RP-HPLC 法測定那如八味丸中沒食子酸的含量分析

賈福群

(內蒙古醫科大學附屬醫院藥劑部，呼和浩特市 010059)

那如八味丸(那如-8)收載于《衛生部藥品標準》蒙藥分冊［1］。由訶子、制草烏、蓽茇、芒果核、蓮子、白豆蔻、苦石蓮、石決明組方。訶子為方中君藥。該藥主要具祛寒功效，臨床上用于治療胃寒食積、消化不良、腎虛、腎寒、腰腿酸痛。據文獻報道［2］，訶子主要含揮發油、多烯炔衍生物類、黃酮類、萜類化合物、香豆精類、生物堿類等化學成分，沒食子酸為其主要活性成分。原質量標準無內在質量監控指標，我們參照《中國藥典》2005年版一部［3］相關品種項下的方法與條件進行了含量測定的分析研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：美國Alltech 高效液相色譜儀，M626 輸液泵，UVIS-201 型檢測器;美國Alltech 高效液相色譜儀;Alltech UVIS 200 Detector 檢測器;Alltech 426 HPLC Pump 泵;Alltech Chromstation 色譜工作站;島津UV-250 型紫外可見分光光度儀;KQ3200DB 型數控超聲波清洗器。

1.2 試劑：甲醇為色譜純試劑，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

1.3 對照品：沒食子酸為中國藥品生物制品檢定所提供(批號：953 -200611)。

1.4 樣品：批號：080611、080620、080625 內蒙古庫倫蒙藥廠。

1.5 色譜條件：Alltech RP - C18 色譜柱(4.6 mm ×250 mm，5m)，ODS 預柱;檢測波長273nm;流動相：甲醇-0.2磷酸溶液(15∶ 85);流速：1.0mL/min;柱溫∶ 30℃;進樣量：10μL。

1.6 檢測波長的選擇：參照《中國藥典》2005年版一部"五倍子"項下方法，制備沒食子酸對照品溶液，在240 ～320nm波長范圍內進行光譜掃描，沒食子酸在273nm 有最大吸收，故確定檢測波長為273nm。

1.7 對照品溶液的制備：取沒食子酸對照品適量，加50%甲醇制成每1mL 含50μg 的溶液，即得。

1.8 供試品溶液的制備：取重量差異項下本品3g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入4mol/L 鹽酸溶液甲醇100mL，稱定重量，加熱回流4h，放冷，濾過，精密量取續濾液25mL，置100mL 量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。

2 方法學考察

2.1 線性關系考察：精密稱取沒食子酸對照品3.0452mg，置25mL 量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL 置10mL 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，以10μL 進樣，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以沒食子酸進樣量(μg)對峰面積積分值(A)進行線性回歸，結果沒食子酸在μg 范圍內呈良好線性關系。回歸方程：Y=92030X+36125，r=0.9998(Y 為峰面積積分值，X 為對照品進樣量)，結果見表1。

表1 標準曲線測定結果

2.2 精密度試驗：取供試品溶液，連續重復進樣6 次，測得供試品中沒食子酸的峰面積積分值，RSD ＜2%。試驗表明，精密度良好，結果見表2。

表2 精密度試驗結果

2.3 穩定性試驗：取供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12h 進樣10μL，供試品中沒食子酸的峰面積積分值基本不變，RSD ＜2%。試驗結果表明，供試品在12h 內穩定性良好，結果見表3。

表3 穩定性試驗結果

2.4 重復性試驗：取樣品(批號：080611)按上述供試品溶液制備方法平行制備5 份，每份進樣2 針，測得峰面積積分值，含量平均值的RSD ＜2%，結果見表4。

表4 重復性試驗結果

2.5 加樣回收試驗：取已知沒食子酸含量的樣品5 份，每份1.5g，精密稱定，分別精密加入1mL 對照品溶液(9.25mg/mL)，按上述供試品溶液制備方法和色譜條件測定，計算回收率。結果平均回收率為99.35%，RSD ＜2%。試驗結果表明，加樣回收良好，結果見表5。

表5 回收率試驗結果

3 樣品含量測定

分別取3 批樣品，按上述擬定的含量測定方法制備供試品溶液測定，結果見表6。

表6 樣品中沒食子酸含量測定結果

3 結果

3.1 試驗結果表明，組方中其他藥材所含成分對沒食子酸無干擾，樣品峰形良好，平均回收率為99.78%，前處理較簡單，結果準確，專屬性良好。見圖1。

圖1 A 陰性 B 標準品沒食子酸 C 樣品

3.2 該含量測定方法具有分離效果理想、靈敏度高、準確、穩定、重現性好特點，可以作為訶子的含量測定方法。

［1］衛生部藥典委員會.衛生部藥品標準蒙藥分冊［S］.1998：97.

［2］四川醫學院.中草藥學［M］.北京：人民衛生出版社，367.

［3］國家藥典委員會.中國藥典［S］.一部.化學工業出版社，2005：45.