千日紅多糖的提取及含量測定

李金花農(nóng)石生盧秋杰李津黃鎖義

（1百色市婦幼保健院檢驗(yàn)科，廣西 百色533000；2右江民族醫(yī)學(xué)院）

千日紅多糖的提取及含量測定

李金花1農(nóng)石生2盧秋杰1李津2黃鎖義2

（1百色市婦幼保健院檢驗(yàn)科，廣西 百色533000；2右江民族醫(yī)學(xué)院）

目的：測定千日紅多糖的含量。方法：采用水提醇析的方法提取千日紅中多糖，采用硫酸-苯酚法進(jìn)行多糖含量的測定。結(jié)果：多糖在484 nm有最大吸收峰，求得其回歸方程為A=0.126 9C-2.076 27×10-3，相關(guān)系數(shù)r= 0.999 5；平均回收率為99.29%，RSD=1.739%（n=5）。千日紅中多糖含量為1.819%（g/L）。結(jié)論：該方法簡便、快速、準(zhǔn)確,靈敏度高。

千日紅；多糖；提取；含量測定；分光光度法

多糖是自然界中含量最豐富的生物聚合物，幾乎存在于所有的生物中，具有能量儲(chǔ)存、結(jié)構(gòu)支持、防御功能和抗原決定性等多方面的生物功能[1]，有些多糖或其衍生物還有多種藥理活性，如從寧夏枸杞子 （Lycium barborum L.）中提取得到的多糖具有抗氧化、抗腫瘤、防衰老及增強(qiáng)免疫力等方面的作用[2]；從滸苔（Enteromorpha prolifea）中提取的滸苔多糖，具有降血脂和抗衰老功能[3]；從擔(dān)子菌綱多孔菌科靈芝屬靈芝（Ganoderma lucidum）中提取的靈芝多糖是一種良好的抗氧化劑和免疫增強(qiáng)劑[4]；而猴頭菌絲多糖和子實(shí)體多糖、黑木耳多糖和銀耳多糖能使小鼠腦和肝臟中SO D活力增加[5-6]，所以近年來多糖成為天然藥物研究的熱點(diǎn)。千日紅（Gomphrena globosa L.）又名千年紅、百日紅、火球花、紅火球，為莧科千日紅屬一年生草本花卉[7]，該植物性味甘平，具有清肝，散結(jié)，止咳平喘，降低血清、肝臟中的脂肪含量，抗變異及抗腫瘤，防止體內(nèi)過氧化作用等功效[8]。主治百日咳，哮喘，眼目昏花，小便不利，肺結(jié)核咳血，慢性支氣管炎，痢疾腹痛，小兒發(fā)熱抽搐[8]。關(guān)于千日紅多糖成分的提取及含量測定的研究尚未見報(bào)導(dǎo)。本研究采用水溶醇析法提取了千日紅多糖，并采用硫酸-苯酚法[9]對(duì)其多糖含量進(jìn)行了較詳細(xì)的研究，為天然藥物的開發(fā)應(yīng)用提供了理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑

1.1 原料

千日紅花序干品（采自廣西百色市右江區(qū)）。

1.2 試劑

無水乙醇，丙酮，乙醚，苯酚，濃硫酸等均為國產(chǎn)分析純，雙蒸餾水。

1.3 儀器設(shè)備

722型光柵分光光度計(jì)（上海精密儀器有限公司）；TG 3288電子天平（上海天平儀器廠）；SH B-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；H H syzl-N i 6-C電熱恒溫水浴鍋（北京長源實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 千日紅多糖的提取

稱取粉碎的千日紅粉末3 g，均勻分成3份，分別放入 50 m L燒杯中，加水至50 m L處，將其置于電熱恒溫水浴鍋中，溫度控制在65℃左右，3小時(shí)后，用循環(huán)水式多用真空泵進(jìn)行抽濾，將濾液放入另外的500 m L大燒杯中；用同樣的方法重復(fù)提取3次；合并3次的濾液，用電熱恒溫水浴鍋加熱濃縮至3～ 5 m L，冷卻至室溫后，加入25 m L乙醇，在暗處靜置24小時(shí)。用砂布漏斗抽濾，濾餅依次用乙醇和乙醚洗2次，得灰色粉末狀固體0.214 4 g。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制[9]

精密量取葡萄糖對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液 5，10，20，30，35 m L，分別置50 m L量瓶中，用水稀釋至刻度，得到10.0，20.0，40.0，60.0，70.0 μg/m L的5個(gè)不同濃度的對(duì)照品溶液；再分別精密吸取1.0 m L置 50 m L燒杯中，分別加入 1.5 m L苯酚溶液，7.5 m L濃硫酸，混合均勻后放置20分鐘，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在484 nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。建立回歸方程，結(jié)果見表1。根據(jù)表1得回歸方程：

A=0.126 9C－2.076 27×10-3，

r=0.999 5。

表1 紫外可見分光光度計(jì)測定葡萄糖對(duì)照液吸光度

2.3 千日紅多糖含量測定

精密稱取千日紅多糖0.010 20 g置100 m L量瓶中，加1 m ol/L H2SO4溶液2 m L加熱水解2小時(shí)，冷卻至室溫，稀釋至刻度。對(duì)照品溶液的制備按2.2相同的方法制成5個(gè)不同濃度的對(duì)照品溶液。精密量取1.0 m L千日紅樣品液5份，分別置50 m L的燒杯中，按繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，自“加1.5 m L苯酚溶液”起，依法測定吸光度，由回歸方程計(jì)算千日紅中多糖的含量，其測定結(jié)果見表2。由回歸方程計(jì)算得出千日紅多糖含量為1.819%（g/L）。

表2 千日紅多糖溶液的吸光度

2.4 回收率的測定

精密稱取千日紅多糖 5 m g，置 50 m L量瓶中，加入1 m ol/L H2SO4溶液2 m L加熱水解2小時(shí)，冷卻至室溫，稀釋至刻度，往不同濃度的對(duì)照品溶液中，分別加入0.1 m L上述溶液進(jìn)行含量測定，結(jié)果測得回收率為99.29%，RSD=1.739%（n=5）。

3 結(jié)果與討論

將多糖水解成單糖時(shí)，水解不完全則測不準(zhǔn)，過度水解又會(huì)導(dǎo)致多糖的差向異構(gòu)化，故需準(zhǔn)確確定水解時(shí)酸堿的濃度、溫度和時(shí)間等條件。千日紅多糖含量為1.819%（g/L），平均回收率為99.29%，RSD=1.739%（n=5）。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，用硫酸-苯酚法測定多糖含量，結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差較小，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性較好，所得數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。

[1] 時(shí)瀟麗，姚春霞，林曉，等.多糖藥物應(yīng)用與研究進(jìn)展[J].中國新藥雜志，2014，23（9）：1057-1062.

[2] 郝紅偉，劉敏，王唯霖，等.復(fù)方中草藥提取物對(duì)小鼠機(jī)體抗氧化能力的影響[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2014，26（12）：1934-1938. [3] 李世杰，張丹雁，嚴(yán)婭娟，等.陽春砂多糖的分離純化及體外抗氧化作用研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2014，26（12）：2037-2040.

[4] 段麗紅，李仲秋，吳正治，等.鳶尾苷抗氧化活性的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2014，26（12）：2046-2049.

[5] 鄭孟君，曹建民，周海濤，等.蒺藜配伍低聚原花青素對(duì)大鼠運(yùn)動(dòng)性腎臟缺血再灌注的保護(hù)作用[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2014，26（12）：2071-2075.

[6] 文彬，陳然，彭佩純，等.天然牛磺酸對(duì)肝硬化大鼠 M M P-9、Int egri n-β1表達(dá)的調(diào)控[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2014，26（12）：1939-1943.

[7] 李忠華.盆栽千日紅節(jié)日開花繁殖栽培和花期控制技術(shù)[J].現(xiàn)代園藝，2010，（12）:19-20.

[8] 董昕瑜，周淑榮，包秀芳，等.千日紅栽培與應(yīng)用[J].特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物，2013，16（11）：34-35.

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Extraction and Content Determination of Polysaccharides in Gomphrena globosa

Li Ji nhua1，N ong Shi sheng2，Lu Q i uj i e1，Li Ji n2，H uang Suoyi2（1 Cl i ni cal Laborat ory of M at ernal and Chi l d H eal t h H ospi t alofBai se Ci t y，G uangxiBai se 533000，Chi na；2 Y ouj i ang M edi calU ni versi t y forN at i onal i t i es）

Objective：To det erm i ne t he cont entof pol ysacchari des i n Gomphrena globosa.Methods：Pol ysacchari des w ere ext ract ed from Gomphrena globosa w i t h hot w at er-et hanolm et hod.The cont entofpol ysacchari des w as det erm i ned by phenol-sul furi c aci d m et hod.Results：The pol ysacchari des have t he m axi m um absorpt i on peak at484 nm，t he regressi on equat i on w as A=0.126 9C-2.076 27×10-3w i t h correl at i on coeffi ci entr=0.999 5,and t he average recovery w as 99.29%，RSD=1.739% （n=5）.The cont entofpol ysacchari des i n Gomphrena globosa w as 1.819%（g/L）.Conclusion：The resul t s show ed t hatt he m et hod i s conveni ent，rapi d and accurat e w i t h a hi gh sensi t i vi t y.

Gomphrena globosa；Pol ysacchari de；Ext ract i on；Cont entD et erm i nat i on；Spect rophot om et ry

10.3969/j.i ssn.1672-5433.2015.04.006

2014-11-20）

國家中醫(yī)藥管理局“十二五”中醫(yī)藥重點(diǎn)學(xué)科中藥化學(xué)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目（國中醫(yī)藥人教發(fā)[2012]32號(hào)）；廣西重點(diǎn)學(xué)科藥物化學(xué)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目（桂教科研[2013]16號(hào)）

李金花，女，檢驗(yàn)技師。研究方向：中草藥有效成分提取。E-m ai l：j i nhuaw orl d@163.com

黃鎖義，男，教授，碩士生導(dǎo)師。研究方向：天然產(chǎn)物有效成分提取及活性研究、食品衛(wèi)生研究。通訊作者E-m ai l：huangsuoyi@163.com