定位于細胞膜，判讀標準按照《乳腺癌HER2檢測指南（2014版）》[7]，以＞10%的浸潤癌細胞呈現強而完整的細胞膜染色判讀為陽性。EGFR定位于細胞膜和細胞漿，應用雙評分半定量法判斷陽性細胞染色深度和陽性細胞百分率，具體標準[8]：細胞無著色計0分，輕度著色計1分，中度著色計2分，深度著色計3分；然后在高倍鏡下隨機選取10個高倍視野（400×）計數500個細胞中染色陽性的細胞，計算其占總細胞數的百分比，根據陽性細胞的比例計分：0～5%細胞著色計0分，6%～25%細胞著色計1分，26%～50%細胞著色計2分，51%～75%細胞著色計3分，＞75%細胞著色計4分。以上兩種計分標準之和≥4分者為陽性，＜4分為陰性。

1.3 統計學方法

數據采用SPSS l7.0統計軟件包進行分析，采用統計軟件SPSS 15.0對數據進行分析，正態分布計量資料以均數±標準差（）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數資料以率表示，采用χ2檢驗。采用COX比例風險模型分析相對危險度。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 182例青年乳腺癌分子分型及各型EGFR陽性情況

依據分子表達特點，按照文獻[9-10]標準，青年乳腺癌分為4個亞型，即Luminal A型（108例）、Luminal B 型（9例）、HER2過表達型（47例）和 Basal-like型 （26例）。182例青年乳腺癌中EGFR陽性率為62.1%（113例）， 其中為 Luminal A型為 43.5%（48例），Luminal B 型為 22.2%（2例），HER2過表達型為93.6%（44例），Basal-like型為 73.1%（19例）。統計學分析結果顯示：不同分子亞型青年乳腺癌中EGFR陽性表達率差異有統計學意義 （χ2=35.154，P＜0.05）；HER2過表達型EGFR陽性表達率最高，明顯高于Basal-like型 （χ2=5.974，P＜0.05），Luminal B 型 （χ2=26.248，P＜0.05）；但 Luminal A 型和 Luminal B 型比較，差異無統計學意義（χ2=1.676，P ＞ 0.05）。

2.2 EGFR陽性不同分子亞型青年乳腺癌與臨床病理的關系

EGFR陽性不同分子亞型青年乳腺癌與腫瘤大小和組織學分級無關（P＞0.05），但與TNM分期、淋巴結轉移數及是否有遠處轉移有關（P＜0.05）。見表1。

2.3 COX比例風險模型分析結果

結果顯示：患者TNM分期和HER2表達是影響該組患者預后的獨立因素，且TNM分期對預后影響最大，相對危險度為6.013（P＜0.05），其次為HER2表達，相對危險度分別為2.612（P＜0.05）。

3 討論

乳腺癌越來越成為影響女性健康的惡性腫瘤之一，其發病率呈現年輕化趨勢。文獻報道認為青年乳腺癌具有較強的侵襲性，預后不良[8-9]。近年來，隨著分子生物學和基因組學的迅猛發展，雖然乳腺癌的個體化治療取得較大突破，但對于青年乳腺癌患者的治療及預后不能令人滿意。腫瘤分子分型最早在1999年由美國國立癌癥研究所提出，通過綜合的分子分析技術使腫瘤的分類基礎由形態學轉向以分子特征為基礎的新的腫瘤分類系統。目前，臨床廣泛應用的是Perou和Sorlie的分型方法[9-10]。EGFR是表皮生長因子（EGF）受體，屬于酪氨酸受體家族的一種，廣泛分布于哺乳動物的上皮細胞級膠質細胞，與細胞的生長、增殖及分化密切相關。EGFR在多種腫瘤中異常高表達，與腫瘤如乳腺癌、結直腸癌、胃癌和卵巢癌的不良預后有關[12-15]。近來，針對EGFR過表達的靶向藥物拉帕替尼已應用到臨床，因青年乳腺癌中EGFR存在高表達，故篩選并檢測乳腺癌EGFR對于指導治療和判斷預后具有重要意義。本研究分析182例不同分子亞型青年乳腺患者EGFR表達情況，研究結果顯示不同分子亞型青年乳腺癌中EGFR陽性表達率差異有統計學意義（χ2=35.154，P＜0.05），其中 HER2過表達型EGFR陽性表達率最高（93.6%），提示EGFR和HER2在青年乳腺癌的發生和發展中可能具有協同機制。

表1 EGFR陽性不同分子亞型青年乳腺癌與臨床病理的關系（例）

本研究同時分析EGFR陽性不同分子亞型青年乳腺癌與臨床病理特征的關系，結果顯示：EGFR陽性不同分子亞型青年乳腺癌與腫瘤大小和組織學分級無關（P＞0.05），但與TNM分期、淋巴結轉移數及是否有遠處轉移有關（P＜0.05）。研究結果表明腫瘤大小和組織學分級對于EGFR陽性不同分子亞型青年乳腺癌患者并不是目前的預后因素，而是和臨床高分期呈正相關。COX比例風險模型分析結果顯示：患者TNM分期是影響該組患者預后的獨立因素，TNM分期對預后影響最大，相對危險度為6.013（P＜0.05），其次為 HER2，相對危險度分別為 2.612（P＜0.05）。因EGFR、HER2均屬于I型跨膜酪氨酸激酶生長因子受體成員，具有酪氨酸激酶活性，它們與配體結合后導致DNA合成增加，引起細胞的過度分裂與增殖，同時對腫瘤的浸潤轉移有促進作用，本研究結果顯示EGFR陽性的腫瘤細胞更具有早期浸潤和淋巴結轉移的趨勢，與文獻報道一致[17]。

一般認為，腫瘤分級及分期越高，預后越差。不同分子亞型青年乳腺癌中EGFR表達與臨床分期呈明顯正相關，提示該組患者預后差與其他亞型。隨著抗EGFR靶向藥物拉帕替尼的應用，為該組患者帶來新的希望，同時也為精準檢測乳腺癌中EHFR表達情況提出挑戰。本研究基于免疫組化方法，由全自動免疫組化儀完成，結果相對可靠。

綜上所述，不同分子亞型青年乳腺癌中EGFR陽性表達率不同，檢測青年乳腺癌EGFR對于指導臨床制訂合理的個體化治療方案及準確評估預后具有重要意義。

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