黃秋葵提取物的抗疲勞活性研究

溫春秀，賈東升，謝曉亮，崔施展，李榮喬，劉靈娣，劉銘（河北省農林科學院經濟作物研究所，藥用植物研究中心，河北石家莊050051）

黃秋葵提取物的抗疲勞活性研究

溫春秀，賈東升，謝曉亮*，崔施展，李榮喬，劉靈娣，劉銘
（河北省農林科學院經濟作物研究所，藥用植物研究中心，河北石家莊050051）

摘要：研究不同提取溶劑的黃秋葵提取物抗疲勞活性。制備水、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇部位黃秋葵提取物，通過小鼠負重游泳時間、測定血清尿素氮、肝糖原和血乳酸含量，比較不同提取溶劑的黃秋葵提取物抗疲勞活性。水提物及醇提物均可延長小鼠負重游泳時間，提高肝糖原水平，減少運動過后小鼠血乳酸、血清尿素氮的積累，不同提取溶劑的黃秋葵提取物抗疲勞活性強弱順序為：水＞乙醇＞乙酸乙酯＞正丁醇。秋葵水提物及醇提物均有明顯抗疲勞活性。

關鍵詞：黃秋葵；活性部位；抗疲勞

黃秋葵屬于錦葵科秋葵屬一年生草本植物，具有食用價值同時具有極高的藥用保健價值。黃秋葵的根、莖、葉、花、果實均可食用，黃秋葵含有多糖、黃酮、氨基酸等多種生物活性物質及微量元素，具有明顯的補腎益氣，強肝健脾，增強免疫力，抗氧化，抗疲勞活性[1-3]。黃秋葵具有的食用及藥用價值使其成為近年來的研究熱點。對于黃秋葵的抗疲勞活性已有進行了初步研究，研究表明黃秋葵水提液具有抗疲勞作用[4]，黃秋葵的其他溶劑提取物是否具有抗疲勞活性并未闡述。為了深入研究黃秋葵抗疲勞物質的活性成分，本試驗比較了不同提取溶劑的黃秋葵提取物抗疲勞活性，探討黃秋葵抗疲勞部位及可能的抗疲勞物質，為黃秋葵的進一步開發(fā)利用提供參考。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

黃秋葵（河北農林科學院經濟作物研究所提供，經謝曉亮鑒定為黃秋葵）；C57/BL6小鼠（雄性，體重20 g～25 g，北京維通利華實驗動物技術有限公司，實驗動物合格證號SCXK（京）2015-0011）；氯仿、正丁醇、無水乙醇、乙酸乙酯（北京化工廠，分析純）；乳酸（LA）測試盒、尿素氮（BUN）測試盒、糖原測試盒（南京建成生物工程研究所）；水為高純水。

755型紫外-可見分光光度計：上海精密儀器有限公司；S2359體育專用秒表：伊商信電子深圳有限公司。

1.2方法

1.2.1黃秋葵提取物的制備

取黃秋葵100 g以50%乙醇進行提取，回收乙醇，濃縮，浸膏先后以正丁醇、乙酸乙酯、乙醇進行萃取，分別收集正丁醇、乙酸乙酯、乙醇和水部分進行濃縮，得各部位提取物[5]。

1.2.2動物分組與給藥

取健康小鼠，隨機分成5組：不同溶劑提取液進行灌胃，每種提取液設置5個不同濃度分別為20、30、40、50、60 mg/kg及空白組使用生理鹽水，連續(xù)灌胃給藥25 d，建模期間自由飲食和飲水。

1.2.3負重游泳實驗

小鼠末次灌胃60 min后，在小鼠尾根部負以小鼠體體重5%的鉛皮，放入水深30 cm的游泳箱中游泳，水溫（30±1）℃。當小鼠頭部沉入水中經10 s后仍不能返回水面視為力竭，用秒表記錄從游泳開始至力竭的時間作為小鼠力竭游泳時間[6]。

1.2.4血乳酸測定

小鼠末次灌胃30 min后，于小鼠尾部系一小鼠體重5%的鉛塊，水中游泳10 min，水溫（25±0.5）℃，運動后休息20 min，眼眶后靜脈叢取血，肝素抗凝，按照試劑盒方法測定血乳酸濃度[8]。

1.2.5血清尿素氮測定

小鼠末次灌胃30 min后，將小鼠置于水深30 cm的游泳箱中，水中游泳90 min，水溫（25±0.5）℃，運動后休息60 min，眼眶后靜脈叢采血，肝素抗凝，2 500 r/min離心15 min，取血漿按照試劑盒方法測定血尿素氮濃度[9]。

1.2.6肝糖原測定

小鼠末次灌胃30 min后，脫頸處死，稱取肝臟約50 mg，按照試劑盒方法測定肝臟糖原含量[10]。

1.2.7統(tǒng)計分析

2　結果與分析

2.1黃秋葵提取物對小鼠游泳時間的影響

黃秋葵提取物對小鼠游泳時間的影響見表1。

小鼠負重游泳時間可以直接反應小鼠運動耐力，在負重游泳是需要消耗大量能量，造成體內糖原的減少，血乳酸及血尿素氮的積累增加，從而造成機體的肌肉及中樞系統(tǒng)性疲勞[7]，負重游泳時間越長，表明抗疲勞活性越高。由表1可知，黃秋葵提取物可延長小鼠負重游泳時間，其中水部位及乙醇部位中高劑量的延長效果與對照組比較存在顯著性差異（P＜0.05），說明黃秋葵的水部位及乙醇部位具有較好的抗疲勞作用。

表1　不同溶劑提取物對小鼠負重游泳時間的影響（±S，min）Table 1　Effect of different extracts on the time of load swimming in mice（±S，min）

表1　不同溶劑提取物對小鼠負重游泳時間的影響（±S，min）Table 1　Effect of different extracts on the time of load swimming in mice（±S，min）

注：*表示與對照組比較P＜0.05；**表示與對照組比較P＜0.01。

劑量/ （mg/kg）　空白組　　水組　　乙醇組　　乙酸乙酯組正丁醇組20　12.4±2.4　18.7±3.2*　18.5±3.3*　13.1±2.4　13.2±2.1 30　12.6±1.8 25.3±4.2**23.2±4.5**　14.4±3.1　14.4±1.8 40　11.8±1.6 27.7±6.1**26.8±6.2**　15.3±2.5　14.2±1.5 50　12.7±2.3 30.6±4.4**28.7±5.3**　15.2±3.4　15.5±2.3 60　13.2±2.1 33.7±5.8**32.4±5.7**　15.5±3.2　15.4±2.5

2.2黃秋葵提取物對血乳酸含量的影響

黃秋葵提取物對血乳酸含量的影響見表2。

表2　不同溶劑提取物對小鼠血乳酸含量的影響（±S，mmol/L）Table 2　Effects of different extracts on blood lactic acid content in mice（±S，mmol/L）

表2　不同溶劑提取物對小鼠血乳酸含量的影響（±S，mmol/L）Table 2　Effects of different extracts on blood lactic acid content in mice（±S，mmol/L）

注：*表示與對照組比較P＜0.05；**表示與對照組比較P＜0.01。

劑量/ （mg/kg） 空白組　　水組　　乙醇組　　乙酸乙酯組　正丁醇組20　25.2±2.1　21.7±5.8　22.4±5.7　24.5±3.2　24.9±4.5 30　25.7±2.3　19.6±4.4　17.7±2.3*　24.2±3.4　24.6±2.3 40　25.6±1.8 19.3±2.2*　16.9±2.5**　23.8±3.1　24.5±3.8 50　25.4±2.4 18.7±3.2*　16.5±3.3**　23.4±2.4　24.4±2.1 60　25.8±1.6 18.5±4.1*　16.3±6.2**　22.9±2.5　24.4±3.5

在機體運動過程中由于供氧量不足，造成機體進行無氧呼吸產生乳酸，乳酸的大量積累會導致肌肉疲勞，降低運動過程中血乳酸濃度可延緩機體疲勞的發(fā)生，運動后乳酸含量越低，表明抗疲勞活性越高。由表2可知，黃秋葵水部位及乙醇部位具有明顯的乳酸清除能力，其中水及乙醇中劑量與對照組差異顯著（P＜0.05），高劑量與對照組差異極顯著（P＜0.01），對血乳酸的清除能力存在明顯的劑量效應，具有較強的抗疲勞活性。

2.3黃秋葵提取物對血清尿素氮的影響

黃秋葵提取物對血清尿素氮的影響見表3。

血清尿素氮是運動過程中氨基酸的代謝產物，血清尿素氮的積累可引起肌肉組織的損傷，造成肌肉疲勞。清除運動過程中產生的血清尿素氮，可降低肌肉損傷緩解疲勞。由表3可知，黃秋葵水部位及乙醇部位具有明顯的血清尿素氮清除能力（P＜0.05），具有劑量效應。

表3　不同溶劑提取物對小鼠尿清素氮含量的影響（±S，mmol/L）Table 3　Effect of different extracts on the urea nitrogen content in mice（±S，mmol/L）

表3　不同溶劑提取物對小鼠尿清素氮含量的影響（±S，mmol/L）Table 3　Effect of different extracts on the urea nitrogen content in mice（±S，mmol/L）

注：*表示與對照組比較P＜0.05；**表示與對照組比較P＜0.01。

劑量/ （mg/kg）　空白組　　水組　　乙醇組　　乙酸乙酯組　正丁醇組20　25.2±2.1　21.7±2.8　23.4±3.7　24.5±3.2　25.1±2.5 30　25.7±2.3　20.9±2.1*　21.7±2.3　24.2±3.4　24.9±4.3 40　25.6±1.8　20.1±3.2*　20.2±1.5*　23.9±3.1　24.7±2.8 50　25.4±2.4　19.7±2.8*　19.5±3.3*　23.5±2.4　24.4±3.1 60　25.8±1.6 18.2±2.5**18.8±2.2**　23.3±2.5　24.2±4.5

2.3黃秋葵提取物對肝糖原的影響

黃秋葵提取物對肝糖原的影響見表4。

表4　不同溶劑提取物對小鼠肌糖原含量的影響（±S，mg/g）Table 4　Effects of different extracts on muscle glycogen content in mice（±S，mg/g）

表4　不同溶劑提取物對小鼠肌糖原含量的影響（±S，mg/g）Table 4　Effects of different extracts on muscle glycogen content in mice（±S，mg/g）

注：*表示與對照組比較P＜0.05；**表示與對照組比較P＜0.01。

劑量/ （mg/kg） 空白組　　水組　　乙醇組　　乙酸乙酯組正丁醇組20　10.4±2.4　12.7±3.2　13.5±3.3　10.1±4.4　9.8±2.1 30　9.6±1.8　15.3±4.2**　17.2±4.5*　10.4±3.1　10.1±2.8 40　9.8±1.6　18.7±3.1**19.8±6.2**　10.8±2.5　10.3±2.5 50　9.7±2.3　19.6±4.4**20.7±5.3**　11.2±3.4　10.5±3.3 60　10.2±2.1 21.7±5.8**22.4±5.7**　11.5±3.2　10.9±4.5

在機體運動是需消耗大量糖原來提供能量，黃秋葵提取物可以維持機體較高的肝糖原水平，減少因供能不足引起的肌肉組織氨基酸水平降低而造成的肌肉疲勞。由圖4可知，不同提取溶劑的黃秋葵提取物在小鼠運動后肝糖原水平均高于對照組，其中水部位及乙醇部位的肝糖原水平較高（P＜0.05），乙酸乙酯及正丁醇部位的肝糖原水平與生理鹽水差異不大。

3　結論與討論

本研究比較了黃秋葵不同提取部位的抗疲勞活性，同過比較小鼠負重游泳時間，血乳酸、血清尿素氮含量及肝糖原水平，結果顯示，黃秋葵水部位及乙醇部位延長小鼠負重游泳時間，清除血乳酸、血清尿素氮及維持較高的肝糖原水平方面均有較強生理活性，表明黃秋葵的水及乙醇部位均有較強的抗疲勞活性，乙酸乙酯及正丁醇部位抗疲勞活性較差。抗疲勞活性較好的部位主要集中在水及乙醇部位，推測黃秋葵中抗疲勞物質可能極性較大的物質如：多糖、黃酮、多酚類物質。黃秋葵的抗疲勞作用究竟是單一物質還是多種化合物的綜合作用結果有待進一步研究。

參考文獻：

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DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.23.043

收稿日期：2015-10-22

基金項目：河北省農林科學院青年基金項目（A2015050101）；河北太行山區(qū)特色功能保健食品的開發(fā)研究（11231005D）；河北省中藥材產業(yè)體系項目（11232025D）

作者簡介：溫春秀（1965—），女（漢），研究員，碩士研究生，主要從事中藥資源、中藥加工研究。

*通信作者：謝曉亮（1962—），男，研究員，博士，主要從事中藥資源、中藥加工研究。

Study on the Anti-fatigue Activity of Extracts from Okra

WEN Chun-xiu，JIA Dong-sheng，XIE Xiao-liang*，CUI Shi-zhan，LI Rong-qiao，LIU Ling-di，LIU Ming
（Institute of Cash Crops of Hebei Academy of Agriculture and Forestry Sciences，Centre of Medicinal Plant Research，Shijiazhuang 050051，Hebei，China）

Abstract：To study the anti-fatigue activity of different extracts from Okra.Preparation of water，ethanol，ethyl acetate，is butanol okra extract，the loaded swimming time of mice and determination of serum urea nitrogen，liver glycogen and blood lactic acid content determine the anti-fatigue activity of different extracts from okra. Water provided material and alcohol extract could prolong the swimming time of the mice，enhance the liver glycogen level，reduce the movement after the mice blood lactic acid，serum urea nitrogen accumulation，the anti-fatigue activity of different extracts from Okra intensity sequence：water＞ethanol＞ethyl acetate＞nbutanol.Okra water extract and ethanol extract had obvious anti fatigue activity.

Key words：okra；active site；anti fatigue