奧曲肽聯合復合輔酶對化膿性闌尾炎患者Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg失衡影響

譚子方，吳文利，王健，景生虹

(1.寧夏回族自治區人民醫院 藥劑科，寧夏 銀川 750021；2.寧夏回族自治區人民醫院 普外科，寧夏 銀川 750021)

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奧曲肽聯合復合輔酶對化膿性闌尾炎患者Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg失衡影響

譚子方1，吳文利1，王健1，景生虹2Δ

(1.寧夏回族自治區人民醫院 藥劑科，寧夏 銀川 750021；2.寧夏回族自治區人民醫院 普外科，寧夏 銀川 750021)

目的 探討奧曲肽聯合復合輔酶對化膿性闌尾炎患者輔助性T細胞17/ CD4+CD25+Foxp3+調節性T細胞(Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg)失衡的影響。方法 選取寧夏回族自治區人民醫院已確診為急性化膿性闌尾炎患者150例，隨機分為實驗組和對照組，每組各75例。2組均行腹腔鏡闌尾炎切除術，術后實驗組在常規治療基礎上加用奧曲肽皮下注射，檢測治療前后Th17、CD4+CD25+Foxp3+Treg相關指標，進而對Th17/Treg平衡狀態進行分析。結果 與對照組比較，實驗組患者Th17/Treg失衡狀態恢復較好，表現為：Th17比例、Treg比例、Th17/Treg比值下降(P<0.05)；相關轉錄因子RORγt、Foxp3的mRNA表達水平降低(P<0.05)；血清細胞相關因子(IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β)、C反應蛋白(CRP)含量降低(P<0.05)；血清干擾素-γ(IFN-γ)含量升高(P<0.05)。結論 奧曲肽聯合復合輔酶可以糾正化膿性闌尾炎患者Th17/Treg的失衡狀態，提高患者的免疫功能，影響患者預后。

化膿性闌尾炎；奧曲肽；輔助性T細胞17；調節性T細胞

急性闌尾炎是外科常見病，居于急腹癥的首位，據最新統計，每1000人中有1.17人患病，男性風險發生率為8.6%，女性為6.7%，可發生于各個年齡段，發病與梗阻、感染、內臟神經功能反射有關[1]。化膿性闌尾炎屬炎癥反應性疾病，其發病過程存在多種細胞因子及免疫細胞的參與，近年來研究發現[2]，化膿性闌尾炎患者體內存在輔助性T細胞17(Th17)/CD4+CD25+Foxp3+調節性T細胞(Treg)失衡，可導致免疫功能紊亂，影響患者預后。奧曲肽是一種生長抑素[3]，能夠抑制胃腸分泌，在闌尾炎術后一般用來預防早期炎性腸梗阻，有資料顯示[4]，生長抑素還具有免疫調節作用，能夠調節Th1/Th2細胞的平衡，影響免疫功能，但關于其對于Th1/Treg細胞平衡是否有作用，目前研究還較少。因此，本研究對化膿性闌尾炎患者用藥前后免疫相關指標分析比較，探討奧曲肽聯合復合輔酶對化膿性闌尾炎患者Th17/Treg失衡的影響，為化膿性闌尾炎尋求更好的治療方案。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集寧夏回族自治區人民醫院2013年6月～2015年4月的確診為急性化膿性闌尾炎的患者150例。其中男性82例，女性68例，年齡20～71歲，平均年齡(45.34±7.16)歲。診斷標準：診斷依據《2011年老年急性闌尾炎患者的臨床特征及外科診療方案》[5]，并經術后病理檢查確診為化膿性闌尾炎[6]。排除標準：①合并嚴重的心、腦慢性疾病；②肝、腎功能衰竭；③合并惡性腫瘤；④凝血功能障礙，具有嚴重出血傾向；⑤合并妊娠；⑥有手術禁忌癥的患者。本研究獲得患者知情同意，并得到醫院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 分組及治療方法：將患者隨機分為實驗組和對照組，實驗組75例，其中男40例，女35例，年齡20～71歲，平均年齡(45.56±7.11)歲；對照組75例，男41例，女34例，年齡20～70歲，平均年齡(44.74±7.56)歲；2組患者的年齡、性別、病程無明顯差異。所有患者均在全麻下行腹腔鏡闌尾切除術，術后所有患者常規禁食、補液，予氨甲環酸(成都倍特藥業有限公司，國藥準字H20030625)止血，頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉(蘇州東瑞制藥有限公司，國藥準字H20034146)、奧硝唑(南京圣和藥業有限公司，國藥準字H20030277)聯合抗感染，復合輔酶(北京雙鷺藥業股份有限公司，國藥準字H11020001)2支溶于2 mL 0.9%氯化鈉溶液，每天1次肌內注射支持治療；實驗組在對照組治療的基礎上予注射用醋酸奧曲肽(長春金賽藥業股份有限公司，國藥準字H20051860，生產批號：20050919)0.1 mg，每天3次皮下注射，連續7 d，對照組給予等量生理鹽水皮下注射。

1.2.2 血液指標檢測：所有患者分別于入院時(治療前)和治療后，采取空腹靜脈血9 mL。其中3 mL血液加入肝素抗凝，分離淋巴細胞，采用流式細胞分析儀(BD FACSCanto II)分析Th17細胞、CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞比例及2者比值；另外3 mL血液加入肝素抗凝后，分離淋巴細胞，采用流式細胞法測定RORγt(Th17細胞轉錄因子)、Foxp3(Treg細胞轉錄因子)水平；其余3 mL促凝后采用離心機離心，取上清液，采用全自動化學發光免疫分析儀(UniCel DxI 800，貝克曼庫爾特)，利用酶聯免疫雙抗夾心法(ELISA)檢測血清中白細胞介素-4(IL-4)、IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、轉化生長因子-β(TGF-β)、干擾素-γ(IFN-γ)、C反應蛋白(CRP)含量。

2 結果

2.1 2組患者治療前后Th17、Treg細胞比例比較 治療后，2組患者的Th17比例、Treg比例、Th17/Treg比值均較治療前下降(P<0.05)。與對照組比較，實驗組Th17比例、Treg比例、Th17/Treg比值明顯下降(P<0.05)。見表1。

表1 2組患者治療前后Th17、Treg細胞比例比較Tab.1 Comparison of Th17 and Treg ratios before and after treatment between two groups ±s)

#P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group before treatment；*P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group after treatment

2.2 2組患者治療前后RORγt、Foxp3因子水平比較 治療后，2組患者的RORγt、Foxp3因子水平均較治療前下降(P<0.05)。與對照組比較，實驗組RORγt、Foxp3因子水平較低(P<0.05)。見表2。

表2 2組患者治療前后RORγt、Foxp3因子水平比較Tab.2 Comparison of expression levels of RORγt and Foxp3 before and after treatment between two groups ±s)

#P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group before treatment；*P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group after treatment

2.3 2組患者治療前后血清IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β含量比較 治療后，2組患者血清IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β含量均較治療前明顯降低(P<0.05)。與對照組比較，實驗組血清IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β含量明顯較低(P<0.05)。見表3。

表3 2組患者治療前后血清IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β含量比較Tab.3 Comparison of IL-6， IL-10， IL-17， IL-23 and TGF-β contents before and after treatment between two groups ±s)

#P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group before treatment；*P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group after treatment

2.4 2組患者治療前后血清IL-4、IFN-γ、CRP含量比較 治療后，2組患者血清IL-4、IFN-γ、CRP含量均較治療前明顯改善(P<0.05)。與對照組比較，實驗組血清IL-4、CRP含量明顯較低，IFN-γ含量明顯較高(P<0.05)。見表4。

表4 2組患者治療前后血清IL-4、IFN-γ、CRP含量比較Tab.4 Comparison of IL-4， IFN-γ and CRP contents of before and after treatment between two groups ±s)

#P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group before treatment；*P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group after treatment

3 討論

闌尾由于解剖結構特殊，極易出現梗阻致粘膜受損，細菌趁機侵入形成化膿性闌尾炎，引起闌尾腫脹、滲出，甚至波及腹膜，病情進展迅速，給患者帶來很大痛苦[6]。近年來研究發現[7]，闌尾炎癥狀的出現不僅與細菌感染有關，還與其激發的細胞免疫，T淋巴細胞功能紊亂關系密切。資料顯示[8]，Th17細胞是近年發現的細胞亞型，屬于輔助型T細胞，其表型為CD4+RORγt+IL23R+CCR6+，能夠促進IL-17、IL-21、IL-26等細胞因子的產生，參與加強炎癥反應過程，同時誘導中性粒細胞聚集；CD4+CD25+Foxp3+調節性T細胞(Treg細胞)，起到抑制性免疫調節的作用，與Th17的作用相互拮抗，使炎癥反應不至過度，感染狀況下，機體內炎癥反應與抗炎癥反應同時存在，使得Th17/ Treg細胞失衡，免疫調節功能紊亂。奧曲肽為人工合成的八肽生長抑素類似物，目前多用于抑制胃腸道分泌，防止術后腸梗阻[9]，最新研究表明[10]，生長抑素類藥物還具有免疫調節作用，調節Th細胞分化，影響Th1、Th2細胞間的比例，在自身免疫性疾病中具有治療作用。

本研究結果顯示，治療后實驗組Th17比例、Treg細胞比例、Th17/Treg 比值與對照組比較明顯下降(P<0.05)，證實了奧曲肽確實能夠改善Th17/Treg細胞失衡狀態。曾有研究報道顯示[11]，炎癥發生時，Th17水平升高，能夠促進IL-17的分泌，IL-17具有加強炎癥反應的作用，Treg細胞對Th17細胞具有抑制作用，能夠分泌IL-10因子來限制T細胞的活性，從而抑制過度炎癥反應，因此炎癥發生時Th17,Treg細胞會代償性上調，而Th17上調更明顯，使得Th17/Treg比值升高。奧曲肽具有免疫調節作用，一方面影響T細胞向Th17、Treg分化，另一方面對T細胞炎癥因子的分泌也有抑制作用，能夠調節Th17/Treg，使免疫功能恢復，防止機體損傷[12]。

RORγt因子是促進T細胞向Th17轉化的主要轉錄因子，Foxp3是Treg細胞特異性的轉錄因子[13]。本研究結果顯示，實驗組RORγt、Foxp3因子mRNA表達水平明顯降低(P<0.05)，提示奧曲肽可以通過下調RORγt、Foxp3因子的表達，來控制Th17細胞和Treg細胞的分化、增殖。

炎癥因子直接參與炎癥過程，本研究結果顯示，實驗組血清IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β含量與實驗組明顯較低(P<0.05)，提示奧曲肽能夠通過調節相關細胞因子的分泌抑制炎癥反應。資料顯示[14]，IL-17是由Th17細胞分泌的細胞內粘附因子，IL-23對于其功能維持有重要作用，IL-10是由Treg細胞分泌的，2者均為功能性細胞因子；IL-6具有促進T細胞向Th17細胞分化的作用，而TGF-β作用正好相反，可以促進T細胞向TGF-β轉化，直接影響Th17細胞和Treg細胞的平衡。

CRP與機體的免疫功能有關，能夠反映炎癥反應的程度。IL-4可以誘導Th2細胞的生成、IFN-γ則可以由Th1分泌，2者通常用來反映Th1/Th2細胞漂移情況。本實驗結果顯示，與對照組比較，實驗組血清IL-4、CRP含量明顯較低(P<0.05)，IFN-γ含量明顯較高(P<0.05)，提示奧曲肽可以降低炎癥反應的強度，抑制Th1/Th2細胞轉移現象，促進Th17細胞/Treg細胞平衡的恢復。

本實驗通過對急性化膿性闌尾炎患者Th17細胞、Treg細胞治療前后相關指標的檢測結果進行分析，證實了奧曲肽聯合復合輔酶可以糾正化膿性闌尾炎患者Th17細胞/ Treg細胞的失衡狀態，提高患者的免疫功能，影響患者預后。在下一步研究中，本課題組將對患者的預后進一步研究，為本實驗所反映的現象做出全面論證和分析。

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(編校：王儼儼)

Effect of octreotide combined with compound coenzyme on Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg imbalance in patients with purulent appendicitis

TAN Zi-fang1, WU Wen-li1, WANG Jian1, JING sheng-hong2Δ

(1.Department of Pharmacy, The Ningxia Hui Autonomous Region People’s Hospital, Yinchuan 750021, China; 2.Department of General Surgery, The Ningxia Hui Autonomous Region People’s Hospital, Yinchuan 750021, China)

ObjectiveTo analyse the effect of octreotide combined with compound coenzyme on Th17/CD4+CD25+Foxp3+regulatory T cells imbalance in patients with purulent appendicitis.Methods150 patients with acute suppurative appendicitis were randomly divided into experimental group and control group, 75 cases in each group.Patients of two groups underwent appendicitis laparoscopic resection, then the control group were given conventional treatment and experimental group were given subcutaneous injection of octreotide on the basis of conventional treatment.Th17, CD4+CD25+Foxp3+regulation T cells (Treg), and Th17 /Treg balance were analyzed.ResultsCompared with control group, Th17/Treg imbalance of experimental group recovered better: the proportion of Th17, Treg, and Th17/Treg ratio decreased (P<0.05); the expression levels of related transcription factor, RORγt and Foxp3 mRNA decreased (P<0.05); serum cytokine (IL-4, IL-6, IL-10, IL-17, IL-23 and TGF beta) and C-reactive protein (CRP) content decreased (P<0.05); serum interferon gamma (IFN-gamma) content increased (P<0.05).ConclusionOctreotide combined with compound coenzyme could correct Th17/Treg imbalance in suppurative appendicitis patients, improve the immune function of patients and affect the prognosis of patients.

suppurative appendicitis; octreotide; T helper 17 cell; regulatory T cell

譚子方，男，本科，副主任藥師，研究方向：藥品不良反應及臨床藥學，E-mail：tanzifang930@163.com；景生虹，通訊作者，男，本科，主任醫師，研究方向：普外科，E-mail：nxjingshenghong@126.com。

R982

A

1005-1678(2015)07-0095-03