蒙藥泡囊草炮制樣品及未炮制樣品總生物堿的檢測△

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(1.內蒙古國際蒙醫醫院，內蒙古 呼和浩特 010065;2.內蒙古民族大學，內蒙古 通遼 028000;3.內蒙古醫科大學，內蒙古 呼和浩特 010110;4.錫林浩特市蒙醫醫院，內蒙古 呼和浩特 026000)

1 前 言

蒙醫藥是中華民族醫藥的瑰寶之一。蒙醫藥學是游牧文化基礎上產生和發展的傳統醫學，是國家級非物質文化遺產。蒙醫學歷史與蒙古族歷史文化長河同源于匈奴初期，僅有文字記載的歷史已達3000 多年，至今，在內蒙古及8 省區相關旗縣任然有著深厚的群眾基礎。蒙醫藥作為祖國燦爛的民族醫藥文化之一，已走進了內蒙古草原文化的殿堂。

蒙醫藥千百年來以其源遠流長的悠久歷史，系統完整的理論體系，得天獨厚的藥物資源，自成一體的用藥方法科學合理的炮制工藝，備受世人所矚目。蒙醫藥事業作為中國傳統藥物的主要組成部分，得到了國家、自治區政府的大力支持及政策上的扶持，有了空前發展的前景。

蒙醫藥作為世界傳統醫藥的組成部分，并以其天然、安全、療效好等優點，受到國內外的關注。在區內外及國際上多次參與和開展了國際學術會議，同時蒙醫藥走進聯合國的事宜及內蒙古國際蒙醫醫院與蒙古、美國等其他國家的合作協議的達成等事項，為蒙醫藥的國際性發展奠定了基礎。蒙醫藥的進一步發展需要蒙醫藥的規范化及標準化發展，從而促進蒙醫藥研究與國際接軌，為全人類服務。

蒙醫藥的國內國際形勢為蒙醫藥事業的進一步發展提供了有利環境，但同時肩負著蒙醫藥的規范化及標準化發展要求，并急需將蒙醫藥研究與其他學科的科研領域緊密結合，為今后開發蒙藥創新藥物提供規范化及標準化的理論依據。

本研究遵照國內外蒙醫藥發展的形式及標準化的需求，對蒙藥用植物泡囊草的成分進行了分析，為今后進一步發展蒙藥成分研究及其規范化研究提供科學依據。

泡囊草蒙文名為(混-好日蘇)，別名為西日-湯普如木，泡囊草系茄科植物泡囊草Physochlaina physaloides(L.)G.Don 的干燥根，具有應用歷史悠久的傳統蒙藥［1］。分布于我國內蒙古、黑龍江、新疆等多個地方。該物種為中國圖譜數據庫收錄的有毒植物，其毒性為全草有毒。根補腎溫中，安神定喘。主治虛寒泄瀉，勞傷，咳嗽痰喘，心慌不安。全草清熱解毒，祛濕殺蟲。主治中耳炎，鼻竇炎，咽喉腫痛，中毒，頭痛。其有效成分為山莨菪堿、莨菪堿、東莨菪堿及紅古豆堿［2］。1984 中國醫學科學院藥物研究所陳鷺生、司德昭報道在內蒙古烏蘭察布市調查采集泡囊草，經化學分析證明這種植物可以作為提取山莨菪堿的原料［3］。山莨菪堿是醫療上有重要用途的莨菪烷類生物堿。由于泡囊草有大毒，蒙醫常將泡囊草采用炮制削減其毒性后使用。

解紅霞等利用溴甲酚綠染色法檢測了泡囊草不同部位總生物堿含量［4］，康輝等利用HPLC 法測定了華山參中山莨菪堿的含量［5］。本研究利用溴甲酚綠染色法，以氫溴酸東莨菪堿為標準樣，對泡囊草根炮制樣品及未炮制樣品的總生物堿的含量進行了測定。為泡囊草的質量控制提供依據，為泡囊草炮制工藝的規范化和質量的可控性提供科學依據。

2 實驗材料與儀器

2.1 材料：泡囊草炮制樣和未炮制樣(蒙藥混-好日蘇)由錫林郭勒盟蒙醫醫院提供;氫溴酸東莨菪堿(批號：114-49 -8，購于上海源葉生物科技有限公司);其他試劑均為分析純，產自天津市盛奧化學試劑有限公司。

2.2 儀器

BSA224S 型電子分析天平(賽多利斯科學儀器北京有限公司);BT25 電子分析天平(賽多利斯科學儀器北京有限公司);M200Pro 酶標儀(Thermo 公司);WSZ-200A 型回旋振蕩器(上海-恒科學儀器有限公司，昆山-恒儀器有限公司);023454C 型微量移液器(廠家eppendof Research plus);Uti 有限公司);限公司);水為Milli Q 純化水。

3 方法與結果

3.1 樣品總生物堿的提取及檢測

3.1.1 緩沖液及顯色劑的配制：枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖

液(PH4.0)的配制：按《中國藥典》2005年版一部附錄(XVD)配制。甲液：取枸櫞酸21g 加水溶解成1000ml，置冰箱保存。乙液：取磷酸氫二鈉71.63g 加水溶解成1000ml。取上述甲液61.45ml 與乙液38.55ml 混合搖勻，即得。溴甲粉綠溶液(0.04%)的配制：取溴甲粉綠0.02g，加上述枸櫞酸- 磷酸氫二鈉緩沖液(PH4.0)使溶解成50ml，搖勻，即得。

3.1.2 樣品液的制備：精密稱取炮制及未炮制樣品1g，各5份，置具塞錐形瓶內，精密加枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液(PH4.0)25ml，鎮搖5min，放置過夜，用干燥濾紙濾過，取濾液，用緩沖液清洗濾紙，定容于25ml 容量瓶中，即得樣品液［4］。

3.2 含量測定：泡囊草所含主要成分為托烷類生物堿，經酸水解后生成山莨菪堿，故采用酸性染料溴甲酚綠染色后，在415nm 波長處有特征吸收。據此特點，選擇氫溴酸東莨菪堿為對照品，采用分光光度計法測定含量。

3.2.1 標準曲線的繪制：精密稱取氫溴酸東莨菪堿對照品3.93mg，置25ml 容量瓶中，加蒸餾水使溶解成刻度，搖勻，即得氫溴酸東莨菪堿對照品溶液。精密量取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml 分別置分液漏斗中，各精密加枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液(PH4.0)10ml，再精密加0.04%溴甲粉綠溶液3ml，搖勻，用10ml 三氯甲烷萃取5min，待溶液完全分層后，分取三氯甲烷液，用三氯甲烷濕潤的濾紙濾入25ml 容量瓶中，再用三氯甲烷萃取3 次，每次5ml，依次濾入容量瓶中，并用三氯甲烷洗滌濾紙，濾入容量瓶中，加三氯甲烷至刻度。用酶標儀測定(《中國藥典》2005年版一部附錄VA)于415nm 波長處測定吸光度，平行檢測3 次。以吸光度對溶液濃度進行回歸分析，氫溴酸東莨菪堿在6.24～18.72ug/ml 之間與吸光度線性關系良好，計算回歸方程Y=134.62X-8.1137，r=0.9995(n=6)，見表1。

對照品濃度μg/ml 3.12 6.24 9.36 12.48 15.6 18.72吸光度(A) 0.0849 0.110617 0.135317 0.157817 0.181517 0.205467

3.2.2 精密度實驗：取標準對照品液3.0ml，置于分液漏斗中，精密加構椽酸-磷酸氫二鈉緩沖液(PH4.0)10ml，再精密加入0.04%嗅甲酚綠溶液3mL，搖勻，用10ml 三氯甲烷振搖提取5min，待溶液完全分層后，分取三氯甲烷液，用三氯甲烷濕潤的濾紙濾入25ml 容量瓶中，再用三氯甲烷提取3 次，5ml/次，每次振搖3min，依次濾入容量瓶中，并用三氯甲烷洗滌濾紙，濾入容量瓶中，加三氯甲烷至刻度。在415nm 處測定吸光度3 次。結果可知，RSD =0.17%，表明儀器精密度良好。見表2。

SD%吸光度(A)編號1 2 3 0.2651 0.2603 0.2627 0.17

3.2.3 含量測定與比較：取上述炮制1ml 及未炮制樣品2ml，置于分液漏斗中，精密加枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液(ph4.0)10ml，再精密加入0.04%溴甲酚綠溶液3ml，搖勻，用10ml 三氯甲烷萃取5min，待溶液完全分層后，分取三氯甲烷液，用三氯甲烷濕潤的濾紙濾入25ml 容量瓶中，再用三氯甲烷萃取3 次，每次5ml，每次振搖3min，依次濾入容量瓶中，并用三氯甲烷洗濾紙，濾入容量瓶中，加三氯甲烷至刻度。用酶標儀測定(《中國藥典》2005年一部附錄VA)于415nm 波長處測定吸收度計算總生物堿相對含量，并利用T-test 計算了p 值。結果見表3，4。

1 2 3 4 5樣品量(g)編號1..0014 1.0013 1.0003 1.0029 1.0036平均吸光度值(A) 0.0933 0.0852 0.0782 0.1122 0.0965百分含量(%) 0.46 0.41 0.38 0.55 0.48平均百分含量(%)0.456 ±0.04

從總生物堿的測定結果看，泡囊草炮制及未炮制樣品中生物堿百分含量不相同，炮制樣品中生物堿含量比未炮制總生物堿含量顯著高(p值為0.5%)。

4 討 論

泡囊草具有應用歷史悠久的傳統蒙藥，主要有效成分以山莨菪堿、莨菪堿等生物堿為主，因其植物有大毒，蒙醫常將泡囊草采用炮制削減其毒性后使用。植物生物堿的水溶性、揮發性、水解性和化學反應性等性質的不同，采用不同的炮制方法可提高其溶出率或減少其毒性。植物游離生物堿易溶于乙醇等有機溶劑，在酸性條件下形成鹽易溶于水，用醋或酒炮制，可增加其總生物堿的溶出。然而在有些炮制過程中水溶性生物堿的流失或揮發性生物堿的丟失，容易引起總生物堿的減少［7］。因此不同的炮制方法引起不同程度的生物堿溶出。宋宏春等對牛奶及膏制法炮制的泡囊草的總生物堿進行了檢測，結果表明炮制后的總生物堿含量低于未炮制樣品［8］。本研究結果顯示炮制后的泡囊草的總生物堿明顯高于炮制前的樣品，這可能與炮制方法相關。在今后的研究中，利用HPLC 對炮制及未炮制樣品的生物堿含量進行評價及討論。

［1］國家中醫藥管理局.中華本草蒙藥卷［M］.上海：科技出版社，2004：265.

［2］陳鷺聲，司德昭.北京地區泡囊草的引種和生物學特性觀察［J］.藥學學報，1994，19(11)：869 -875.

［3］宋宏春，張宏宇，云彩麟，等.不同炮制方法對蒙藥泡囊草中托烷類生物堿含量的影響［J］.中國民族醫藥雜志，2008，3，71 -73.

［4］解紅霞，王寶珍，薩日娜，等.分光光度法測定蒙藥泡囊草不同部位中總生物堿的含量，內蒙古醫學院學報.2011，33(1)，46.

［5］康輝，聶桂華，代雪平.HPLC 法測定華山參中山莨菪堿的含量［J］.中醫研究，2010，2(10)，33.

［6］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.一部.2005：94 -95.

［7］陳文貴.炮制對含生物堿藥物影響的探討［J］.云南中醫雜志，1989，10(2)，33.

［8］宋宏春，張宏宇，云彩麟.蒙根達賴，不同炮制方法對蒙藥泡囊草中托烷類生物堿含量的影響［J］.中國民族醫藥雜志，2008，3，71.