益氣固攝丸橙皮苷的含量測定

★ 賴杰仁劉榮華謝二磊（.九江市中醫醫院 江西 九江000；.江西中醫藥大學 南昌0004；.江西省藥品科技開發部 南昌009）

益氣固攝丸橙皮苷的含量測定

★ 賴杰仁1劉榮華2謝二磊3（1.九江市中醫醫院 江西 九江332000；2.江西中醫藥大學 南昌330004；3.江西省藥品科技開發部 南昌330029）

目的：建立益氣固攝丸中橙皮苷的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法，Prontosil 120-5-C18柱（250mm×4.6mm, 5μm），流動相為乙腈-0.2%磷酸（17∶83）；流速1.0m L/min；檢測波長283 nm；柱溫30℃；進樣量10μL。理論板數按芍藥苷峰計算應不得低于2000。結果：橙皮苷對照品進樣量在0.0424 g～1.0597 g范圍內，進樣量與峰面積呈良好的線性關系（r=0.9999），平均回收率為98.73%，RSD值1.9%（n=6）。結論：本方法操作簡便，準確可靠，專屬性強，重現性好。適宜用于益氣固攝丸中橙皮苷的含量測定。

益氣固攝丸；橙皮苷；含量測定；高效液相色譜法

益氣固攝丸系九江市中醫醫院自主研發的國家重點專科腎病科特色醫院制劑，已取得醫療機構制劑批準文號。本品由黨參、陳皮、黃芪、白術等十余味中藥組成，具有益氣、固攝、降濁的功效，臨床應用于證屬脾腎氣虛型無癥狀性蛋白尿，療效顯著。本研究將橙皮苷的含量作為益氣固攝丸質量控制指標，采用高效液相色譜法測定橙皮苷的含量，旨在為本醫院制劑建立內控標準。

1 儀器與藥品

W aters高效液相色譜儀（Waters 600 controller, PDA2996型二極管陣列檢測器，Empower化學工作站）；SHIMADZULC-2010AHT高效液相色譜儀（紫外可變波長檢測器，LC-solution色譜工作站）；KQ5200B型超聲波清洗機（昆山市超聲儀器有限公司）。

益氣固攝濃縮丸（批號：20110501、20110502、20110503、20110504、20110601、20110602、20110603、20110701、20110702、201100703，九江市中醫院研制）；橙皮苷對照品（含量測定用，95.3%；批號：110721-200512，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：P rontosil 120-5-C18柱（250 mm×4.6mm,5μm）；流動相：乙腈-0.2%磷酸（17∶83）；流速：1.0m L/m in；檢測波長：283 n m；柱溫：30℃；進樣量：10μL。理論板數按芍藥苷峰計算應不得低于2000。

2.2 檢測波長的確定 用PDA檢測器對橙皮苷對照品與樣品溶液中與橙皮苷對照品相應位置上色譜峰在400～210 nm波長范圍內進行光譜掃描，結果均在283 nm波長附近處有最大吸收，故確定檢測波長為283 nm。

2.3 樣品溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱取橙皮苷對照品11.12 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得橙皮苷對照品母液。精密量取橙皮苷對照品母液5mL，用甲醇定容到50 mL量瓶中，即得橙皮苷對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備 取重量差異項下的本品適量，研細，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率25kHz）60min，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，濾過。精密量取續濾液25mL，蒸干，殘渣加水20 mL使溶解，水液用水飽和正丁醇提取4次，每次20mL，合并正丁醇液，正丁醇液用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20 mL，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇適量分次使溶解，置5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.3.3 陰性對照樣品溶液的制備 除陳皮以外，其余各藥材按益氣固攝濃縮丸處方量制備陰性對照樣品，同供試品溶液制備方法，制得缺陳皮的陰性對照樣品溶液。

2.4 方法的專屬性試驗 分別精密吸取供試品溶液、陰性對照樣品溶液與對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件測定。結果顯示橙皮苷峰行良好且無雜質干擾，基線平穩，對照品、供試品在相同時間有一色譜峰，且陰性對照樣品無干擾，見圖1。

2.5 線性關系考察 分別吸取上述對照品溶液2，5，10，20μL，對照品母液5μL，注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測定對照品峰面積，以進樣量與峰面積進行回歸處理，回歸方程為：Y=1.82×106X-2.23×103（n=5），橙皮苷對照品進樣量在0.042 4μg～1.059 7μg范圍內樣品進樣量與峰面積呈良好的線性關系（r=0.9999）。

2.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10μL，按上述色譜條件，重復進樣6次，測定橙皮苷峰面積值，計算對照品峰面積值的相對標準差為0.4%，精密度良好。

2.7 穩定性試驗 精密吸取“2.3.2”項下制備供試品溶液10μL，按上述色譜條件，分別在0，1，3，5，7，9，12，24 h，測定供試品溶液中橙皮苷峰面積值，計算供試品橙皮苷峰面積值的相對標準差為1.95%，表明供試品溶液在24h內基本穩定。

2.8 重復性試驗 精密稱取重量差異項下的本品（批號20110601）約2.0 g，共6份，照“2.3.2”項下制備供試品溶液供試品溶液，按上述色譜條件測定，測定結果經數據處理，平均含量為0.1543 mg/g，RSD為1.89%，方法重現性良好。

圖1 橙皮苷色譜圖

表1 不同色譜柱測定結果橙皮苷含量

表2 益氣固攝濃縮丸中橙皮苷含量（n=4）

2.9 加樣回收率試驗 取本品（批號：20110601，橙皮苷含量為0.1543m g/g），研細，取約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入含橙皮苷（濃度3.48μg/m L）對照品的甲醇混合溶液50m L，照“2.3.2”項下制備供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，計算加樣回收率。結果顯示：樣品中橙皮苷平均回收率為99.68%，R SD值為1.3%（n=6），表明回收率良好。

2.10 耐用性試驗 取本品（批號：20110601），照“2.3.2”項下制備供試品溶液供試品溶液，分別用A：P rontosil 120-5-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）、B：A g ilent E clipse X D B-C18（250mm×4.6mm,5μm）、C：D i a m onsil C18（250mm×4.6mm,5μm）三種品牌的色譜柱按正文中的色譜條件測定橙皮苷含量，結果無明顯差別，見表1。

2.11 樣品測定 取裝量差異下的本品，研細，取約2 g，精密稱定，照“2.3.2”項下制備供試品溶液供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，計算含量，見表2。

3 討論

3.1 流動相的選擇 方法學實驗研究中，比較了使用甲醇-0.1%醋酸溶液、甲醇-0.2%磷酸、乙腈-0.2%磷酸為流動相，考察橙皮苷的分離情況及峰形，結果以乙腈-0.2%磷酸（17∶83）為流動相的分離情況及峰形為佳；故確定流動相為：乙腈-0.2%磷酸（17∶83）。

3.2 供試品溶液制備的方法考察 在供試品溶液的制備實驗中，分別考察了加熱回流60m in，超聲提取（功率300W，頻率25k H z）60m in兩種提取方式，結果顯示，回流和超聲提取差異不明顯，超聲提取更為簡便，故采用超聲提取。分別選擇50%甲醇、70%甲醇、甲醇為提取溶劑，考察提取溶劑的影響，結果以甲醇提取效果較好。分別超聲處理（功率300W，頻率25k H z）30,60,90m in，結果顯示，超聲處理超聲60m in可得滿意結果。同時我們發現，甲醇提取物，用水飽和正丁醇提取4次時可較充分提取標的成分。

［1］國家藥典委員會.中國藥典·一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：741-742.

［2］張雅軍，孫會敏，田頌九.HPLC法測定小兒參術健脾口服液中的橙皮苷含量[J].藥物分析雜志，1998，18（5）：342-343.

［3］劉俊有，陳鳳秋，胡景蓮.HPLC法測定女金膠囊中橙皮苷的含量[J].中國藥品標準，2012，13（5）：373-375.

Content Determ ination of Hesperidin in YiqiGushe Pills by HPLC

LAI Jie-ren1,LIU Rong-hua2,XIE Er-lei3

1.Jiangxi Jiujiang Chinese Medicine Hospital,Jiujiang 332000,China；

2.JiangxiUniversity of Traditional Chinese Medicine,Nanchang 330004,China；

3.J iangxi Provincial Engineering Research Center for Drug and Medical Device Quality,Nanchang 330029,China.

Objective:To establish a HPLCmethod for content determination of hesperidin in Yiqi Gushe pills.Methods:Samples were determined by HPLC on the C18column.The column temperature was 30℃.The mobile phase was consisted of 0.2%phosphoricacetonitrile （83∶17）.The flow rate was 1.0 mL/min at UV detection wavelength of 283 nm.Results:The lincear range of Hesperidin was 0.0424～1.0597g,r=0.9999.The average recovery of hesperidin was 98.73%，RSD=1.9%（n=6）.Conclusion:Themethod is convenient，accurate，specificity and reproducibility for quality control of YiqiGushe Pills.

YiqiGushe Pills；Hesperidin；Determination；HPLC

R284.1

A

2014-09-03）編輯：曾文雪

*第一作者：賴杰仁，高級工程師，執業藥師。研究方向：中藥新制劑與新技術。T el：（0792）8188832，E-m a il：s m z_l a i@163.co m。