紅景天苷對大鼠急性心肌缺血的保護作用*

賈 真

(南陽醫學高等?？茖W校，河南 南陽 473000)

紅景天苷對大鼠急性心肌缺血的保護作用*

賈 真

(南陽醫學高等專科學校，河南 南陽 473000)

目的：研究紅景天苷對大鼠急性心肌缺血保護作用，初步探討其機制。方法：將48只SD大鼠隨機分為假手術組、模型對照組、紅景天苷組,每組16只。紅景天苷組每天自大鼠尾靜脈注射紅景天苷10 μg/(g·d)，假手術組和對照組術大鼠尾靜脈注射等量生理鹽水，連續腹腔注射7 d。末次注射30 min后制備心肌缺血再灌注模型(缺血30 min,再灌注1 h)。大鼠腹主動脈取血，制備血清，檢測血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量；TUNEL法檢測各組大鼠缺血心肌細胞凋亡指數；免疫組化法檢測凋亡蛋白Bcl-2 、Bax表達和Bcl-2/Bax比值。結果： 與模型對照組對比，紅景天苷組血清中CK-MB活性及MDA含量降低， SOD活性升高，差別有統計學意義 (P<0.05)；心肌細胞凋亡指數、Bax的表達降低，凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-2/Bax上升，差別有統計學意義(P<0.05)。結論： 紅景天苷能通過減少心肌細胞凋亡及抗脂質過氧化等機制，保護大鼠急性缺血心肌。

紅景天苷/藥效學；急性心肌缺血/藥效作用；心肌細胞凋亡/藥物作用；脂質過氧化/分析；大鼠；動物模型

紅景天苷是藏藥紅景天的提取物，具有良好的抗缺氧、抗腫瘤、抗衰老作用[1]。紅景天苷在心血管方面作用諸多，關于其對在體大鼠心肌缺血再灌注氧化損傷的影響，國內外文獻少見報道。本研究通過建立大鼠心肌缺血再灌注模型，以氧化應激、心肌酶、心肌細胞凋亡為觀察指標，研究紅景天苷對心肌缺血再灌注損傷干預機制，為臨床缺血性心臟病干預開辟新的途徑。

1 材料與方法

1.1 動 物

48只SD大鼠，6～7周齡，雌雄各半，體質量225～260 g，購自河南省實驗動物中心，動物合格證號SCXC(豫)2014-0063。

1.2 藥品、試劑與儀器

注射液紅景天苷，純度>90%，購自成都恒基醫藥科技公司，批號20140361。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA) 和 肌酸激酶同工酶(CK-MB)試劑盒，購自南京碧波生物科技有限公司，批號依次20140316，20140403，20140506； TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒、Bcl-2、Bax(凋亡蛋白)試劑盒，購自北京寶賽生物技術有限公司，批號20140401，20140501。 BL-420E+生物機能實驗系統,成都泰盟科技有限公司產品；BF52-OLYMPUS熒光顯微鏡，日本OLYMPUS公司產品；7020全自動生化分析儀， 日立公司產品。

1.3 動物分組與模型的建立

將48只SD大鼠隨機分為假手術組、模型對照組、紅景天苷組，每組16只。術前紅景天苷組每天自大鼠尾靜脈注射紅景天苷10 μg/(g·d)，假手術組和模型對照組注射等量生理鹽水,連續腹腔注射7 d。末次注射30 min后制備心肌缺血再灌注模型[2]。先稱量體質量，以30 g/L戊巴比妥鈉(40 μg/g)行腹腔注射麻醉后仰臥位固定；常規氣管插管及開胸，完全暴露心臟；假手術組冠狀動脈左前降支只穿線不結扎，其余2組以5-0號絲線結扎冠狀動脈左前降支，心肌顏色先變白而后變紫紺為結扎成功；結扎30 min后松開扎線，再灌注1 h；采集腹主動脈血3 mL；處死大鼠，迅速取出心臟。

1.4 檢測指標

1.4.1 CK-MB、SOD活性及MDA含量

以 3 000 r/min 離心血液10 min，取血清，用7020全自動生化分析儀檢測CK-MB、SOD活性及MDA含量

1.4.2 心肌細胞凋亡指數、心肌凋亡蛋白Bcl-2、Bax和Bcl-2/Bax

取大鼠缺血心肌，常規固定、包埋和制片。

采用 TUNEL法檢測心肌細胞凋亡指數：操作步驟按照TUNEL試劑盒說明書進行。DAB顯色，熒光顯微鏡顯示未凋亡心肌細胞發藍色熒光，凋亡細胞核發綠色熒光。在200倍視野下，選擇缺血最顯著區5個無重疊視野，計數凋亡細胞，計算心肌細胞凋亡指數(AI)。AI=凋亡陽性細胞/總細胞數×100%。

采用免疫組化法檢測心肌凋亡蛋白Bcl-2、Bax和Bcl-2/Bax，按試劑盒說明書操作。

1.5 統計學方法

2 結 果

2.1 各組CK-MB、SOD活性及MDA含量對比

與假手術組對比，模型對照組大鼠血清CK-MB、MDA含量升高，SOD活性降低，差別有統計學意義(P<0.05)；與模型對照組對比，紅景天苷組血清CK-MB活性及MDA含量降低， SOD活性升高，差別有統計學意義(P<0.05)。見表1。

組 別SOD/(U·mL-1)MDA/(μmol·L-1)CK-MB/(U·mL-1)假手術組145.35±7.962.27±0.780.75±0.28模型對照組86.21±3.76*7.61±1.36*6.29±1.18*紅景天苷組119.19±6.51#3.13±1.05#2.7±1.25#

注：與假手術組對比，*P<0.05；與模型對照組對比，#P<0.05。

2.2 各組大鼠AI、Bcl-2、Bax和Bcl-2/Bax對比

假手術組可見少量散在綠色熒光細胞核，模型對照組綠色熒光細胞數顯著增多，紅景天苷組綠色熒光細胞核較模型對照組減少。提示：紅景天苷干預后大鼠心肌凋亡細胞明顯減少。與假手術組對比，模型對照組大鼠AI升高，差別有統計學意義(P<0.05)；與模型對照組對比，紅景天苷組AI下降，差別有統計學意義(P<0.05)。與假手術組對比，模型對照組Bcl-2表達下降，Bax表達上升，Bcl-2/Bax比值下降，差別有統計學意義(P<0.05)；與模型對照組對比，紅景天苷組Bcl-2表達上升， Bax表達下降，Bcl-2/Bax比值上升，差別有統計學意義(P<0.05)。見表2。

組 別AI/%Bcl-2/%Bax/%Bcl-2/Bax假手術組2.45±0.951.57±0.020.46±0.023.42±0.02模型對照組20.15±1.17*0.65±0.04*0.94±0.05*0.68±0.05*紅景天苷組15.66±2.05#0.88±0.03#0.77±0.03#1.22±0.04#

注：與假手術組對比，*P<0.05；與模型對照組對比，#P<0.05。

3 討 論

缺血再灌注導致損傷的機制較為復雜。國內外學者[3-5]認為：這種病理過程與炎癥反應、鈣超載等有關。除此之外，氧化應激損傷在缺血再灌注過程中作用至關重要。心肌缺血后再灌注時可產生大量氧自由基，而內源性氧自由基清除酶顯著減少，就會出現脂質過氧化反應，導致細胞出現損傷，隨之使MDA劇烈釋放，使血清中含量增加；因此，MDA可以體現超氧化反應的程度，也是對細胞受損程度的一種間接性體現。心肌細胞膜整體性遭到損壞的時候，內源性CK-MB即放出進入血液內，CK-MB活性可以做判別心肌細胞遭受損壞水平的敏感參數。本實驗結果顯示：與模型對照組對比，紅景天苷組血清SOD活性升高，血清MDA、CK-MB活性降低，差別有統計學意義(P<0.05)。提示紅景天苷可清除氧自由基，抑制脂質過氧化反應。缺血再灌注后心肌組織也受到損傷，其損傷形式是細胞凋亡。本實驗結果顯示：與模型對照組對比，紅景天苷組心肌細胞凋亡指數降低，凋亡蛋白Bcl-2表達升高， Bax表達降低，Bcl-2/Bax比值上升，差別有統計學意義(P<0.05)。提示紅景天苷能抑制急性心肌缺血導致的大鼠心肌細胞凋亡。本實驗研究結果也與譚紅玲等[6]的研究一致。

[1]滕靜如，熊佳鵬，肖成，等.紅景天的現代藥理學進展[J].中國中醫基礎雜志，2006,12(4)：319.

[2]徐叔云,卞如濂,陳修,等.藥理實驗學方法學[M]. 3版.北京：人民衛生出版社，2002:567.

[3]Yang J,Chen L,Yang J,et al.MicroRNA-22 targeting CBP protectsagainst myocardial ischemia-reperfusion injury through anti-apoptosis in rats[J].Mol Biol Rep,2014,41(1):555-561.

[4]Skovsted GF,Kruse LS,Larsen R, et al. Heart ischaemia-reperfusion induces local up-regulation of vasoconstrictor endothel in ETB receptors in rat coronary arteries downstream of occlusion[J].Br J Pharmacol,2014,171(11):2726-2738

[5]高元峰，陳興，陳里新，等.紅景天苷對大鼠離體心臟缺血-再灌注損傷的保護作用及機制研究[J].中南藥學,2010,8(2):115-118.

[6]譚洪玲，肖成榮, 馬增春，等.紅景天苷對心肌細胞缺氧/復氧的保護作用[J]. 解放軍藥學學報，2010，26(3):194-197.

(編輯 陶 珠)

1001-6910(2015)08-0057-03 ·實驗研究·

R542.2

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.08.28

南陽市科技攻關項目(2012GG066)

2015-04-21；

2015-06-30