3種中藥多糖對(duì)雞新城疫疫苗免疫效果的影響

楊慶芳+楊康林+姚靜+蔣春茂

摘要：14日齡健康、非免疫羅曼蛋公雞240羽，隨機(jī)均分為8組，用雞新城疫疫苗首次免疫和二次免疫前3 d、當(dāng)日及后3 d，試驗(yàn)組分別灌胃0.5 mL高、低劑量黃芪多糖（ASP）、淫羊藿多糖（EPP）和板藍(lán)根多糖（IRPS）溶液，空白對(duì)照組和免疫對(duì)照組灌胃等量生理鹽水。各組分別于首免后連續(xù)4周隨機(jī)取雞10羽稱量體質(zhì)量、測(cè)定抗體效價(jià)和T淋巴細(xì)胞增殖變化。結(jié)果表明，3種中藥多糖均可促進(jìn)雞體質(zhì)量增加，提高新城疫HI抗體效價(jià)，促進(jìn)外周血T淋巴細(xì)胞增殖，其中低劑量的IRPS效果最好。

關(guān)鍵詞：黃芪多糖（ASP）;淫羊藿多糖（EPP）;板藍(lán)根多糖（IRPS）;新城疫疫苗;抗體效價(jià);T淋巴細(xì)胞

中圖分類號(hào)： S858.312.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2015）04-0220-02

收稿日期：2015-01-06

基金項(xiàng)目：西藏自然科學(xué)基金（編號(hào)：ZJ2013018）;江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院“鳳凰人才工程”。

作者簡(jiǎn)介：楊慶芳（1975—），女，山西介休人，碩士，講師，主要從事動(dòng)物醫(yī)學(xué)教學(xué)及科研工作。E-mail：474861982@qq.com。

通信作者：蔣春茂，教授。E-mail：1836340739@qq.com。

多糖是自然界含量豐富的重要生物大分子之一，與蛋白質(zhì)、核酸和脂類構(gòu)成了最基本的4類生命物質(zhì)[1]，其結(jié)構(gòu)和功能受到了廣泛關(guān)注，成為繼蛋白質(zhì)和核酸之后探索生命的第三個(gè)里程碑[2]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，中藥多糖作為中藥的活性成分，其最重要的功能是具有免疫調(diào)節(jié)活性[3]。本研究從黃芪、淫羊藿和板藍(lán)根3種中藥中提取多糖，作為佐劑配合新城疫疫苗免疫雛雞，測(cè)定雞增重率、血清抗體效價(jià)和外周血T淋巴細(xì)胞增殖的動(dòng)態(tài)變化，旨在為中藥多糖類免疫增強(qiáng)劑開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

黃芪、淫羊藿和板藍(lán)根購(gòu)于當(dāng)?shù)蒯t(yī)藥公司，分別用水提醇沉法提取黃芪多糖（ASP）、淫羊藿多糖（EPP）和板藍(lán)根多糖（IRPS），硫酸-蒽酮法測(cè)定多糖含量分別為68.5%，63.8%和53.4%。各多糖按凈含量用去離子水稀釋為高劑量（H，8 mg/mL）及低劑量（L，4 mg/mL）濃度，常規(guī)高壓消毒、備用。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與分組

選擇健康、非免疫1日齡羅曼蛋公雞240羽，隨機(jī)分為8組，分別為空白對(duì)照組（BC組）、免疫對(duì)照組（IC組）及各中藥多糖免疫組（ASPH組、ASPL組、EPPH組、EPPL組、IRPSH組和IRPSL組），每組30羽。飼養(yǎng)至14日齡，除BC組用生理鹽水滴鼻、點(diǎn)眼外，IC組和中藥多糖免疫組均用新城疫Ⅳ苗滴鼻、點(diǎn)眼免疫（2羽份/羽）進(jìn)行首免，于28日齡時(shí)二免。首免和二免前3 d、當(dāng)日及后3 d，中藥多糖免疫組同時(shí)分別灌胃高劑量和低劑量ASP、EPP和IRPS，每羽0.5 mL。

1.3 樣本采集與項(xiàng)目測(cè)定

分別于首免后7、14、21、28 d，每組隨機(jī)取雞10羽，稱量、記錄體質(zhì)量，計(jì)算增重率;分別于免疫后7、14、21、28 d翼下靜脈采血0.5 mL，分離血清，用微量血凝抑制法（HI）測(cè)定抗體效價(jià)[4];心臟采集抗凝血（抗凝劑為檸檬酸鈉），采用MTT法[5]，在酶聯(lián)免疫儀上測(cè)定吸光度D570 nm，作為T淋巴細(xì)胞增殖指標(biāo)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

運(yùn)用SPSS軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異性統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同日齡雞增重率的變化

由表1可見(jiàn)，免疫后7 d時(shí)，各組雞增重率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）;免疫后14 d時(shí)，各給藥組增重率顯著高于空白對(duì)照組（P<0.05），但與免疫對(duì)照組不存在顯著差異（P>005），且免疫對(duì)照組與空白對(duì)照組間也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異存在（P>0.05）;免疫后21 d和28 d，除ASPH組外，其他各給藥組增重率均顯著高于免疫對(duì)照和空白對(duì)照組（P<0.05），但免疫對(duì)照和空白對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異存在（P>0.05）。

2.2 不同日齡雞血清抗體效價(jià)的變化

由表2可見(jiàn)，免疫后7 d和14 d時(shí)，各免疫組抗體效價(jià)無(wú)顯著差異存在（P>0.05），但均顯著高于空白對(duì)照組（P<0.05）;免疫后21 d和28 d時(shí)，中藥多糖免疫組抗體效價(jià)均顯著高于免疫對(duì)照和空白對(duì)照組（P<0.05）;其中21 d時(shí)，ASPH、ASPL組和IRPSL組抗體效價(jià)顯著高于其他給藥組（P>005）;28 d時(shí)，除IRPSH劑量組外，其他各給藥組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。表明，適當(dāng)濃度的中藥多糖可提高疫苗免疫的抗體效價(jià)，但以ASPL和IRPSL的免疫增強(qiáng)效果較好。

2.3 不同日齡雞外周血T淋巴細(xì)胞增殖的變化

由表3可見(jiàn)，免疫后7 d，除ASPH和ASPL組外，其他給藥組D570 nm值顯著高于空白對(duì)照組和免疫對(duì)照組（P<0.05）;各給藥組相比，除ASPH組外，其余各組均無(wú)顯著差異（P>005）。免疫后14、21、28 d，各給藥組D570 nm值均顯著高于空

表1 各組雞免疫后不同日齡增重率變化

組別

首免后不同時(shí)間增重率（%）

7 d 14 d 21 d 28 d

BC組 89.48±3.84a 176.31±4.72b 273.19±4.87b 347.46±5.64b

IC組 87.53±2.56a 185.48±3.92ab 277.38±3.37b 339.52±4.68b

ASPH組 85.62±3.49a 192. 87±4.46a 296.84±4.66a 392.65±5.71abendprint

ASPL組 88.17±3.20a 194.42±3.67a 306.58±4.59a 416.37±4.28a

EPPH組 92.36±4.74a 190.49±3.26a 305.36±4.48a 412.41±5.57a

EPPL組 89.44±3.58a 184.74±3.78a 312.47±5.32a 430.66±5.62a

IRPSH組 86.74±3.72a 196.58±4.83a 310.58±5.67a 405.06±5.27a

IRPSL組 88.46±2.07a 198.26±4.35a 319.46±5.23a 420.37±4.79a

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著（P<0.05）。表2、表3同。

表2 各組雞免疫后不同日齡血清HI抗體效價(jià)變化

組別

首免后不同時(shí)間HI抗體效價(jià)（log2）

7 d 14 d 21 d 28 d

BC組 2.67±0.34c 2.53±0.26c 2.45±0.33d 2.41±0.27d

IC組 3.76±0.47ab 4.67±0.35ab 5.76±0.24c 4.83±0.41c

ASPH組 3.82±0.35ab 4.85±0.33ab 7.35±0.43a 5.66±0.35ab

ASPL組 4.02±0.51a 5.38±0.36a 7.85±0.54a 6.18±0.41a

EPPH組 4.13±0.62a 5.23±0.45a 6.72±0.52b 5.54±0.26ab

EPPL組 4.26±0.57a 4.97±0.29ab 6.92±0.44b 5.73±0.35ab

IRPSH組 3.80±0.45ab 5.28±0.36a 7.26±0.36ab 5.46±0.42b

IRPSL組 3.94±0.31ab 4.75±0.46ab 7.63±0.49a 6.27±0.37a

表3 各組雞免疫后不同日齡淋巴細(xì)胞增殖的動(dòng)態(tài)變化

組別

首免后不同時(shí)間吸光度（D570 nm）

7 d 14 d 21 d 28 d

BC組 0.195±0.022bc 0.196±0.015c 0.187±0.024d 0.214±0.016d

IC組 0.189±0.017bc 0.195±0.014c 0.261±0.021c 0.304±0.021c

ASPH組 0.217±0.025b 0.259±0.016b 0.338±0.035b 0.393±0.024b

ASPL組 0.224±0.019ab 0.281±0.017ab 0.386±0.041a 0.445±0.048a

EPPH組 0.235±0.037a 0.274±0.026b 0.352±0.046ab 0.412±0.036ab

EPPL組 0.267±0.029a 0.326±0.014a 0.389±0.029a 0.427±0.031a

IRPSH組 0.237±0.033a 0.277±0.028b 0.361±0.027ab 0.419±0.023ab

IRPSL組 0.257±0.048a 0.318±0.027a 0.415±0.026a 0.452±0.046a

白對(duì)照組和免疫對(duì)照組（P<0.05）;各給藥組相比，免疫后 14 d 時(shí)各低劑量組間無(wú)顯著差異，各高劑量組及ASPL間也無(wú)顯著差異（P>0.05）;免疫后21 d和28 d時(shí)，除ASPH組外，各給藥組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

3 討論

許多研究表明，中藥多糖具有促生長(zhǎng)作用。王學(xué)斌等研究表明，APS粉劑和APS注射液具有促進(jìn)雛雞生長(zhǎng)的作用[6]。梁英等研究也表明，飼糧中添加適量的黃芩多糖，可提高肉仔雞的生長(zhǎng)性能[7]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，除ASPH組外，其他各給藥組雞增重率顯著增加。可能較高劑量的ASP與脂肪絡(luò)合抑制脂肪吸收，進(jìn)而降低了雞的生長(zhǎng)性能[8]。

血清抗體效價(jià)反映機(jī)體B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的特異性體液免疫應(yīng)答。抗體效價(jià)越高，雞對(duì)抗病毒的能力增強(qiáng)，雞群抗感染能力也越強(qiáng)[9]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，適量的中藥多糖能顯著增強(qiáng)雛雞的體液免疫，提高ND疫苗特異性抗體效價(jià)，增強(qiáng)雞抗ND感染的能力，該結(jié)果與邱妍等[10]和Wang等[11]的研究結(jié)果一致。

T淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫調(diào)節(jié)樞紐，其增殖反映機(jī)體細(xì)胞免疫水平[12]。T細(xì)胞的免疫活性與機(jī)體抗病毒能力相關(guān)，當(dāng)T細(xì)胞活性功能降低時(shí)，各種細(xì)胞因子（如白介素、干擾素及腫瘤因子等）生成減少，且T輔助性淋巴細(xì)胞輔助B細(xì)胞抗體生成作用受到影響[13]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，3種中藥多糖均可促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖，并呈現(xiàn)一定的量效和時(shí)效關(guān)系，表明適量的中藥多糖能促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖。

本試驗(yàn)以已經(jīng)應(yīng)用于動(dòng)物生產(chǎn)中的黃芪多糖為參照，觀察了EPP和IRPS的免疫增強(qiáng)作用，結(jié)果表明，中藥多糖的促生長(zhǎng)和免疫調(diào)節(jié)作用呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，低劑量IRPS的促增重和免疫增強(qiáng)作用最好，高劑量IRPS和EPP也具有一定的促增重和免疫增強(qiáng)作用。因此，在應(yīng)用和開(kāi)發(fā)中藥多糖時(shí)，需進(jìn)行進(jìn)一步的有效劑量篩選。

參考文獻(xiàn)：

[1]Lowe J B，Marth J D. A genetic approach to mammalian glycan function[J]. Annual Review of Biochemistry，2003，72（1）：643-691.endprint

[2]Bertozzi C R，Kiessling L L. Chemical glycobiology[J]. Science，2001，291（5512）：2357-2364.

[3]謝明勇，聶少平. 天然產(chǎn)物活性多糖結(jié)構(gòu)與功能研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2010，10（2）：1-11.

[4]Thekisoe M M，Mbati P A，Bisschop S P. Different approaches to the vaccination of free ranging village chickens against Newcastle disease in Qwa-Qwa，South Africa[J]. Veterinary Microbiology，2004，101（1）：23-30.

[5]郭振環(huán)，胡元亮，馬 霞，等. 硫酸化香菇多糖對(duì)新城疫疫苗免疫效果的影響[J]. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，33（1）：76-80.

[6]王學(xué)斌，陳功義，魏戰(zhàn)勇，等. 黃芪多糖粉劑和注射劑對(duì)雛雞免疫功能和生長(zhǎng)的影響比較[J]. 中國(guó)家禽，2007，29（3）：21-23.

[7]梁 英，姜 寧，何雯娟，等. 黃芩多糖對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能和免疫功能的影響[J]. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2010，22（4）：1031-1036.

[8]赫 剛. 殼聚糖對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能與免疫功能的影響[J]. 中國(guó)飼料，2005（24）：19-21.

[9]薛 峰，吳圣龍，唐應(yīng)華，等. 不同免疫程序的雞群新城疫和禽流感抗體水平與免疫保護(hù)之間的相關(guān)性試驗(yàn)[J]. 中國(guó)獸醫(yī)雜志，2005，41（9）：23-25.

[10]邱 妍，崔保安，胡元亮，等. 4種多糖對(duì)免疫雛雞抗體效價(jià)和T淋巴細(xì)胞的影響[J]. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，31（1）：77-81.

[11]Wang Deyun，Hu Yuanliang，Sun Junling，et al. Comparative study on adjuvanticity of compound Chinese herbal medicinal ingredients[J]. Vaccine，2005，23（28）：3704-3708.

[12]Kim H M，Han S B，Oh G T，et al. Stimulation of humoral and cell mediated immunity by polysaccharide from mushroom Phellinus linteus[J]. International Journal of Immunopharmacology，1996，18（5）：295-303.

[13]王德云，胡元亮，張寶康，等. 幾種中藥成分與IL-2免疫協(xié)同作用的比較[J]. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，28（3）：140-142.endprint