膠體金法聯合酶聯免疫吸附測定檢測血清乙肝表面抗原

屈方政

膠體金法聯合酶聯免疫吸附測定檢測血清乙肝表面抗原

屈方政

目的 分析膠體金法（GIA）與酶聯免疫吸附測定（ELISA）聯合用于血清乙肝表面抗原（HBsAg）檢測中的價值。方法 選取血清標本12576份，均行膠體金法和酶聯免疫法檢測HBsAg，對結果進行分析。結果 膠體金法檢測HBsAg陽性率為2.03%（255/12576），ELISA法檢測HBsAg陽性率為2.09%(263/12576)。2例血標本膠體金法檢測為陽性，ELISA法檢測為陰性；10例血標本膠體金法檢測為陰性，ELISA檢測為陽性。12例標本中11例經中和確認或HBV-DNA檢測后確定為陽性。結論 膠體金法與酶聯免疫法檢測血清HBsAg均有較高的特異性，二者聯合應用可進一步提高陽性率。

膠體金法；酶聯免疫吸附測定；血清乙肝表面抗原

目前血清乙肝表面抗原（HBsAg）檢測方法有較多種，其中酶聯免疫吸附測定（ELISA）最為常用，膠體金法（GIA）作為一種快速應急的檢測方法也逐漸受到重視，但受檢測方法的限制，易出現假陰性和假陽性現象[1]。本研究主要探討膠體金法與ELISA兩種方法在血清HBsAg檢測中的聯合應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源 本研究標本來源于2013年1月～2013年12月在廣西桂林陽朔縣葡萄鎮衛生院行健康體檢者的血液標本，乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)抗凝處理后待檢，血清標本質量均良好、無溶血、脂血或長菌現象，共收集12576份血標本。

1.2 方法

1.2.1 試劑 HBsAg膠體金法試劑購自杭州艾康生物技術公司，HBsAg酶聯免疫法試劑購自藍十字生物藥物（北京）生物有限公司，質控血清由衛生部臨檢中心提供。

1.2.2 儀器 使用進口YT-WASH 1自動洗板機，TECAN-EVLYZER全自動酶聯免疫分析儀，國產恒溫水浴箱。所有儀器性能均穩定，實驗前進行校準。

1.2.3 檢測方法 嚴格按照說明書操作要求，先采用膠體金法對12576份血清標本進行檢測，再使用ELISA復檢。（1）膠體金法：以微量移液器吸取80μL血清滴入各個監測孔中，室溫下放置15～30min，觀察顯示結果，以檢測線和質控線各出現紅線為陽性，僅質控線出現紅線為陰性，僅檢測線出現紅線為檢測結果無效；（2）酶聯免疫法：在相應孔中分別加入陰性和陽性對照血清、質控品和待檢標本，在各個孔中加入酶標抗體，混勻后在37℃下孵育60min，洗板、加底物，37℃下避光反應15min，在實驗管理軟件中按照說明書編寫程序，自動判讀結果以S/CO值＞1.0為陽性。對于膠體金法判讀為陽性的標本，以ELISA復檢，若ELISA檢測S/CO值＞1.0，則則報告為陽性結果；若ELISA為陰性，則選兩種不同廠家ELISA試劑做雙孔復檢，兩種試劑重復陽性則報告為陽性，反之做HBV-DAN或中和確認確定結果；ELISA檢測S/CO值介于0.5～1.0的標本，使用兩種ELISA試劑做雙孔復檢，兩種試劑重復陽性則報告為陽性，反之做HBV-DAN或中和確認確定結果；膠體金法為陰性和ELISA檢測S/CO值＜0.5的標本，直接報告為陰性。

1.3 觀察指標 觀察比較兩種方法檢測HBsAg陽性率；對兩種方法陽性結果不同的標本乙型肝炎表面抗體（HBsAb）、乙型肝炎E抗原（HBeAg）、乙型肝炎E抗體（HBeAb）、乙型肝炎核心抗體（HBcAb）和乙型肝炎病毒基因（HBV-DNA）檢測結果進行分析。

2 結果

12576份血清標本中，GIA法檢測HBsAg陽性率為2.03%（255/12576），ELISA法檢測HBsAg陽性率為2.09%(263/12576)。2例血標本GIA檢測為陽性，ELISA法檢測為陰性，10例血標本GIA法檢測為陰性，ELISA檢測為陽性。見表1。此12例標本HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb和HBVDNA檢測結果見表2。

表1 GIA法和ELISA法檢測血清HBsAg陽性結果（n）

表2 12例GIA法和ELISA法陽性結果不同的標本檢測結果

3 討論

乙型肝炎目前已成為威脅人類健康的世界性疾病，也是我國當前流行最廣泛、危害性最嚴重的一種疾病，HBsAg是已感染乙型肝炎病毒的標志，其檢測結果是診斷乙型肝炎感染的重要依據[2-3]。ELISA是目前檢測HBsAg最為常用的方法之一[4]，在HBsAg檢測中的特異性、敏感性均較高，但操作過程較為繁瑣，操作過程中影響檢測結果的因素多，不適用于單份樣本檢測檢測中，同時對檢測設備及檢測人員操作技術有較高的要求[5]。 GIA法上世紀80年代末發展起來的一種免疫標記技術，可用于HBsAg、HCG及抗雙鏈DNA抗體等的快速檢測中[6]，無沖洗過程，操作簡單，且可用于單份標本檢測中，具有快速、簡便、無污染等多個優點，但其靈敏度稍差，本研究中GIA法的陽性率即稍低于ELISA法，與同類研究報道結果一致[7-8]。由于兩種方法各具優缺點，本院在檢測血清HBsAg時將兩種方法聯合使用，結果發現，2例GIA法為陽性而ELISA法為陰性和10例GIA法為陰性而ELISA法為陽性的標本，經中和確認或HBV-DNA檢測后11例判定為陽性，表明二者聯合應用對于降低假陰性和假陽性有著重要作用。

綜上所述，血清HBsAg檢測中，ELISA法和GIA法各有優缺點，臨床中聯合應用兩種方法，以GIA法為參考，以ELISA法作為最終檢測結果，發揮二者的協同作用，可進一步提高血清HBsAg檢測準確性，對于降低檢驗結果誤差有著重要意義。

[1] 張曉飛.膠體金法與酶聯免疫法聯合檢測HBsAg的結果比較[J].中國當代醫藥，2013，20(18):94-95.

[2] 王克成，周國芳，常秋月，等.酶聯免疫法和膠體金法測定HBsAg的比較[J].中國現代醫生，2010，48(5):94，103.

[3] 祝擷英，張宏星.兒童乙肝前S1抗原與血清標志物及HBV-DNA檢測結果分析[J].當代醫學，2009，15(28):44-45

[4] 徐祥蓮，楊南，張曉麗，等.用膠體金法快速篩查無償獻血者HBSAg結果分析[J].實驗與檢驗醫學，2011，29(5):558，554.

[5] 董韶偉.ELISA法與膠體金試紙條檢測HBsAg差異分析[J].中國醫師雜志，2011，2(z2):124.

[6] 易巧明.2004～2008年攸縣食品和公共場所從業人員健康檢查HBV感染情況分析[J].當代醫學，2010，16(9):153-154.

[7] 張小麗，王貝晗，張景，等.膠體金法檢測乙肝病毒血清標志物的實驗研究[J].武警醫學，2011，22(5):404-405.

[8] 蔡木發，吳顯勁，李靜.300例HBV前S1抗原與HBV標志物及HBVDNA檢測結果分析[J].臨床醫學與臨床，2011，8（10）：1177-1178.

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.4.109

廣西 541903 廣西桂林陽朔縣葡萄鎮衛生院（屈方政）