某肉雞場新城疫和禽流感抗體監測與調查分析

何飛 付太銀 朱明霞

摘 ?要：為調查肉雞新城疫、禽流感H5亞型（Re-6株）和H9亞型的免疫效果，從山東省某肉雞場采集血樣120份，利用微量紅細胞凝集試驗（HI）進行抗體水平監測。結果表明：試驗雞ND的抗體水平在33d前維持在6個滴度以上、8個滴度以下，33d后多在8個滴度以上，有的超過10個滴度;H9在12d、19d大都在4～6之間，26d時有所升高，33d時迅速升高至9個滴度以上;H5在12d時為7、8個滴度，19～26d時下降至5～2個滴度之間，33d時個別雞只抗體水平有所增加。該結果為規模化肉雞場有效預防和控制這3種主要疫病提供了科學依據。

關鍵詞：肉雞;新城疫;禽流感H5亞型;禽流感H9亞型;抗體監測

中圖分類號：S858.312.4 ? ? 文獻標識碼：B ? ? 文章編號：1673-1085（2015）04-0036-04

肉雞呼吸道疾病屬多病因呼吸道病綜合征，常造成肉雞養殖的嚴重損失，死淘率可達30%以上，并造成發病雞生長遲緩、胴體降級或廢棄，而成為危害肉雞養殖業的重要疾病[1，2]。肉雞呼吸道病病因極為復雜[3～5]，然而眾多研究發現，對規模化肉雞養殖危害最大的還是新城疫和禽流感。Lewis等[6]研究發現在目前普遍采用疫苗免疫的情況下，ND在部分地區流行依然嚴重，且表現出新的流行病學特點，如高免雞群發病等。于康震等[7]對部分地區商品雞及養雞專業村禽流感血清學調查，發現H9亞型陽性雞群占禽流感陽性雞群總數的93.7%，證實禽流感、尤其是中等毒力以下H9亞型禽流感在中國的廣泛存在，是目前影響中國養禽業的主要禽流感病毒亞型，所以對肉雞而言，H9被稱為“萬病之源”。而H5亞型禽流感主要威脅肉種雞，所以在肉種雞往往要做好H5亞型的免疫，以保證商品肉雞有足夠的母源抗體。為更有效地控制這三種疾病對肉雞的威脅，本研究采用紅細胞凝集試驗和紅細胞凝集抑制試驗對某規模化肉雞場的120份血樣進行新城疫、H5和H9亞型禽流感抗體水平監測，分析抗體水平的消長規律，制定出一套科學的適合該肉雞場的免疫程序。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

1.1.1 ?儀器 ?96孔微量反應板、移液槍、恒溫箱。

1.1.2 ?試劑 ?①試驗試劑：阿氏液（紅細胞保存液）、PBS液、1%雞紅細胞懸液均自配;②生物制品：雞新城疫血凝抑制試驗抗原由青島易邦生物工程有限公司生產，批號為（20130301），禽流感病毒H5（Re-6株）和禽流感病毒H9亞型血凝抑制試驗抗原為哈爾濱維科生物技術開發公司生產，批號分別為2013002、2013002.

1.2 ?方法

1.2.1 ?樣品采集 ?試驗期內每周（第1、2、3、4、5周）分別從2個試驗舍（2號舍、4號舍）的前、中、后共挑選不同呼吸道癥狀的活雞12只，采集血樣，進行抗體監測，共采集血樣120份。

1.2.2 ?血樣的處理 ?將血液樣品2000～2500r/min離心15min，用移液槍吸取血清加入滅菌的0.5ml離心管，置-20℃冰箱保存。

1.2.3 ?雞紅細胞懸液的配制 ?用加有抗凝劑的注射器采集未免疫的健康公雞血液，用pH值7.2的0.01mol/l的PBS液洗滌3次，每次均以1000r/min離心10min，洗滌后用PBS液配成1%（V/V）的紅細胞懸液，4℃保存備用。

1.2.4 ?檢測方法 ?禽流感血凝抑制（HI），抗體效價的測定，參照GB/T18936-2003，新城疫血凝抑制（HI），抗體效價的測定，參照GB/T16550-2008。

1.2.5 ?該肉雞場的免疫程序 ?1日齡：新支二聯弱毒疫苗、傳支弱毒苗噴霧;法氏囊弱毒疫苗、新流二聯油苗頸部皮下注射;9日齡新支流三聯油苗頸部皮下注射;22日齡免新城疫弱毒苗飲水。

2 ?結果與分析

2.1 ?2號舍抗體監測結果 ?見圖1。

由圖1可知：①2號舍12～26d，ND抗體水平維持在6log2以上，8log2以下，26d后均在7log2以上，33日齡有個別達到9log2;②2號舍H9抗體水平12～26d間始終維持在6log2以上，26d后上升到10log2以上;③2號舍H5抗體水平由12d的8log2左右，一直下降到26d的4log2，33日齡又有所升高。

2.2 ?4號舍抗體監測結果 ?見圖2。

由圖2可知：①4號舍12d、19d和26dND抗體水平維持在6log2以上、8log2以下，而33d多數在8log2以上，有的達到10log2以上;②4號舍H9抗體水平12d到26d間始終維持在6log2以上，26d后上升到10log2以上;③4號舍H5抗體水平由12d的8log2左右，一直下降到26d的4log2，此后1周又上升到6log2。

2.3 ?2號舍、4號舍抗體比較 ?由圖1、圖2可知：①2號、4號舍ND抗體水平始終維持在6log2以上，8log2以下;②2號、4號舍H5抗體水平由12d的8log2左右，一直下降到26d的4log2，此后一周4號舍H5抗體水平又上升到6log2;③2號、4號舍H9抗體水平12～26日齡間始終維持在6log2以上，26日齡后均上升到10log2以上。

2.4 ?試驗舍死亡情況統計 ?見圖3。

由圖3可知：試驗期間2舍和4舍死亡率在26日齡前大體相等，27日齡后2號舍死亡率顯著上升。

3 ?討論與分析

3.1 ?2號舍和4號舍ND的抗體水平在33d時多在8個滴度，有的超過10個滴度，疫苗免疫該日齡一般不會超過8個滴度，所以懷疑有可能存在新城疫感染。

3.2 ?H9的抗體水平在12d、19d大都在4～6個滴度之間，26d時有所升高，33d時忽然迅速升高，大都高于9個滴度，懷疑是由于感染H9野毒所致，確切原因還有待于病原分離與鑒定。

3.3 ?H5的抗體水平在12d時為7、8個滴度，說明雛雞均具有很高的母源抗體，19～26d時下降至5～2個滴度之間，但33d時檢測有的雞只抗體水平有所增加，不能排除有H5感染的可能。

3.4 ?根據死亡情況統計可知：26d以前2個雞舍死亡趨勢和數目大致相當，同時符合肉雞生長期內死亡規律，但27d后2號舍死亡率急劇上升，應綜合各方面因素查找死亡誘因，以減少經濟損失。

4 ?結論

根據本次研究結果和實踐經驗，對規模化肉雞場而言，控制新城疫、H5和H9亞型禽流感，重點應落實在一個“防”字，在預防方面應著重做好以下幾個方面工作：

4.1 ?做好種雞的飼養管理和免疫預防，保證種雞和雞苗的健康。

4.2 ?做好孵化以及出苗的各項相關工作，防止雞苗在出殼后第一環境的感染。

4.3 ?做好肉雞場的各項飼養管理工作，保證場區清潔，做好疫病凈化和病雞隔離工作，確保場區內無這三種病原存在，確保所有進場的車輛、人員、物品都是安全的，確保攜有病原的人員和物品與雞群徹底隔開。

參考文獻：

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[2] ?蔡寶祥.雞多病因呼吸道病的流行動態[J].中國家禽，2010，02：1-7

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