大劑量二甲雙胍對卵巢癌患者血清HE4、LPA與Tr的影響研究

黃宇，楊年，周飛

(四川省人民醫院城東病區 婦產科，四川 成都 610041)

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大劑量二甲雙胍對卵巢癌患者血清HE4、LPA與Tr的影響研究

黃宇，楊年，周飛

(四川省人民醫院城東病區 婦產科，四川 成都 610041)

目的 探討大劑量二甲雙胍對卵巢癌患者血清人附睪分泌蛋白4(human epididymis protein 4，HE4)、溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid，LPA)與調節性T細胞(regulatory T cell，Treg)的影響。方法 選取已確診為單側卵巢癌患者80例，根據單次二甲雙胍服用劑量分為4組：A組：0.85克/次，B組：0.5 克/次，C組：0.25 克/次；D組：僅常規治療。4組均給予手術及常規化療，配合3次/天口服二甲雙胍，連續2周，治療前后檢測各組患者血清HE4、LPA、轉化生長因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)、白細胞介素-10(interleukin-10，IL-10)含量，以及CD4+CD25+CD127調節性T細胞百分比。結果 分別與C、B、D組相比較，A組患者的療效更好，表現為：血清HE4含量明顯下降(P<0.05)；血清LPA含量明顯降低(P<0.05)；血液CD4+CD25+CD127調節性T細胞百分比明顯下降(P<0.05)；血清TGF-β1、IL-10含量明顯下降(P<0.05)。結論 大劑量的二甲雙胍能夠降低卵巢癌患者血清HE4、LPA含量，減少調節性T細胞百分比及其相關細胞因子含量，對抑制癌細胞的增殖浸潤起到積極作用。

二甲雙胍；卵巢癌；人附睪分泌蛋白4；溶血磷脂酸；調節性T細胞

卵巢癌是女性生殖系統最常見的惡性腫瘤，其發病率僅次于宮頸癌及宮體癌，但其死亡率卻居于首位[1]。 卵巢癌多發生于50歲以上婦女，在發達國家(除日本外)其發病率為9～17/10萬[2]，在所用生殖系統惡性腫瘤中占23%，病死率高達47%，而我國卵巢癌的發病率為7.1/10萬，并有逐年上升的趨勢。因此，早期采用合理的治療方法尤為重要。二甲雙胍是一種傳統的降糖藥物，近年來，研究發現，二甲雙胍還具有抗卵巢癌等抗腫瘤的作用，其可以降低卵巢癌發病率、提高患者生存率[3]。體外研究亦表明，二甲雙胍能抑制卵巢癌細胞SKOV3的增殖并誘導其凋亡[4]。近年來有體外研究和動物實驗發現二甲雙胍對多種腫瘤細胞具有一定程度的抑制作用，并可顯著增強化療藥物的抗腫瘤作用[5]。然而，目前關于二甲雙胍應用于卵巢癌的臨床研究較少。因此，本研究對采用二甲雙胍配和治療的卵巢癌患者進行研究，觀察其血清人附睪分泌蛋白4(human epididymis protein 4，HE4)、溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid，LPA)與調節性T細胞(regulatory T cell，T)及相關因子變化，探討二甲雙胍對卵巢癌的治療作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集四川省人民醫院城東病區2013年1月～2015年5月的確診為單側卵巢癌擬行手術治療的患者80例，年齡在30～82歲，平均年齡(58.2±7.4)歲。診斷標準：診斷依據根據2012卵巢癌包括輸卵管癌和原發腹膜癌臨床實踐指南第2版[6]并經術后病理學檢查確診，腫瘤分期為Ⅰ-Ⅱ期；排除標準：①合并有糖尿病；②合并其他惡性腫瘤；③合并嚴重的心腦血管疾病；④肝、腎功能衰竭；⑤非首次發病，經過手術、化療、放療等治療的畫著；⑥不能耐受二甲雙胍。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：將患者隨機分為A組、B組、C組、D組，各20例。所有患者均經腹腔鏡行手術切除患側卵巢及周圍淋巴結，術后配合TP化療方案(術后第1天靜滴泰素220 mg溶于500 mL 50 g/L葡萄糖注射液，第2天將順鉑80 mg溶于2000 mL 0.9%氯化鈉注射液進行腹腔灌注)聯合治療，常規水化、解毒、止吐、維持電解質平衡。A、B、C 3組患者在術后常規治療的基礎上加用鹽酸二甲雙胍片(中美上海施貴寶制藥有限公司，國藥準字J20080067)3次/天，口服治療，連續服用2周，單次劑量：A組：0.85 g/次，B組：0.5 g/次，C組：0.25 g/次；D組作為對照組。

1.2.2 血清指標采集：服用二甲雙胍治療前后，所有研究對象均采集空腹12 h后靜脈血10 mL，其中5 mL分離血清，選用HE4、LPA、TGF-β1、IL-10檢測試劑盒、試劑盒(鄭州安賽生物科技有限公司)，嚴格按照試劑盒說明，采用F.A.M.E.16/30全自動酶標儀(瑞士哈美頓公司)，通過酶聯免疫法(ELISA)檢測血清中HE4、LPA、轉化生長因子-β1(TGF-β1)、IL-10含量；剩余5 mL靜脈血加入肝素抗凝，分離淋巴細胞，采用流式細胞分析儀(BD FACSCanto II)分析CD4+CD25+CD127調節性T細胞所占百分比。

2 結果

2.1 治療前后各組患者血清HE4含量比較 與治療前比較，各組血清HE4含量均明顯下降(P<0.05)，治療后，各組血清HE4含量兩兩比較，A組

表1 治療前后各組患者血清HE4含量比較， μmol/L)Tab.1 Comparison of HE4 of two groups beford and after ±s， μmol/L)

*P<0.05，與治療前比較，compared with before treatment；，#P<0.05，與D組比較，compared with D group after treatment；△P<0.05，治療后與A組比較，compared with A group after treatment；▲P<0.05，治療后與B組比較，compared with B group after treatment

2.2 治療前后各組患者血清LPA含量比較 與治療前比較，各組血清LPA含量均明顯下降(P<0.05)；治療后，各組血清LPA含量兩兩比較，A組

表2 治療前后各組患者血清LPA含量比較， μmol/L)Tab.2 Comparison of LPA of two groups before and after ±s， μmol/L)

*P<0.05，與治療前比較，compared with before treatment；#P<0.05，與D組比較，compared with D group after treatment；△P<0.05，治療后與A組比較，compared with A group after treatment；▲P<0.05，治療后與B組比較，compared with B group after treatment

2.3 治療前后各組患者血液CD4+CD25+CD127調節性T細胞百分比比較 與治療前比較，各組血液CD4+CD25+CD127調節性T細胞百分比均明顯下降(P<0.05)，治療后，各組血液CD4+CD25+CD127調節性T細胞百分比兩兩比較，A組

組別例數治療前 治療后A組206.48±0.863.11±0.43*#▲B組206.50±0.914.03±0.56*#△C組206.52±0.934.72±0.53*#△▲D組206.47±0.885.36±0.68*△▲F—0.01259.889P—0.9810.000

*P<0.05，與治療前比較，compared with before treatment；#P<0.05，與D組比較，compared with D group after treatment；△P<0.05，治療后與A組比較，compared with A group after treatment；▲P<0.05，治療后與B組比較，compared with B group after treatment

2.4 治療前后各組患者血清TGF-β1、IL-10含量比較 與治療前比較，各組血清TGF-β1、IL-10含量均明顯下降(P<0.05)，治療后，各組中血清TGF-β1、IL-10含量兩兩比較，A組

組別例數TGF-β1(pg/mL)治療前治療后IL-10(ng/mL)治療前治療后A組20256.64±36.27128.64±15.78*#▲28.05±4.8617.54±2.45*#△B組20249.34±32.67146.36±21.65*△▲28.76±4.5419.16±2.78*#△C組20262.45±37.23164.76±24.87*#△▲27.67±3.2220.98±2.15*#△▲D組20254.66±29.46183.79±26.85*△▲27.99±3.6721.77±3.65*△▲F—0.50621.9130.2489.071P—0.5130.0000.7850.001

*P<0.05，與治療前比較，compared with before treatment；#P<0.05，與D組比較，compared with D group after treatment；△P<0.05，治療后與A組比較，compared with A group after treatment；▲P<0.05，治療后與B組比較，compared with B group after treatment

3 討論

卵巢癌屬于女性生殖器官常見惡性腫瘤，常發于圍絕經期婦女，其發病原因尚不明確，其可能與內分泌、免疫功能、精神及遺傳等因素有關，該病發病率高，預后差且死亡率高，對患者的生命安全帶來嚴重威脅[7]。二甲雙胍是糖尿病一線降糖藥物，其降糖效果只作用于糖代謝異常患者，而對健康人群血糖無影響。多項研究顯示[8-10]，二甲雙胍能夠降低糖尿病患者結直腸癌、胰腺癌、膀胱癌等惡性腫瘤的發病率，死亡率也隨之降低。許多學者認為[11]，這與二甲雙胍激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的信號通路有關，可以促進抑癌基因LKB1的表達，抑制腫瘤細胞增殖，同時還可以減少腫瘤細胞內源性脂肪酸的合成，促進腫瘤細胞凋亡；二甲雙胍還具有誘導細胞周期停滯的作用，研究發現[12]，二甲雙胍能夠增加A 2780/DDP對順鉑的敏感性以及A 2780/TAX對紫杉醇的敏感性，二甲雙胍可通過抑制NF-κB信號通路降低P-gp的表達。在本實驗中，通過檢測卵巢癌患者經不同劑量二甲雙胍治療后血清HE4、LPA與調節性T細胞及相關因子的水平，探討二甲雙胍對卵巢癌的影響。

HE4屬于酸性蛋白質，是新發現的腫瘤標志物，研究發現，HE4在正常的卵巢組織中較少表達，而在卵巢癌組織中呈高度表達，其表達量和外周血清含量隨卵巢癌惡性程度的增高而增高[13]，而且在肺癌、腎癌等其他惡性腫瘤中的表達未見明顯升高，是診斷卵巢癌特異性和敏感性較高的指標。本研究結果顯示，各組血清HE4含量與治療前比較均明顯下降(P<0.05)，治療后，各組血清HE4含量比較，A組

LPA是細胞間磷脂類信號分子，可以與G蛋白偶聯受體結合，發揮生物學效應。資料顯示，LPA 作為細胞間“多功能磷脂信使”，近年來研究發現卵巢癌細胞可以產生LPA，反過來LPA 又可促進卵巢癌細胞的增殖，促進腫瘤細胞浸潤和轉移，誘導新生血管生成等[14]，卵巢癌上皮存在大量的LPA受體，卵巢癌患者血液和腹水內LPA含量均升高，2者結合，促進癌細胞的生長與增殖，同時提高癌細胞的耐藥性。本研究結果顯示，各組血清LPA含量與治療前比較均明顯下降(P<0.05)，治療后，各組血清LPA含量比較，A組

近年來，隨著免疫學的發展，人們認為惡性腫瘤的產生于免疫失調關系密切。調節性T細胞是一組具有免疫調控作用的細胞群，對其他免疫細胞的功能具有抑制作用。研究發現調節性T細胞對機體的抗腫瘤免疫反應起到抑制作用[15]，在卵巢癌患者的外周血中，CD4+CD25+CD127調節性T細胞百分比明顯升高[16]，其分泌合成的TGF-β1、IL-10含量也明顯升高，TGF-β1能夠刺激調節性T細胞的增殖轉化，IL-10對自然殺傷(NK)細胞及其細胞因子的產生器抑制作用，從而下調機體對腫瘤細胞的免疫能力。本研究結果顯示，各組血液CD4+CD25+CD127調節性T細胞百分比、血清TGF-β1、IL-10含量均明顯下降(P<0.05)，治療后，各組血液CD4+CD25+CD127調節性T細胞百分比、血清TGF-β1、IL-10含量比較，A組

本實驗通過對80例單側卵巢癌患者治療前后血清HE4、LPA含量、調節性T細胞百分比及其相關細胞因子含量的分析，證實了大劑量的二甲雙胍能夠對抑制卵巢癌患者癌細胞的增殖浸潤起到積極作用。在下一步研究中，將研究二甲雙胍不良反應的影響因素，為二甲雙胍更好的應用于卵巢癌的治療奠定基礎。

[1] 劉云.人附睪蛋白4在卵巢癌中的研究進展[D].蚌埠醫學院, 2014.

[2] 李紅霞.卵巢癌規范化治療的幾個問題[J].現代醫學, 2005, 33(1)：1-3.

[3] 朱杰, 孫紅.二甲雙胍與卵巢癌關系的研究進展[J].國際婦產科學雜志, 2014, 41(1)：52-56.

[4] 張貝貝.二甲雙胍在卵巢癌細胞SKOV3體外增殖及凋亡中的作用[D].吉林大學， 2013.

[5] 張濤.二甲雙胍對膀胱癌的抑制作用及其機制研究[D].山東大學，2014.

[6] 林仲秋, 李晶.NCCN《2012卵巢癌包括輸卵管癌和原發腹膜癌臨床實踐指南第2版》解讀[J].中國實用婦科與產科雜志, 2012, 39(3)：163-165.

[7] 王立成.化療聯合康艾注射液治療晚期卵巢癌的效果觀察[J].中國衛生標準管理， 2015(3)：84-86.

[8] 張艷飛.二甲雙胍對2型糖尿病合并結直腸癌患者預后的影響及其機制[D].南方醫科大學, 2013.

[9] 任艷飛.2型糖尿病及二甲雙胍治療對惡性腫瘤患者病死率的影響[J].中國糖尿病雜志, 2012,4(6)：384.

[10] 周小智.AGEs對人結腸癌細胞SW-480增殖的影響及二甲雙胍干預作用的研究[D].南方醫科大學, 2010.

[11] 陳兆煜, 王連唐, 陳雁揚.二甲雙胍通過激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的抗腫瘤機制[J].中國肺癌雜志, 2013, 16(8)：427-432.

[12] 彭錚, 史惠蓉, 謝婭，等.二甲雙胍通過核因子-κB信號通路抑制p-糖蛋白逆轉卵巢癌細胞耐藥性的研究[J].中國婦幼保健, 2015, 30(8)：1247-1250.

[13] 王丹丹, 李燕華, 張競.卵巢癌組織中HE4表達及與其臨床病理因素的關系[J].實用癌癥雜志, 2012, 27(6)：578-582.

[14] 丁峰, 鈕彬.卵巢癌患者溶血磷脂酸和血管內皮生長因子檢測的臨床意義[J].實用醫藥雜志, 2013, 30(9)：775-777.

[15] 盧曉婷, 劉俊田.CD4+CD25+調節性T細胞在腫瘤免疫及化療方面的研究進展[J].中國腫瘤臨床, 2008, 35(11)：656-658.

[16] 嚴波, 燕善軍.惡性腫瘤患者腹水及外周血中CD4+CD25+CD127low調節性T細胞表達及其意義[J].實用醫學雜志, 2010, 26(9)：1570-1572..

(編校：王冬梅)

Effect of high dose metformin on serum HE4, LPA and regulatory T cells in patients with ovarian cancer

HUANG Yu, YANG Nian, ZHOU Fei

(Department of Obstetrics and Gynecology, East SiChuan Province People’s Hospital Ward, Chengdu 610041, China)

ObjectiveTo analysis the effect of high dose metformin on serum HE4, LPA and regulatory T cells in patients with ovarian cancer.Methods80 cases of unilateral ovarian cancer patients were given surgery and conventional chemotherapy,were divided into four groups according to single metformin dose: (group A: 0.25g each time, B group: 0.25g each time, group C: 0.25g each time; group D: conventional treatment only)and three times a day oral administration of metformin and two weeks in a row, before and after the treatment of detection each serum HE4, LPA, transformation growth factor beta 1 (TGF - beta 1), interleukin - 10 (IL-10) content, and CD4+CD25+CD127 regulating T cell percentage.ResultsCompared with B, C, and D group, the efficacy of patients in group A was better, as follows: Serum HE4 content decreased significantly (P<0.05); serum LPA content decreased significantly (P<0.05); blood CD4+CD25+CD127 regulatory T cell percentage decreased significantly (P<0.05); serum TGF beta 1, IL-10 content decreased significantly (P<0.05).The results were statistically significant.ConclusionHigh dose of metformin can reduce serum HE4, LPA content, reduce the adjusting the percentage of T cells and related cytokines in patients with ovarian cancer, and play a positive role in inhibit cancer cell proliferation and invasion.

metformin; ovarian cancer; HE4; LPA; regulatory T cells

黃宇，男，碩士，主治醫師，研究方向：婦科腫瘤和婦科內鏡，E-mail：sichuanhyu@163.com。

R737.31

A

1005-1678(2015)07-0076-03