九龍盤藥材質量控制*

李兵，盧汝梅，黃志其，潘立衛，閻莉

(1.廣西中醫藥大學藥學院，南寧 530001；2.河池學院化學與生物工程學院，河池 546300)

·藥物制劑與藥品質量控制·

九龍盤藥材質量控制*

李兵1，盧汝梅1，黃志其1，潘立衛2，閻莉1

(1.廣西中醫藥大學藥學院，南寧 530001；2.河池學院化學與生物工程學院，河池 546300)

目的 建立壯藥九龍盤藥材的質量控制方法。方法 采用薄層色譜法對九龍盤進行定性鑒別；采用高效液相色譜(HPLC)法測定其中沒食子酸的含量，色譜柱為Aichrom Reliasil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相為乙腈-0.1%磷酸(4：96)，流速1.0 mL·min-1，檢測波長270 nm，柱溫26 ℃。結果 九龍盤藥材薄層色譜鑒別特征明顯，專屬性強；沒食子酸進樣量在0.08～0.56 μg之間與峰面積呈良好的線性關系(r=1.000 0)，平均加樣回收率101.12%，RSD 2.20% (n=6)。結論 所建立的定性定量測定方法簡單可行，準確可靠，可用于九龍盤藥材的質量控制參考。

九龍盤；沒食子酸；質量控制

壯藥九龍盤為蓼科植物金線草[Antenoronfiliforme(Thunb.)Roberty et Vautier]的全草，具有涼血止血、清熱利濕、散瘀止痛之功效。主治咳血、吐血、便血、血崩、痢疾、胃痛、經期腹痛、跌打損傷、風濕痹痛、癰腫等癥[1-2]。九龍盤在廣西壯族自治區多有分布，是壯醫臨床常用解毒藥。該藥具有抗炎、鎮痛、抗凝血等藥理作用[3]，但其化學成分的研究筆者未見報道。文獻顯示，同屬植物短毛金線草中含有沒食子酸、(-)-兒茶-精、(-)-表兒茶精、(-)-表兒茶精-3-O-沒食子酸酯、原矢車菊素等酚類成分[2]。筆者通過化學成分初步研究，發現不同產地的九龍盤藥材中均含有沒食子酸，該成分味澀，具有收斂、止血、抑制白念珠菌生物膜[4]等作用，與九龍盤的藥效具有一定的相關性，如臨床上常用的涼血止血藥地榆飲片就測定沒食子酸的含量來控制質量[5]。目前沒食子酸的測定方法較多，主要是通過高效液相色譜(HPLC)法測定，如阿米樂努西達日蜜膏中沒食子酸的含量測定[6]、反相高效液相色譜法測定柿蒂中沒食子酸的含量[7]等。筆者在本實驗中采用沒食子酸對照品，用薄層色譜法對不同產地九龍盤藥材進行定性鑒別；采用HPLC法測定其中沒食子酸的含量，建立九龍盤藥材的質量控制方法，以期為其質量控制和制劑開發提供科學依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津LC-20A高效液相色譜儀(紫外檢測器)；Aichrom Reliasil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)。Millipore Simplicity- 185 超純水儀( 美國密里博公司)。天平(德國塞多利斯BP211D，感量：0.1 mg)。

1.2 試藥 沒食子酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110831-200803，含量≥98%)；水為自制超純水，甲醇(色譜純，批號：A452-4)、乙腈(色譜純，批號：A998-4)均購買于西隴化工股份有限公司。廣西不同產地九龍盤藥材(表1)，經廣西中醫藥大學韋松基教授鑒定為蓼科植物金線草[Antenoronfiliforme(Thunb.)Roberty et Vautier]的全草，標本保存于廣西中醫藥大學藥學院中藥化學教研室。

表1 10批不同產地九龍盤藥材及其沒食子酸含量測定結果

Tab.1 Determination results of galli acid content in 10 batches ofAntenoronfiliformefrom different origins

序號產地批號沒食子酸含量/(mg·g-1)JLP1廣西南寧市上林縣西燕鎮201106220．27JLP2廣西南寧市茅橋植物園201106170．71JLP3廣西南寧市武鳴縣大明山頂201107050．35JLP4廣西南寧市武鳴縣大明山腳201010270．72JLP5廣西玉林市桂平縣金田鄉201104111．21JLP6廣西桂林市金秀縣金秀鎮201105261．12JLP7廣西南寧市水街201107251．01JLP8廣西桂林市金秀縣圣塘山201107250．81JLP9廣西梧州市藤縣平福鄉201103201．68JLP10廣西桂林市金秀縣三角鄉201104101．28

2 方法與結果

2.1 九龍盤藥材的薄層色譜鑒別

2.1.1 對照品溶液的制備 取沒食子酸對照品2.1 mg，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取九龍盤藥材粉末(過2號篩網)約2 g，置錐形瓶，加水50 mL，密塞，超聲提取30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加入甲醇2 mL溶解，作為供試品溶液。

2.1.3 沒食子酸的薄層鑒別 按“2.1.2”項制備10批不同產地藥材的供試品溶液，在高效薄層硅膠G板(青島勝海精細硅膠化工有限公司)點樣，以三氯甲烷：乙酸乙酯：甲酸(5：4：1)為展開劑，噴5%氯化鐵(FeCl3)乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰。結果表明，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，重復性較好，實驗結果見圖1。

2.2 九龍盤藥材中沒食子酸含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Aichrom Reliasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸(4：96)；檢測波長：270 nm，流速：1.0 mL·min-1；柱溫：室溫。理論板數按沒食子酸計算應不少于5 000。

2.2.2 對照品溶液的制備 取沒食子酸對照品4.0 mg，精密稱定，加甲醇使溶解并稀釋至100 mL，搖勻，即得每毫升含40 μg的對照品溶液。

1.JLP-4；2.JLP-1 ；3.JLP-2；4.JLP-3；5.JLP-7；6.JLP-6；7.沒食子酸對照；8.空白溶劑；9.JLP-9；10.JLP-5；11.JLP-10；12.JLP-8

圖1 不同產地九龍盤藥材薄層色譜圖

1.JLP-4；2.JLP-1；3.JLP-2；4.JLP-3；5.JLP-7；6.JLP-6；7.Gallic acid standard；8.Blank solvent；9.JLP-9；10.JLP-5；11.JLP-10；12.JLP-8

Fig.1 TLC ofAntenoronfiliformefrom different origins

2.2.3 供試品溶液的制備 取九龍盤藥材粉末約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水50 mL，密塞，稱定質量，超聲提取30 min，放冷稱質量，用水補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.4 方法學考察

2.2.4.1 標準曲線的繪制 在“2.2.1”項的色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，14.0 μL，注入高效液相色譜儀進行測定，以對照品進樣量(μg)為橫坐標，對應峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程Y=3×106X-6 070.9(r=1.000 0)，結果表明沒食子酸進樣量在0.08～0.56 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.2.4.2 精密度實驗 精密吸取對照品試液10 μL，連續進樣6次，按“2.2.1” 項色譜條件分別測其峰面積值，計算得RSD值為2.35%，表明所用儀器精密度良好。

2.2.4.3 重復性實驗 取同一批(批號：20110622)九龍盤藥材，按“2.2.3”項下的方法制備6份供試品溶液，按“2.2.1”項色譜條件，分別進樣10 μL進行測定，沒食子酸的平均含量為0.28 mg·g-1，RSD為2.44%(n=6)，表明方法重復性良好。

2.2.4.4 穩定性實驗 取同一批(批號：20110622)九龍盤藥材，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，常溫保存，按“2.2.1”項色譜條件，分別在放置0，2，4，6，8，12 h后進樣10 μL測定。結果沒食子酸的平均含量為0.30 mg·g-1，RSD為4.48%(n=6)。表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.2.4.5 加樣回收率實驗 取同一批樣品約1 g(批號：20110622)，精密稱定，再分別精密加入0.31 mg·mL-1沒食子酸對照品溶液1 mL，按“2.2.3”項方法平行制備6份供試品溶液，按“2.2.1”項色譜條件，分別測定含量，計算回收率。結果平均加樣回收率為101.12%，RSD 2.20%。

2.2.5 樣品含量測定 取九龍盤藥材粗粉各約2 g，精密稱定，按“2.2.3”項方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項色譜條件，分別進樣10 μL進行測定，以峰面積計算沒食子酸的含量。同一批次藥材平行測定3份，取平均值。對照品色譜圖及樣品色譜圖分別見圖2，3；10批不同產地九龍盤藥材的測定結果見表1。

1.沒食子酸

3 討論

本實驗含量測定的指標成分為沒食子酸，考慮到沒食子酸呈酸性且極性較大，選用水溶液作為提取溶劑，將水提取液進行HPLC分析，發現提取液較雜質干擾少，分離較好，提取率高，且溶劑價廉易得，安全無毒，操作方便，故選擇水作為提取溶劑。

1.沒食子酸

Fig.3 HPLC chromatograms ofAntenoronfiliforme

從10批不同產地九龍盤中沒食子酸含量測定結果可以看出，產地對藥材中沒食子酸的含量有明顯影響，其中含量最高的為廣西梧州市藤縣平福鄉樣品(1.68 mg·g-1)，最低的為廣西南寧市上林縣西燕鎮樣品(0.27 mg·g-1)。

筆者在本實驗所采用方法簡單可行，準確可靠，靈敏度高，重現性好，建立了壯藥九龍盤藥材的薄層鑒別和含量測定方法，可為九龍盤藥材的品質評價和質量控制提供指導。

[1] 中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志(第25卷)[M].北京：科學出版社，1995：106-108.

[2] 國家中醫藥管理局中華本草編委會.中華本草[M].上海：上海科學技術出版社，1999：627.

[3] 黃勇其，駱紅梅，陳秀芬，等.金線草藥理作用初步研究[J].中成藥，2004，26(11)：918-921.

[4] 汪長中，程惠娟，官妍，等.沒食子酸抑制白念珠菌生物膜作用的研究[J].中國中藥雜志，2009，34(9)：1137-1140.

[5] 孫立立，江波，袁振海，等.HPLC測定地榆飲片中沒食子酸的含量[J].中成藥，2006，28(8)：1144-1147.

[6] 希爾艾力·吐爾遜，曼爾丹·尼牙孜，庫爾班尼沙·買提卡思木，等.阿米樂努西達日蜜膏中沒食子酸的含量測定[J].醫藥導報，2012，31(3)：350-352.

[7] 王初，胡曉煒，宋旭峰.反相高效液相色譜法測定柿蒂中沒食子酸的含量[J].醫藥導報，2005，24(8)：728-729.

DOI 10.3870/yydb.2015.03.021

Quality Control ofAntenoronfiliforme

LI Bing1，LU Rumei1， HUANG Zhiqi1， PAN Liwei2， YAN Li1

(1.PharmaceuticalCollege，GuangxiUniversityofChineseMedicine，Nanning530001，China；2CollegeofChemistryandBiologicalEngineering,HechiUniversity，Hechi546300，China)

Objective To establish the quality control method forAntenoronfiliforme. MethodsAntenoronfiliformewas identified by TLC，and the content of gallic acid was determined by HPLC.The chromatographic conditions were as follows: Aichrom Reliasil C18column (4.6 mm×250 mm，5 μm) was used with mobile phase consisted of acetonitrle-0.1% phosphoric acid(4：96)，the flow rate was 1.0 mL·min-1，and the detection wavelength was 270 nm. Results TLC identification forAntenoronfiliformewas highly specific.Gallic acid content had a good linearity in the range of 0.08-0.56μg (r=1.000 0).The average recovery was 101.12% and RSD was 2.20% (n=6). Conclusion The method is simple， feasible，and reproducible，and can be used for the quality control ofAntenoronfiliforme.

Antenoronfiliforme;Gallic acid;Quality control

2014-03-07

2014-04-20

*廣西自然科學基金創新研究團隊項目“中藥新藥基礎研究”(2011GXNSFF018006)；廣西壯族自治區食品藥品監督管理局項目(MZY2010011)

李兵(1982-)，男，廣西梧州人，講師，碩士，主要從事中藥化學成分及質量控制研究。E-mail：gxlb0910@163.com。

盧汝梅(1969-)，女，廣西陸川人，教授，博士，主要從事中藥化學成分和質量標準研究。E-mail：lrm1969@163.com。

R286；R927.1

B

1004-0781(2015)03-0358-03