中麻黃總黃酮超聲提取工藝研究

施 洋， 付 曉， 葛 亮

(1新疆醫科大學學報編輯部； 2新疆名醫名方與特色方劑學重點實驗室； 3新疆醫科大學中醫學院； 烏魯木齊，830011)

中麻黃總黃酮超聲提取工藝研究

施 洋1,2， 付 曉2,3， 葛 亮2,3

(1新疆醫科大學學報編輯部；2新疆名醫名方與特色方劑學重點實驗室；3新疆醫科大學中醫學院； 烏魯木齊，830011)

目的 研究中麻黃的總黃酮最佳提取工藝。方法 通過正交實驗進行提取工藝優選，采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法測定中麻黃總黃酮的含量。結果 超聲提取中麻黃的總黃酮最佳工藝為：超聲提取2次，10倍量75%乙醇，超聲時間為30 min，測得中麻黃的總黃酮含量為0.255%。結論 該方法簡單、快捷，適用于提取中麻黃中總黃酮。

中麻黃；總黃酮；超聲提取

全世界目前有67種麻黃屬植物，中國有15種及2變種1變型，其主要分布在東北、華北、西北等地，新疆有10種1變型[1]。中麻黃(EphedraintermediaSchrenk)為麻黃科(Ephedraceae)麻黃屬(Ephedra)多年生草本狀灌木，主要生長于各種干旱荒漠、沙灘地域以及干旱、半干旱山中，分布于我國新疆、青海、甘肅等省區，蒙古、俄羅斯等國家也有分布[2-4]。本課題組前期預試驗表明，中麻黃中可能含有多糖類、苷類、黃酮類、生物堿、蒽醌類、酚類等[5-9]。目前對于中麻黃總黃酮類成分的研究報道較少，而其又是活性成分。本實驗擬采用正交實驗優選中麻黃總黃酮最佳提取工藝，為新疆民族特色藥物的研究及開發利用提供相關依據。

1 儀器與試藥

Cintra40可見紫外分光光度計(澳大利亞GBC公司)，KQ-400DB型數控超聲器(昆山市超聲儀器有限公司)，梅特勒AL204電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)。中麻黃采自新疆烏魯木齊市化肥廠附近的麻黃灘，經新疆維吾爾自治區中醫醫院李永和主任藥師鑒定為菊科植物中麻黃(EphedraintermediaSchrenk)的草質莖。蘆丁標準品(中國食品藥品檢定研究院，編號：100080-201203)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 標準品溶液制備精密稱取蘆丁標準品5.00mg，置于容量瓶中，加入70%乙醇，使之溶解，并定容至刻度，搖勻，制成0.1mg/mL的標準品溶液。

2.2 標準曲線制備精確移取標準品溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL，加入70%乙醇至6mL，加入5%NaNO2溶液1mL，混勻，放置 6min后加入10%Al(NO3)3溶液1mL，混勻，放置6min后加入5%NaOH溶液10mL，定容至25mL，放置15min，蘆丁在505nm處有最大吸收。以樣品濃度(X)為橫坐標，以505nm處的吸光度(Y)為縱坐標， 獲得標

r=0.999 8。

2.3 測定方法確立精密稱取適量的中麻黃藥材，在相應條件下進行提取工藝研究。測定方法按照“2.2”項下方法進行操作，并根據方程計算樣品溶液中總黃酮含量。

2.4 提取工藝研究經過單因素考察實驗，明確提取次數為2次。正交實驗中考察因素為(A)加醇倍量、(B)乙醇濃度、(C)超聲時間，并根據單因素考察結果確定相關水平，相關因素水平表見表1；正交實驗設計采用L9(34)正交表，選擇總黃酮含量為評價指標，進行最佳工藝優選，實驗安排見表2。數據統計學分析用統計軟件SPSS18.0，方差分析結果見表3。直觀分析法表明最佳提取工藝為A2B2C3，即用10倍量75%乙醇，超聲提取2次，超聲時間30 min。方差分析結果表明: A 因素影響有統計學差異(P<0.05)，綜合考慮以A2B2C3組合為佳。即用10倍量75%乙醇超聲提取2次，超聲時間30min。

2.5 方法學考察

2.5.1 精密度試驗 精密吸取樣品溶液1mL于25mL容量瓶中，按照“2.2”項下標準曲線制備的操作方法，重復測定6次，測定吸光度。結果RSD為0.18%，表明此方法精密度良好。

表1 因素水平考察表

表2 L9(34)正交實驗表

表3 方差分析表

2.5.2 重復性試驗 準確稱取中麻黃藥材1g，按照最佳提取工藝平行制備6份樣品，測定其總黃酮含量。結果RSD為0.98%，表明此方法具有較好的重復性。

2.5.3 穩定性試驗 精密吸取樣品溶液1mL置于25mL容量瓶中，按照測定方法項處理后，分別于0、20、40、60、80、120min時測定吸光度，計算總黃酮含量。結果RSD為0.98%，表明樣品溶液在120min內基本穩定。

2.5.4 加樣回收率試驗 取已知總黃酮含量的中麻黃6份，每份1g，分別精密加入蘆丁對照品溶液適量，按照最佳提取工藝制備樣品并進行測定、計算。結果平均回收率為98.34%，RSD為1.27%。

2.6 驗證試驗準確稱取中麻黃細粉3份各1g，采用10倍量75%乙醇超聲提取2次，每次30min,結果測得樣品中總黃酮含量分別為0.261 5%、0.256 5%、0.248 5%，平均含量為0.255 0%,表明該工藝較穩定。

3 結論

超聲輔助提取法是近些年來迅速興起的一項新技術，目前已被廣泛用于植物中黃酮類成分的提取。關于中麻黃中總黃酮提取工藝研究未見報道，本研究采用正交試驗優選中麻黃總黃酮最佳提取工藝，為開發利用新疆特色藥物中麻黃提供理論依據。本實驗采用分光光度法測定中麻黃中總黃酮的含量，其方法學考察均符合相關要求。本實驗結果可為中麻黃的質量評價提供相關參照。

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(本文編輯 楊晨晨)

Research on ultrasonic extraction process of total Flavonoids fromEphedraintermediaSchrenk

SHI Yang1,2, FU Xiao2,3, GE Liang2,3

(1DepartmentofJournalEditorial,XinjiangMedicalUniversity;2XinjiangKeyLaboratoryofFamousPrescriptionandScienceofFormulas;3CollegeofTraditionalChineseMedicine,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

Objective To study the best optimal process of extracting total flavonoids fromEphedraintermediaSchrenk. Methods Determine the content of total flavonoids, using orthogonal test, by the spectrophotometry in the NaNO2-Al (NO3)3-NaOH system. Results The optimum conditions for extracting the total flavonoids by ultrasonic wave were as follow: ultrasonic time was twice, alcohol concentration was 75%, material-liquid ratio was 1:10 and ultrasonic time was 30 min. the content of total flavonoids extracted was up to 0.255%. Conclusion The optimized method was stable and efficient, and can be used for extracting total flavonoids from Ephedra intermedia Schrenk.

EphedraintermediaSchrenk; total flavonoids; ultrasonic wave extract

新疆維吾爾自治區科技基礎條件平臺建設項目(PT1413);新疆維吾爾自治區重點實驗室科研開放課題基金(XJDX0910-2012-4)

施 洋(1984-)，男，碩士，編輯，研究方向：中藥民族藥活性研究。

葛 亮，男，博士，高級實驗師，研究方向：中藥民族藥制劑研究，E-mail: geliang917@163.com。

R914

A

1009-5551(2015)12-1504-03

10.3969/j.issn.1009-5551.2015.12.012

2015-6-17]