H IF－1αE－cadherin在乳腺中的表達及意義

閆哲，白立立，趙偉靜，張洪珍

(1.河北醫(yī)科大學，河北石家莊 050017 2.河北紅十字會博愛醫(yī)院腫瘤科，河北石家莊 050000 3.河北省人民醫(yī)院腫瘤五科，河北石家莊 050000）

H IF－1αE－cadherin在乳腺中的表達及意義

閆哲1，白立立1，趙偉靜2，張洪珍3

(1.河北醫(yī)科大學，河北石家莊 050017 2.河北紅十字會博愛醫(yī)院腫瘤科，河北石家莊 050000 3.河北省人民醫(yī)院腫瘤五科，河北石家莊 050000）

目的：探討缺氧誘導因子－1α(hypoxia inducible factor－1 alpha，HIF－1α）及E－鈣粘蛋白(E－cadherin，E－cad）在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用及其關系。方法：采用免疫組織化學SP法檢測30例癌旁正常乳腺組織、40例乳腺增生組織及60例乳腺癌組織中HIF－1α及E－cad蛋白表達。結(jié)果：HIF－1α在正常乳腺組織及乳腺增生組織中不表達，在乳腺癌組織中主要表達在胞核，少量表達于胞漿，陽性表達率為63.3%(38/60），癌組織中的表達高于正常及增生組織，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）;其表達與組織病理學分級、TNM分期有關(P＜0.05），與年齡無關。E－cad主要表達在細胞膜，少量表達于胞漿，在乳腺正常、增生及癌組織中的陽性表達率分別為93.3%(28/30），80.0%(31/40），55.0%(33/60）;E－cad陽性表達率在正常與增生組織間無差別(P＞0.05），但在癌組織中顯著低于正常及增生組織(P＜0.05）。其表達與組織病理學分級、TNM分期有關(P＜0.05），與年齡無關。HIF－1a與E－cad在乳腺癌組織中的表達呈負相關(r=－0.433，P＜0.01）。結(jié)論：HIF－1α與E－cad表達異常可能是乳腺癌的早期事件，兩者在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起作用，聯(lián)合檢測在判斷乳腺疾病的惡性度，從而判斷預后方面有重要價值。

HIF－1α;E－cadherin;乳腺癌

女性乳腺癌發(fā)病日益年輕化。HIF－1α調(diào)節(jié)細胞對缺氧的反應，與腫瘤多種生物學行為密切相關。E－cad參與細胞之間粘附連接，維持細胞極性和組織結(jié)構(gòu)完整性，通過多種機制參與惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移等生物學行為［1］。本研究檢測HIF－1α及E－cad在乳腺正常、增生及癌組織中蛋白表達，探討二者在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用及其關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：選取河北省人民醫(yī)院2011年7月至2013年7月經(jīng)病理證實的手術切除標本，選取癌旁正常乳腺組織30例，乳腺增生組織40例，乳腺癌組織60例。標本均來源于女性，患者年齡28～69歲，中位年齡51歲，術前均未接受任何抗腫瘤治療。乳腺癌組織病理學分級：Ⅰ級14例，Ⅱ級17例，Ⅲ級29例; TNM分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期22例，Ⅲ期25例，Ⅳ期2例。

1.2 HIF－1α與E－cad蛋白表達的檢測：采用鏈霉親和素－過氧化物酶法(SP法）免疫組化染色。已知陽性切片作陽性對照，PBS替代一抗作陰性對照，顯微鏡下觀察并計數(shù)陽性染色細胞數(shù)。兔抗人HIF－1α單克隆抗體購自美國Epitomics公司，鼠抗人E－cad蛋白單克隆抗體購自美國Nomarker公司，SP試劑盒及DAB顯色劑購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 結(jié)果判定標準：HIF－1α表達的陽性判斷標準：按照Concetta Saponaro1等［2］報道的方法，以細胞核或胞質(zhì)內(nèi)有棕黃色細顆粒為陽性，根據(jù)陽性細胞百分組成計分：無陽性細胞計為0分，陽性細胞＜1%計1分，1～10%計2分，11～50%計3分，＞50%計4分;陰性表達(－）：0～1分，陽性表達(+）：2～4分。E－cad蛋白免疫組化結(jié)果判斷：著色區(qū)域定位于細胞膜和(或）細胞漿內(nèi)，出現(xiàn)棕黃色為陽性細胞，評分標準參照Mahler－Araujo等的評分方法［3］：陽性細胞＜10%計為0分，10%～25%計1分，25%～50%計2分，50%～75%計3分，≥75%計4分，0～2分為表達陰性，≥3分為表達陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理：應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗、Spearman等級相關分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 HIF－1α、E－cad在乳腺癌癌旁正常組織、增生組織及癌組織中的表達：如表1所示，HIF－1α在正常乳腺組織及乳腺增生組織中不表達，在乳腺癌組織中主要表達在胞核，少量表達于胞漿，陽性表達率為63.3% (38/60），癌組織與乳腺正常及增生組織間差異有顯著性(分別χ2=32.885，P=0.000;χ2=40.860，P=0.000）。E－cad主要表達在細胞膜，少量表達于胞漿，在正常乳腺組織、乳腺增生組織及乳腺癌中的陽性表達率分別為93.3%(28/30），80.0%(31/40），55.0%(33/ 60），呈下降趨勢;乳腺正常與增生組織間陽性表達率無差別(χ2=3.245，P=0.072），但乳腺癌組織中E－cad陽性表達率低于正常乳腺及增生組織(分別χ2=13.457，P=0.000;χ2=5.273，P=0.022），差異有顯著性。

表1 各組乳腺組織中HIF－1α與E－cad蛋白的表達

2.2 HIF－1α、E－cad的表達與乳腺癌臨床病理特征的關系：兩者表達均與年齡無關(P＞0.05），與組織病理學分級、TNM分期有關。病理學分級及TNM分期越高，HIF－1α陽性表達率越高(P=0.003，0.027）、E－cad陽性表達率越低(P=0.040，0.011），差異均有統(tǒng)計學意義，見表2。

表2 HIF－1α、E－cad的表達與乳腺癌臨床病理特征的關系

2.3 HIF－1α與E－cad在乳腺癌組織中表達的相關性：對60例乳腺癌組織中HIF－1α和E－cad陽性表達率進行相關性分析，結(jié)果示二者存在負相關，差異有統(tǒng)計學意義(r=－0.433，P=－0.008）。

3 討論

乳腺癌嚴重威脅女性生存質(zhì)量和身心健康，乳腺癌的發(fā)生是一個多基因參與、多因素共同作用的復雜過程。其發(fā)病機制最經(jīng)典的假說是乳腺正常上皮組織→上皮細胞非典型增生→原位癌→浸潤性癌的發(fā)展［4］。

因為腫瘤細胞快速無限增殖，結(jié)構(gòu)和功能異常的不成熟血管的生成，以及腫瘤組織炎性改變誘導的微循環(huán)修復，導致乳腺癌組織內(nèi)部存在缺氧［5］。HIF－1α就是在缺氧條件下誘導的核轉(zhuǎn)錄因子，可調(diào)節(jié)多種靶基因如血管內(nèi)皮生長因子(VEGF）、紅細胞生成素(Epo）等的表達，從而維持腫瘤新生血管形成、腫瘤細胞的能量代謝以及促進腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移［7］。本研究顯示，正常乳腺和乳腺增生組織中無HIF－1α陽性表達，而癌組織中高表達，且隨病理學分級及臨床分期增高而表達增加，提示HIF－1α可能與腫瘤高侵襲力及不良預后有關。

HIF－1α是調(diào)控腫瘤進展的促進因素，但腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移等生物學行為取決于促進因素和抑制因素的平衡。E－鈣粘蛋白(E－cad）參與細胞之間的粘附連接，可維持細胞極性和組織結(jié)構(gòu)完整性，與惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移抑制因素密切相關［1］，E－cad可能通過E－cadherin的基因突變、CpG島異常甲基化、E－鈣粘蛋白基因轉(zhuǎn)錄抑制、磷酸化和糖基化、細胞內(nèi)異常分布等機制參與惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。

大多實驗表明，E－cad高表達可降低腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，低表達會導致轉(zhuǎn)移潛能的提高。但也有報道，E－cad高表達的腫瘤仍可能具有較高的侵襲轉(zhuǎn)移能力，可能由于E－cad在細胞內(nèi)異常分布，而不是正常定位于細胞膜上，喪失了原有的粘附功能。本研究顯示，隨著正常乳腺上皮→乳腺上皮非典型增生→乳腺癌的轉(zhuǎn)化，E－cad陽性表達率呈遞減趨勢，與大多數(shù)類型的腫瘤報道結(jié)果相同，提示E－cad高表達可降低乳腺癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。

［1］王洪濤，周清華.E－鈣粘蛋白復合體與肺癌的侵襲轉(zhuǎn)移［J］.中國肺癌雜志，2010，13(3）：254～259.

［2］Concetta S，Andrea M，Girolamo R，et al.VEGF，HIF－1a expression and MVD as an angiogenic network in familial breast cancer［J］.Plos One，2013，8(1）：1～8.

［3］Mahler－Araujo B，Savage K，Parry S，et al.Reduction of E－cadherin expression is associated with non－lobular breast carcinomas of basal－like and triple negative phenotype［J］.Clin Pathol，2008，61(5）：615～620.

［4］Exonhit therapeutics and biomeriux presentadditional results in their breast cancer blood biomarkers program［J］.Women＇s Health Weekly，2007.

［5］劉錦，李貴新，路中等乳腺癌組織中HIF－1α、VEGF、MVD的表達及意義［J］.山東醫(yī)藥，2009，49(6）：56～58.

［6］趙航，劉東屏.HIF－1α與實體性腫瘤發(fā)生及臨床關系的研究進展［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2013，21(9）：2134～2137.

［7］Kam Y，Quaranta V.Cadherin－bound beta－catenin feeds into the pathway upon adherens junctions dissociation：evidence for an intersection between beta－catenin pools［J］.PLoSOne，2009，4(2）：e4580.

Expression of HIF－1αand E－cadherin in Breast Cancer and the Significance

YAN Zhe，BAILili，et al
(Hebei Medical University，Hebei Shijiazhuang 050017，China）

Objective：To investigate the significance and correlation of HIF－1αand E－cadherin in carcinogenesis and developmentof breast cancer.Method：Immunohistochemical stainingwas undertaken to analyze the expression of HIF－1αand E－cadherin in 30 cases of the adjacent normal breast tissues， 40 cases of mammary gland hyperplasia and 60 cases of breast cancer.Result：The expression of HIF－1αin the normal and mammary gland hyperplasia breast tissueswere all nagative，and in breast carcinoma，the positive rate of HIF－1αexpression was 63.3%(38/60），with significant differences among them(P＜0.05）.The expression of HIF－1αwas closely correlated with pathological grade and clinical stage(P＜0.05），but not with age.E－cadherin mainly expressed inmembranes，the positive expression rate in normal、mammary gland hyperplasia and cancer tissueswas 93.3%(28/30），80.0%(31/40）and 55.0%(33/60）.There was no difference of E－cadherin expression between normal and mammary gland hyperplasia breast tissues(P＞0.05），but positive expression rate of E－cadherin in breast cancer wasmuch lower than normal and mammary gland hyperplasiatissues(P＜0.05）.The expression of E－cadherin was correlated with pathological grade and clinical stage(P＜0.05），but notwith age.The expressions of HIF－1αand E－cad herin in breast cancerwere negatively correlated(r=－0.433，P＜0.01）.Conclusion：The abnormal expressions of HIF－1αand E－cadherin are early events in breast cancer.Bothmay exert important effects in carcinogenesis and development of the breast cancer.Synchronous detection of HIF－1αand E－cadherin is of great value in judging themalignancy of breast disease in order to prompt prognosis.

HIF－1α;E－cadherin;Breast cancer

A

10.3969/j.issn.1006－6233.2015.06.011

1006－6233(2015）06－0914－04