空心蓮子草醇提物對小鼠急性酒精性肝損傷的防護作用＊

閻納新，武謙虎

(1.河北省石家莊市第五醫院，河北 石家莊 050021;2.江蘇省鎮江市第三人民醫院，江蘇 鎮江 212000)

空心蓮子草曾收載于1997年版《中國藥典(一部)》，具有清熱解毒、涼血利尿的功效，臨床可用于病毒性肝炎的治療[1－5]。筆者采用空心蓮子草醇提物對小鼠酒精性肝損傷的防護作用進行了試驗研究，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

藥物與試劑:空心蓮子草醇提物(自制)，空心蓮子草原藥材采自江蘇鎮江，經中國藥科大學中藥鑒定教研室鑒定為莧科植物空心蓮子草 Alternanthera philoxeroides(Mart.)Griseb的全草;北京紅星二鍋頭白酒(簡稱白酒，乙醇體積分數為56%，北京紅星股份有限公司，批號為1435342);注射用還原型谷胱甘肽鈉(商品名古拉定，積華藥業有限公司，批號為5038);血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)與天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)試劑盒均由南京建成生物研究所提供。動物:60只KM小鼠，雌雄各半，體重(25.0±2.0)g，飼養溫度為18～20℃，自由攝食及飲水，動物合格證號為Syxk(蘇)2013－0036，江蘇大學醫學院實驗動物中心提供。儀器:Synchon CX9 PRO型全自動生化分析儀(美國貝克曼公司)。

1.2 方法

空心蓮子草提取物的制備:取空心蓮子草干品500 g，粉碎成粗粉，加70%乙醇適量浸泡12 h，滲漉，收集滲漉液，回收乙醇后，加蒸餾水至 500 mL(1.0 g∶1.0 mL)，裝入 100 mL 瓶中高壓滅菌，備用。

酒精性肝損傷模型的制備:采用白酒(含乙醇56%)經口一次性給予小鼠(灌胃量相當于每10 g體重0.14 mL)，連續7 d。

動物分組與給藥:將60只KM小鼠隨機分為正常對照組(A組)，模型組(B組)，陽性對照組(C組)，空心蓮子草醇提物高、中、低劑量組(D1，D2，D3組)6組，各 10只，雌雄各半，按鼠體重給藥。A組與 B組給予 0.09 g/(g·d)的氯化鈉溶液(9.0 g/L)0.01 mL灌胃;D1，D2，D3組分別給予相當于空心蓮子草生藥4.00 ×10－3，2.00 ×10－3，1.00 ×10－3g/(g·d)的空心蓮子草醇提物灌胃;C組給予注射用還原型谷胱甘肽鈉0.30×10－3g/(g·d)灌胃。除A組外，其余各組給藥1 h后再給予每只小鼠(0.014 mL/g)白酒灌胃，共連續灌胃7 d，最后1次給藥后只進水。末次給藥12 h后，行小鼠眼球摘取取血，將血標本離心，取血清測定ALT及AST值;同時，盡快解剖小鼠以獲取新鮮肝臟，并放置10%中性福爾馬林液固定，石蠟包埋切片，HE染色，在光學顯微鏡(×200)下觀察病理組織學變化。

1.3 統計學處理

采用SPSS 10.0統計軟件，數據以X±s表示，行 t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 觀察指標

結果見表1。

X ± s，n=10)

表1 6組小鼠觀察指標比較(

2.2 肝臟組織病理學變化

A組肝組織基本結構正常，細胞排列整齊，細胞呈球形。胞核圓，染色較淺，核仁明顯，核膜清晰，核周間隙及核質均勻;胞質富含較多細胞器及內含物，無脂滴空泡，線粒體結構正常，其中粗面內質網常在核周及線粒體周圍成群分布，平行排列，見圖1 A。B組肝組織基本結構嚴重受損，細胞排列紊亂，肝細胞腫脹，片狀壞死多見，肝中央靜脈可見;胞核不規則，胞質可見數目較多脂滴空泡，見圖1 B。C組肝組織基本結構可見，細胞大小尚均一，排列整齊，部分肝細胞水腫，伴少許變性，壞死病灶不多見，肝中央靜脈明顯，胞質可見少量脂滴空泡和溶酶體，同B組比較，明顯減輕，見圖1 C。D3組肝組織基本結構可見，細胞排列尚整齊，一部分細胞可見輕度水腫與脂肪變性，小膽管周圍有淋巴細胞浸潤，肝細胞可有點片狀壞死，胞質病變可見少數線粒體存在腫脹變形，脂滴空泡和溶酶體較B組少，見圖1 D。D1及D2組肝組織基本結構可見，細胞大小尚均一，排列整齊，肝中央靜脈清楚可見，部分肝細胞水腫，幾乎無壞死病灶，偶可見少許變性。胞質可見少量脂滴空泡及溶酶體，與B組比較，明顯減輕，見圖1 E和圖1 F。

3 討論

酒精中毒引起的肝損傷主要由酒精代謝產物乙醛所致[6]。本試驗中采用一次性灌胃給予小鼠每10 g體重0.14 mL乙醇體積分數為56%的白酒制作肝損傷模型，該方法簡單、快速、經濟、易于操作且小鼠的死亡率較低。

圖1 小鼠肝臟組織病理學變化(HE，×200)

ALT和AST為監測肝細胞損害臨床常用的敏感指標，當肝組織出現損傷時，肝細胞能量障礙，血清中ALT和AST升高，一定程度上可由其水平推測肝細胞壞死和損傷程度[7]。當人體攝入過量乙醇后，肝臟為主要代謝臟器，但乙醇在損傷肝臟細胞同時會損傷肝臟毛細膽管，因此會同時出現肝細胞和毛細膽管炎癥，此時血中另一種γ－谷氨酰轉肽酶會明顯升高[1，8－9]。本研究結果顯示，空心蓮子草醇提物各劑量藥及陽性對照藥均可有效降低酒精性肝損傷小鼠血清ALT和AST水平(P＜0.05);病理組織學檢查顯示，空心蓮子草醇提物對小葉中心性纖維化、小葉中心性小灶性壞死及點狀壞死均有改善作用。因此，空心蓮子草醇提物在血清酶學和組織學方面均顯示出對酒精誘導肝損傷的防護作用，進一步為現代工藝提取傳統方藥中有效物質指明了方向。

Lieber等[10]的研究顯示，乙醇可增加肝細胞內自由基的生成，包括氧自由基、羥自由基等。自由基則會激活磷脂酶，引起脂質過氧化反應，增加過氧化終產物丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的生成，但抑制肝臟內抗氧化劑的產生，如超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－Px)等，聯合檢測 SOD和MDA可評估自由基攻擊肝細胞的嚴重度，也進一步反映機體對氧自由基的清除能力[11]。本研究中，白酒造模的小鼠肝組織MDA含量顯著增加，而SOD含量明顯降低，病理學檢查示肝細胞存在明顯損傷，同相關報道一致，即肝損傷上述變化同脂質過氧化密切相關。對模型小鼠灌注空心蓮子草醇提物后，肝組織MDA含量有效降低，而SOD含量有效提升，病理學檢查示肝臟損傷明顯改善，呈現出劑量依賴態勢，表明空心蓮子草醇提物能有效抑制脂質過氧化反應，保持細胞質膜正常，進一步表明其可清除自由基，減少其對細胞的損害作用。因此，空心蓮子草抗酒精性肝損害作用機制可能與其抗脂質過氧化作用有關，為空心蓮子草用于治療酒精性肝病提供了部分理論依據。

[1]李慶德，鄭錦坤，賴水招，等.醒酒護肝口服液對小鼠酒精性肝損傷的保護作用[J].中國藥業，2014，23(3):14－15.

[2]景金柱，崔 哲，張秀梅，等.河蜆提取物對小鼠急性化學性肝損傷的保護作用[J].中國藥業，2009，18(1):6－7.

[3]方進波，劉焱文，張彥文，等.空心蓮子草抗病毒活性成分研究[J].中草藥，2007，8(7):976 －979.

[4]范文乾.空心蓮子草抗病毒活性成分及指紋圖譜研[D].武漢:湖北中醫學院，2007.

[5]武謙虎，竇志華，樊一橋，等.常用治療肝病中藥 [M].第2版.北京:中國醫藥科技出版社，2014:62－66.

[6]關光玉，曾家慧，張術斌，等.酒精性脂肪肝小鼠模型的建立[J].寧夏醫學雜志，2007，29(11):971－972.

[7]宋成軍，陳光暉，佟繼銘.杞具飲乙醇提取物對小鼠酒精性肝損傷的保護作用[J].遼寧中醫雜志，2006，33(5):898 －899.

[8]景明勇.苦瓜提取物對非酒精性脂肪肝大鼠血脂的影響[J].中國藥業，2011，20(21):12 －13.

[9]汪海慧，成 揚，胡義揚，等.健脾活血方對大鼠急性酒精性肝損傷的干預作用[J].中西醫結合肝病雜志，2009，19(4):221－223.

[10]Lieber CS.New concepts of the pathogenesis of alcoholic liver disease lead tonoveltreatments[J].CurrentGastrocnierolRep，2004，6(1):60 －65.

[11]汪 濤，姜 華，陸國才.四氯化碳肝臟毒性研究新進展[J].毒理學雜志，2008，22(4):324.