中藥飲片絲瓜絡堿溶性多糖提取工藝優選

周 霜 ，劉道剛 ，朱 靜

(1.重慶市江北區中醫院，重慶 400020;2.重慶市中醫院，重慶 400021;3.重慶市北碚區中醫院，重慶 400700)

絲瓜絡是葫蘆科植物絲瓜的果實纖維束，含有木聚糖、甘露聚和半乳聚糖等成分[1－2]，具有顯著鎮痛鎮靜、抗炎和抗過敏功效[3－6]。近年來，關于中藥飲片對絲瓜絡堿溶性多糖提取工藝的研究較少，本試驗中以中藥飲片為研究對象，應用單因素試驗與正交試驗對中藥飲片絲瓜絡堿溶性多糖的提取工藝進行了優化，旨在為絲瓜絡堿溶性多糖的提取和新藥開發提供參考。

1 儀器與試藥

植物粉碎機(浙江省瑞安市春海藥材器械廠);WFZ800－D3B型紫外光柵分光光度計(北京瑞利分析儀器公司);TDZ5－WS型離心機(湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司);CHRIST型真空冷凍干燥機(德國Christ公司);AUY220型電子天平(日本島津公司)。中藥飲片絲瓜絡，采摘試驗基地中果皮變黃、內部干枯的絲瓜，進行人工去外皮和種子，經60℃烘干至恒重，使用植物粉碎機過40目篩備用;無水乙醇、丙酮、葡萄糖、氫氧化鈉、濃硫酸，均為國產分析純。

2 方法與結果

2.1 提取工藝

絲瓜絡干粉→熱水浸提→過濾→減壓濃縮→調整pH至中性→乙醇沉淀→離心→沉淀物→洗滌→60℃烘干→得堿溶性粗多糖。將50 g絲瓜絡干粉按1∶30的蒸餾水在70℃水浴中浸提9 h，過濾，濾液轉入旋轉蒸發儀內，負壓濃縮至250 mL，濾渣加水1 300 mL并進行6 h的第2次提取，濾液濃縮至100 mL，將濾渣加水1 100 mL并進行4 h的第3次提取，濾液濃縮至100 mL;對每次的提取液進行離心，除去水溶性物質，濃縮液置入燒杯內，并加入3倍體積的無水乙醇，充分攪拌后沉淀多糖，置4℃的冰箱內過夜;20℃離心(4 000 r/min)15 min，收集沉淀物;使用無水乙醇、丙酮將沉淀物各洗滌2次，60℃烘干，得粗多糖。

2.2 多糖含量測定(苯酚－硫酸法)

2.2.1 測定方法

吸取2 mL待測液于試管內，加入1 mL的6%苯酚溶液搖勻，并加入5 mL濃硫酸，搖勻后靜置5 min，40℃水浴加熱15 min，取出，冷卻至室溫;以蒸餾水為溶劑，于490 nm波長處測定吸光度。

2.2.2 方法學考察

葡萄糖標準曲線繪制:稱取100 mg于105℃干燥至恒重的葡萄糖標準品，置容量瓶中，定容至刻度，即得葡萄糖標準液，分別于 6 個 50 mL 容量瓶中置入 0.25，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50 mL葡萄糖標準液，并加蒸餾水定容，將上述標準液各吸取2 mL置6個試管內，加入1 mL 6%苯酚溶液搖勻，并加入5 mL濃硫酸，搖勻，靜置5 min，40℃水浴加熱15 min，取出并冷卻至室溫;以蒸餾水為溶劑，于490 nm波長處測定吸光度值，并帶入回歸方程，計算多糖含量。

精密度試驗:精密吸取標準品溶液1.0 mL，依法操作，測定吸光度，連續測5次。結果的 RSD=1.22%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復性試驗:分別平行取葡萄糖與絲瓜絡堿溶性多糖溶液各6份，用苯酚－濃硫酸法顯色后測定吸光度。結果的 RSD=0.66%(n=6)，表明該方法重復性較好。

穩定性試驗:取葡萄糖與絲瓜絡堿溶性多糖的顯色溶液，于室溫自然光下放置2 h，每間隔20 min測定吸光度。結果的RSD=0.48%(n=6)，表明絲瓜絡堿溶性多糖含量在2 h內穩定，吸光度在2 h內略有減小，在1 h內幾乎不變。

回收率試驗:取絲瓜絡堿溶性多糖提取液5份，分別精密加入一定量的葡萄糖標準液，按擬訂方法測定，計算回收率。結果見表1。

表1 回收率試驗結果(n=5)

2.3 提取工藝優選

因素水平確定:根據單因素試驗結果，將絲瓜絡堿溶性多糖含量作為考察指標，將提取時間(因素 A)、提取溫度(因素B)、料液比(因素C)作為考察因素進行正交試驗，確定絲瓜絡堿溶性多糖的最佳提取工藝。因素水平表見表2。

正交試驗結果與分析:通過單因素考察確定了各因素的較佳范圍后，用正交試驗進行最優化設計，利用正交試驗助手Ⅱ進行統計學分析，正交試驗結果見表3，方差分析見表4。可見，因素對提取工藝的影響大小為料液比＞提取時間＞提取溫度。綜合考慮各因素，得出絲瓜絡堿溶性多糖的最佳提取工藝為，料液比1∶30 g/mL，提取時間2 h，提取溫度60℃。

表2 正交試驗因素與水平設計

表3 正交試驗結果

表4 方差分析表

驗證試驗:按最佳提取工藝進行驗證，結果3次試驗的多糖提取率分別為 7.23% ，7.19% ，7.25% ，平均 7.22% ，RSD=0.42%(n=3)，表明優選工藝穩定、可行，重復性好。

3 討論

絲瓜絡中堿溶性多糖為主要有效成分。本試驗中采用紫外分光光度法進行測定，選用苯酚－濃硫酸作為顯色劑測定絲瓜絡堿溶性多糖含量，該方法顯色穩定，線性關系良好，精密度、重復性及回收率均達到標準要求。

本試驗中采用 L9(34)正交試驗對絲瓜絡堿溶性多糖提取工藝進行了優化[7－11]，結果表明，料液比有顯著性影響，提取時間、提取溫度也有一定影響。在正交試驗中，隨著提取溫度的升高，絲瓜絡堿溶性多糖的提取率反而降低，可能是因為溫度過高導致多糖被破壞，故提取溫度不宜過高。

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[5]邵俊惠，宋筱寧，于雪農.經霜老絲瓜治療慢性咽喉炎[J].遼寧中醫雜志，2004，31(8):699.

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