HPLC法測定沙棗中槲皮素和異鼠李素的含量

宋海龍， 趙 璐， 楊海燕

(1新疆農業大學食品科學與藥學學院， 烏魯木齊 830052； 2新疆中藥民族藥研究所， 烏魯木齊 830002；3新疆師范大學化學化工學院， 烏魯木齊 830054)

HPLC法測定沙棗中槲皮素和異鼠李素的含量

宋海龍1,2， 趙 璐3， 楊海燕1

(1新疆農業大學食品科學與藥學學院， 烏魯木齊 830052；2新疆中藥民族藥研究所， 烏魯木齊 830002；3新疆師范大學化學化工學院， 烏魯木齊 830054)

目的 建立測定沙棗中槲皮素和異鼠李素含量的高效液相色譜法(HPLC法)。方法 色譜條件：C18色譜柱，甲醇-0.1%磷酸溶液(58∶42)，檢測波長370 nm。結果 槲皮素在0.016～0.032 μg范圍內線性關系良好(r=0.999 9)，異鼠李素在0.025～0.075μg(r=0.999 9) 范圍內線性關系良好；槲皮素和異鼠李素的平均加樣回收率分別為99.08%和100.07%；RSD分別為1.36%和0.98%(n=6)。結論HPLC法可快速準確地測定沙棗中黃酮類物質的含量，為沙棗黃酮類物質的進一步開發提供了可靠的依據。

沙棗； 高效液相色譜法； 槲皮素； 異鼠李素； 含量測定

沙棗(ElaeagnusangustifoliaL.)屬胡頹子科(Elaeagnaceae)胡頹子屬(ElaeaglltsL.)植物的干燥成熟果實，含有果糖、葡萄糖、蛋白質等多種成分。果實中含有鞣質、黃酮類、維生素、不飽和脂肪酸等生物活性物質[1]。沙棗原產于西亞，在新疆分布較為廣泛，主要生長于平原、鹽堿沙地、沙漠、山地和荒地。沙棗果實具有一定的藥物用途和很高的營養價值[2]，具有抗炎、抗腫瘤、補虛、安神、固脫收斂、強壯鎮靜、健胃止瀉等功效，被稱作 “百樹寶”[3]。近年來，黃酮類化合物的研究是一個熱點[4]。許多黃酮類化合物具有止咳、祛痰、平喘、抗菌的活性。沙棗的枝、葉及花均含有黃酮類化合物，但對沙棗果實中所含黃酮類化合物含量的研究報道較少[5]。本研究采用HPLC法測定分析沙棗果實中槲皮素和異鼠李素含量，旨在為進一步有效地開發沙棗中黃酮類成分的藥用價值提供可靠依據。

1 材料與試劑

1.1 材料與儀器沙棗果實采自新疆昌吉及新疆哈密，去除種子，粉碎，過40目篩，備用。分別為1號、2號樣品。AB104-N電子天平(上海MettlerToledo公司)，KQ5200DE型數控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公市)，玻璃儀器氣流烘干器(鄭州長城科工貿有限公司)，粉碎機(天津泰斯達公司)，1220液相色譜儀(美國Agilent公司)， 1220二極管陣列檢測器(美國Agilent公司)，HH-S6數顯恒溫水浴鍋(金壇市醫療儀器廠)。

1.2 試劑槲皮素(YA0806YB13)、異鼠李素(MUST-12112001)購置于上海源葉生物科技有限公司，甲醇(賽默飛世爾色譜純)，水為超純水，其他所用試劑均為分析純。

2 方法和結果

2.1 色譜條件WondaSilC18Superb色譜柱(250mm×4.6mm，5μm，100A)，流動相：0.1%磷酸溶液-甲醇(42∶58)，檢測波長370nm，柱溫25℃；體積流量1.0mL/min；進樣量10μL。供試品中槲皮素、異鼠李素在此色譜條件下具有較好的分離效果，與其他成分分離效果較好，滿足含量測定要求，見圖1～3。

1：槲皮素；2：異鼠李素

圖1 混合對照品色譜圖 1：槲皮素；2：異鼠李素

圖2 昌吉地區沙棗樣品色譜圖 1：槲皮素；2：異鼠李素

圖3 哈密地區沙棗樣品色譜圖

2.2 對照品溶液制備精密稱取2mg槲皮素和異鼠李素對照品，加入體積分數為80%的甲醇，置于10mL的容量瓶中，定容，分別制成含200μg/mL的槲皮素和異鼠李素溶液。精密量取槲皮素和異鼠李素對照品溶液各5mL，置10mL容量瓶中，制成含有異鼠李素與槲皮素混合對照品溶液，濃度為100μg/mL。

2.3 供試品溶液制備精密稱取約1g供試品粗粉，置于錐形瓶中，精密加入50mL體積分數為80%的甲醇，加熱回流30min，放冷，搖勻，過濾。精密量取濾液25mL，于具塞錐形瓶中，加入10mL體積分數為25%的鹽酸溶液，搖勻，水浴加熱回流30min，立即冷卻，轉移到50mL的容量瓶中，用適量的體積分數為 80%的甲醇洗滌錐形瓶，洗液合并倒入容量瓶中，加入體積分數為80%的甲醇至刻度，搖勻，濾過，取濾液，即得。2批沙棗均用此方法制得，分別為1號、2號。

2.4 標準曲線制備精密稱取異鼠李素與槲皮素對照品各2mg，分別置于10mL的容量瓶中，用體積分數為80%的甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取槲皮素對照品溶液8、10、12、14、16μL置于10mL容量瓶中，加入體積分數為80%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得，取10μL進樣測定峰面積。以槲皮素對照品峰面積Y為縱坐標，相對應的對照品的質量X(μg)為橫坐標，計算得槲皮素的回歸方程為：Y=7 272.5X—1.76，r=0.999 8，線性范圍為0.016～0.032μg；精密量取異鼠李素對照品溶液10、15、20、25、30μL置于10mL量瓶中，加入體積分數為80%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得， 取10μL進樣測定峰面積。以異鼠李素對照品峰面積Y為縱坐標，相對應的對照品的質量X(μg)為橫坐標，計算得異鼠李素的回歸方程為Y=1 419.2X—4.02，r=0.999 5，線性范圍為0.025～0.075μg。

2.5 精密度試驗重復進樣混合對照品溶液5次，每次10μL進樣量，測定峰面積。結果得到異鼠李素與槲皮素的峰面積的RSD分別為0.36%、0.67%。

2.6 穩定性試驗取1號供試品溶液，分別于0、1、2、3、4、5h各進樣10μL，依次測定峰面積。結果槲皮素峰面積RSD為1.65%(n=6)，異鼠李素峰面積RSD為1.26%(n=6),說明供試品溶液在5h內穩定。

2.7 重復性試驗取1號藥材5份，按“2.3”項下方法制備供試品，進樣量為10μL。根據槲皮素和異鼠李素的峰面積計算得RSD分別為 0.86%、0.93%，表明該方法的重復性較好。

2.8 加樣回收試驗精密稱取0.5g已知含量的樣品，分別精密加入一定量的槲皮素及異鼠李素對照品，按“2.3”項下方法制備供試品，進樣量為10μL，測定峰面積并計算回收率，結果槲皮素的平均回收率為99.08%，RSD為1.36%(n=6)，異鼠李素的平均回收率為100.07%，RSD為 0.98%(n=6)。結果表明該方法的準確性較好。

2.9 沙棗中槲皮素和異鼠李素的含量測定精密稱取供試品1號、2號粉末各1g，按照“2.3”項下方法制備樣品，進樣量為10μL，分別測定槲皮素和異鼠李素的峰面積，重復測定3次，含量取平均值。

表1 沙棗中槲皮素和異鼠李素的含量測定

3 結論

高效液相色譜法(HPLC)已廣泛應用于中藥及制劑中有效成分或生理活性成分的含量測定[6-7]。本研究通過采用高效液相色譜法測定沙棗中黃酮類成分的含量，將370nm作為檢測波長，在流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液(58∶42)的色譜條件下，異鼠李素和槲皮素分離較好，建立了沙棗中槲皮素和異鼠李素含量測定方法，經方法學考察，均符合中藥質量標準要求，此方法簡便準確、專屬性強、精密度好、回收率高，為沙棗黃酮類物質的進一步開發提供了可靠的依據。

[1] 杜瑞芳,王雨梅,劉衛東,等.高效液相色譜法同時測定沙棗中槲皮素和異鼠李素的含量[J].時珍國醫國藥,2008,19(4):831-832.

[2] 新疆生物土壤沙漠研究所.新疆藥用植物志[M].烏魯木齊:新疆人民出版社,1981:76.

[3] 王雅,孫翠,陳麗瓊,等.沙棗多糖的研究進展[J].中國食品工業,2015,(3):54-55.

[4] 何艷熙,李炳奇,劉紅,等.沙棗中黃酮類化合物提取工藝條件的研究[J].中國中醫藥信息雜志,2008,15(7):57-58.

[5] 岳慶磊,郭效杰,羅宗銘,等.黃酮類化合物抗氧化機理及其在醫藥中的應用[J].廣州化工,2003,31(2):10-12.

[6] 何效平.楊瓊芳.王賢英.等.高效液相色譜法測定雪膽中雪膽甲素的含量[J].川北醫學院學報,2007,22(3):264-266.

[7] 李巖,孟慶勇,趙欣,等.HPLC法測定天仙子東莨菪堿和莨菪堿的含量[J].新疆醫科大學學報,2015,(1):64-66.

(本文編輯 施洋)

Determination of quercetin and isorhamnetin inElaeagnusangustifoliaL. by HPLC

SONG Hailong1,2, ZHAO Lu3, YANG Haiyan1

(1CollegeofFoodScienceandPharmacy，XinjiangAgriculturalUniversity，Urumqi830052，China；2XinjiangChineseandMinorityNationalityMedicineReseaechInstitute，Urumqi，830002，China；3CollegeofChemistry，XinjiangNormalUniversity，Urumqi830054，China)

Objective To determine the content of quercetin and isorhamnetin inElaeagnusangustifoliabyhighperformanceliquidchromatography. Methods The separation was performed on C18column and the mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid solution (58:42), quercetin and isorhanmetin was detected at 370 nm. Results The standard curve was linear within the concentration range of 0.016～0.032 μg for quercetin and 0.025～0.075 μg for isorhamnetin, respectively. The recovery was 99.08% for quercetin and 100.07% for isorhanmetin, respectively. RSD was 1.36% for quercetin and 0.98% for isorhanmetin (n=6). Conclusion This study provides a fast and accurate method to determine the content of flavonoids substances inElaeagnusangustifolia,providesthereliablebasisforthefurtherdevelopmentofflavonoidssubstancesinElaeagnusangustifolia.

ElaeagnusangustifoliaL.; HPLC; quercetin; isorhamnetin; determination of content;

新疆維吾爾自治區科技廳公益性科研院所基本科研業務資助項目(KY2015133)

宋海龍(1973-)，男，在讀碩士，實驗師，研究方向：食品加工與安全。

楊海燕，女，教授，博士，博士生導師，研究方向:食品安全，E-mail:2633165222@qq.com。

R

A

1009-5551(2015)12-1510-03

10.3969/j.issn.1009-5551.2015.12.014

2015-09-16]