鹽酸頭孢噻呋乳液制劑制備及抑菌試驗研究

陳誠

摘要：以吐溫-80、斯盤-80為乳化劑，甲基纖維素為助懸劑，通過表面活性劑復配方法制備了鹽酸頭孢噻呋乳液制劑，并對制劑穩定性、粒徑進行了表征。結果表明，制備的鹽酸頭孢噻呋乳液制劑分散均勻，平均粒徑0.137μm，粒徑分布在0.065～0.188μm，加速試驗鹽酸頭孢噻呋含量97.15%、長期穩定性試驗鹽酸頭孢噻呋含量96.47%，均達到注射液制劑標準。將自制的鹽酸頭孢噻呋乳液制劑與市售的鹽酸頭孢噻呋混懸液以及頭孢噻呋鈉凍干粉通過瓊脂擴散法對大腸桿菌菌株（E.coli）、金葡萄球菌菌株（Goldaureus）進行體外抗菌活性試驗比較，具有較好的抑菌效果。

關鍵詞：鹽酸頭孢噻呋；乳劑；抑茵試驗

頭孢噻呋（ceftiofur）又名賽得福，是美國法瑪西亞普強公司創制的第一個畜禽專用的頭孢菌素類抗生素，具廣譜殺菌作用。該藥1988年在美國首次上市，由于其優良的抗苗活性和藥動學特點，于2012年在我國首次批準上市。頭孢噻呋為類白色至淡黃色粉末，其分子式為C₁₉H₁₇N₅0₇S₃，在水中不溶，在丙酮中微溶，在乙醇中幾乎不溶，被制成頭孢噻呋鈉凍干粉以及鹽酸頭孢噻呋混懸液經皮下、乳房灌注或肌肉注射注射使用。但是，由于頭孢噻呋鈉凍干粉制劑在動物體內達峰時間短，半衰期短，抑菌時間不長；而鹽酸頭孢噻呋混懸液顆粒大，肌肉注射刺激性大，動物耐受性不強，因此頭孢噻呋注射液劑型問題在國內一直未得到完全解決。

表面活性劑在制劑中廣泛用作增溶劑、乳化劑、助懸劑、分散劑、穩定劑、吸收促進劑及改善藥物的制備工藝等。難溶性藥物通過乳化作用制成的乳狀液型注射液，不僅能延長藥物在體內的有效作用時間，減少用藥次數，而且在提高藥物的組織選擇性方面顯現較好的效果。

本文結合不同表面活性劑復配方法，制備出具有粒徑小、半衰期長，肌肉注射刺激性小、動物注射耐受性好的鹽酸頭孢噻呋乳液制劑；對制劑穩定性、粒徑進行了表征。通過瓊脂擴散法對大腸桿菌菌株（E.coli）、金葡萄球菌菌株（Gold aureus）進行體外抗菌活性試驗比較，并檢測出抑菌圈大小，以期為拓展其它難溶性藥物向乳液制劑發展提供基礎和理論依據。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

HPIIOO型高效液相色譜儀，美國Agilent公司；Winner2308C激光粒度儀，濟南微顆粒儀器股份有限公司；JJ-CJ-2FD雙人單面垂直潔凈工作臺，成都市生科儀器有限公司。

大腸桿菌、金葡萄球菌，由重慶畜牧科學研究院提供；營養瓊脂培養基和營養肉湯培養基，上海恒遠生物科技有限公司；鹽酸頭孢噻呋、鹽酸頭孢噻呋混懸液、頭孢噻呋鈉凍干粉，西安康諾化工有限公司，其他試劑均為分析純。

1.2 鹽酸頭孢噻呋乳液制備

稱取鹽酸頭孢噻呋5.00g，吐溫-804.50g，甲基纖維素1.0g于燒杯中，然后加入60℃的注射用水定容至70mL，攪拌均勻，加入含有2.60g、斯盤-80，60℃、30mL的大豆油，通過乳化機高速剪切乳化5 min，最后經3KGY的60Co-Y射線輻照滅菌，制成乳液型鹽酸頭孢噻呋注射劑。

1.3 鹽酸頭孢噻呋注射液穩定性試驗研究

1.3.1 影響因素試驗影響因素試驗是在劇烈條件下進行的，目的是了解影響穩定性的因素及可能的降解途徑和降解產物，為制劑工藝篩選、包裝材料和容器的選擇、貯存條件的確定等提供依據。將復配制成的鹽酸頭孢噻呋注射劑分別置于40℃、日照條件下10d，對樣品的性狀、有關物質、含量進行檢測，研究硫酸頭孢喹肟注射液穩定性。含量測定方法參照2010版獸藥典鹽酸頭孢噻呋注射液質量標準進行。

1.3.2 加速試驗加速試驗是在超常條件下進行的，目的是通過加快市售包裝中藥品的化學或物理變化速度來考察藥品穩定性，對藥品在運輸、保存過程中可能會遇到的短暫的超常條件下的穩定性進行模擬考察，并初步預測樣品在規定的貯存條件下的長期穩定性。將復配制成的鹽酸頭孢噻呋注射劑放置在30℃±2℃條件下進行6個月試驗。在試驗期間第1、3、6個月末取樣檢測考察指標。

1.3.3 長期穩定性試驗長期試驗是在上市藥品規定的貯存條件下進行，目的是考察藥品在運輸、保存、使用過程中的穩定性，能直接地反映藥品穩定性特征，是確定有效期和貯存條件的最終依據。將復配制成的鹽酸頭孢噻呋注射劑在25℃±2℃條件進行試驗，取樣時間點在第一年一般為每3個月末一次，第二年每6個月末一次。

1.4 性能測試

乳液粒徑：采用Winner2308C激光粒度儀測試鹽酸頭孢噻呋乳液粒徑。

1.5 體外抗菌活性試驗

瓊脂擴散法是通過將抗生素在預先培養特定實驗菌的瓊脂培養基上產生濃度梯度，實驗菌的繁殖被阻止于有效濃度范圍之內而形成圓形的透明帶即抑菌圈。根據抗生素濃度與抑菌圈直徑呈一定線性關系，比較供試藥物的抑菌活性。

1.5.1 菌懸液的制備在無菌條件下剪斷菌種保藏管，加入滅菌肉湯約1mL使菌粉溶解；取另一支滅菌試管將菌液吸入其中，然后倒入滅菌肉湯至10mL，37℃在生化培養箱中培養24h。

1.5.2 培養基的制備稱取33g瓊脂培養基加入蒸餾水1L溶解，在立式高壓滅菌鍋內0.11MPa滅菌20min。

1.5.3 供試藥品溶液制備鹽酸頭孢噻呋乳液、鹽酸頭孢噻呋混懸液、頭孢噻呋鈉凍干粉用50mL容量瓶配置成25mg/L的溶液。

1.5.4 檢測平板的制備在燒杯內將營養瓊脂培養基加熱使其完全溶解，完成后放入高壓滅菌鍋中，在0.11MPa下滅菌20min，然后冷至60℃左右，再用滅菌好的吸管吸取20mL培養基加入水平放置的各個培養皿內，待培養基凝固并干燥完全。為免其他細菌污染，此時的平板應立即用于抑菌活性的試驗。

1.5.5 指示菌茵懸液的涂布吸取菌懸液0.1mL滴在瓊脂培養基平板上，輕輕用滅菌后的玻棒將菌懸液涂布均勻。

1.5.6 加入供試液將平板水平放置，用鑷子將3只滅菌的牛津杯均勻地放入平板中，輕輕加壓至無空隙。在牛津杯中滴入各濃度的供試液200μL，注意不要溢出。

1.5.7 指示菌的培養將加好供試液的平板放入培養箱中，37℃恒溫培養36h。

1.5.8 抑菌圈直徑測量在平板上菌體生長過程中，供試液在瓊脂平板內梯度擴散阻止周圍菌體的繁殖，從而形成圓形的不長菌的透明帶即抑菌圈，用直尺測量抑菌圈直徑。

2 結果與討論

2.1 鹽酸頭孢噻呋注射液穩定性試驗研究

將復配制成的鹽酸頭孢噻呋乳液進行影響因素試驗、加速試驗、長期穩定性試驗，研究鹽酸頭孢噻呋乳液穩定性。結果（見表1、2、3）。通過影響因素試驗、加速試驗、長期穩定性試驗可以看出，鹽酸頭孢噻呋乳液具有良好的穩定性，其藥物含量受溫度的影響較大；隨著時間的增長，乳液外觀色澤稍加深，有關物質逐漸增加，但仍未超過標準規定的限度，加速試驗鹽酸頭孢噻呋含量97.15%、長期穩定性試驗鹽酸頭孢噻呋含量96.47%，符合注射液要求。

2.2 性能測試

2.2.1 粒徑分析通過Winner2308C激光粒度儀對鹽酸頭孢噻呋乳液進行粒徑測試，其結果（如圖1）。由圖1可知，鹽酸頭孢噻呋乳液分散均勻，平均粒徑0.137μm，粒徑分布在0.065～0.188μm，遠低于2010獸藥典注射液要求的15μm粒徑標準，具有較小的肌肉注射刺激性以及更好的耐受性。

2.3 體外抑菌實驗

在培養箱中37℃恒溫培養36h后，鹽酸頭孢噻呋乳液制劑A、鹽酸頭孢噻呋混懸液B、頭孢噻呋鈉凍干粉C對大腸桿菌菌株（E.coli）、金葡萄球菌菌株體外抑菌實驗，其結果（見表4、表5）。實驗中排除溶劑對抑菌作用的影響，隨著時間延長，細菌的不斷生長及抗生素代謝，抑菌圈會逐漸減小，抑菌圈較小得越慢，說明藥效持續的時間越長，在體外抗菌活性試驗中頭孢噻呋鈉凍干粉在短時間內對大腸桿菌體、金葡萄球菌具有較好的抑菌效果，而鹽酸頭孢噻呋乳液憑借粒徑小、半衰期長等優點抑菌能力較強，并且藥效持續時間明顯優于其他制劑，具有較好的效果。

3 總結

本文制備出具有粒徑小、半衰期長，肌肉注射刺激性小、動物注射耐受性好的鹽酸頭孢噻呋乳液，并通過瓊脂擴散法將鹽酸頭孢噻呋及其不同制劑進行體外抗菌活性試驗。結果表明鹽酸頭孢噻呋乳液制備方法簡單，不僅抗菌活性好而且藥效時間長，具有良好的發展前景。作者下一步將對鹽酸頭孢噻呋乳液在動物體內藥代動力學及生物利用度方面進行深入研究，以求達到最佳的治療效果。