降脂復肝膠囊質量標準研究

李彩東等

摘要：目的 建立降脂復肝膠囊的質量標準。方法 采用薄層色譜法對制劑中赤芍、丹參進行薄層定性鑒別。采用高效液相色譜法，Phenomenex C18色譜柱，以甲醇-0.1%磷酸水溶液（31∶69、75∶25）為流動相，流速1.0 mL/min，分別對制劑中芍藥苷和丹參酮ⅡA的含量進行分析測定。結果 薄層鑒別圖譜斑點清晰，陰性對照無干擾。芍藥苷和丹參酮ⅡA進樣量分別在0.448～4.48 μg和0.057 6～0.576 μg范圍內線性關系良好，相關系數分別為0.999 4、0.999 5，平均加樣回收率分別為99.93%（RSD=1.98%，n=9）、99.75%（RSD=1.70%，n=9）。結論 本試驗定性定量檢測方法準確、可靠、穩定、快速，重復性好，可用于降脂復肝膠囊的質量控制及評價。

關鍵詞：降脂復肝膠囊；質量標準；薄層色譜法；高效液相色譜法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.04.026

中圖分類號：R284.1 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2015）04-0094-04

Study on Quality Standard of Jiangzhi Fugan Capules LI Cai-dong， PAN Xin-bo， ZHANG Wei， WANG Xin （The Second Peoples Hospital of Lanzhou， Lanzhou 730046， China）

Abstract：Objective To establish the quality standard of Jiangzhi Fugan Capules. Methods TLC was used to the qualitative identification of Paeoniae Radix Rubra and Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma. The contents of Paeoniflorin and Tanshinone ⅡA were determined by HPLC. The HPLC separation was performed on Phenomenex C18 column （4.6 mm×250 mm， 5 μm）， with methanol- 0.1% phsophonic acid （31∶69， 75∶25） as mobile phase， and the flow rate was 1.0 mL/min. Results The results of TLC showed that relevant spots were clear without interference against the negative sample. The calibration curves for Paeoniflorin and Tanshinone ⅡA were found to be liner within the range of 0.448-4.48 μg， 0.057 6-0.576 μg， respectively. The correlation coefficients were 0.999 4 and 0.999 5， respectively. The average recoveries were 99.93% and 99.75%， with RSD of 1.98% （n=9） and 1.70% （n=9）， respectively. Conclusion The method is accurate， reliable， stable， rapid， and reproducible， and can be used for the quality control and evaluation of Jiangzhi Fugan Capules.

Key words：Jiangzhi Fugan Capules；quality standard；TLC；HPLC

降脂復肝膠囊由赤芍、丹參、山楂、制何首烏等9味中藥提取加工而成，具有疏肝健脾、降脂化瘀、活血軟堅等功效，臨床用于脂肪肝、高脂血癥的治療，為本院院內制劑。本研究對處方中赤芍、丹參進行薄層色譜鑒別，采用高效液相色譜法（HPLC）對處方中芍藥苷、丹參酮ⅡA進行含量測定，并對其進行方法學驗證，建立降脂復肝膠囊的質量控制方法，為該制劑的質量控制提供依據。

1 儀器與試藥

HPLC-20A高效液相色譜儀：PDA紫外檢測器（日本島津公司）；FA2004N型電子分析天平（上海精密科

通訊作者：潘新波，E-mail：sinpo_pan@163.com

學儀器有限公司）；超聲波提取器（濟寧天華超聲電子儀器有限公司，型號TH-100BQ）；恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市環宇科學儀器廠，型號HH-8）。

芍藥苷對照品（批號110736-201136，供含量測定用）、丹參酮ⅡA對照品（批號110766-200619，供含量測定用）、赤芍對照藥材（批號121093-200402）、丹參對照藥材（批號120923-201113），購于中國食品藥品檢定研究院；降脂復肝膠囊（批號120125、120222、120321、120425、120523）及缺赤芍、缺丹參陰性對照樣品，本院制劑室自制；硅膠G板，青島海洋化工廠；甲醇（色譜純），深圳西隴化工股份有限公司；磷酸（色譜純），天津市科密歐化學試劑有限公司；雙蒸水（自制），其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 定性鑒別

2.1.1 赤芍 取降脂復肝膠囊內容物2.0 g，加乙醇50 mL，超聲處理30 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加乙醇5 mL使溶解，作為供試品溶液。取赤芍對照藥材粉末0.5 g，同法制成對照藥材溶液。取缺赤芍的降脂復肝膠囊樣品2.0 g，按供試品溶液制備方法制備，作為赤芍陰性對照溶液。另稱取對照品芍藥苷適量，加乙醇制成2 mg/mL的對照品溶液。按薄層色譜法[2010年版《中華人民共和國藥典》（一部）附錄Ⅵ B]試驗，分別吸取上述溶液各5 μL，在同一硅膠G薄層板上點樣，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶8∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液顯色，105 ℃加熱使斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品和對照藥材色譜的相應位置上，出現相同顏色的斑點，且陰性對照無干擾[1]147。

2.1.2 丹參 取降脂復肝膠囊內容物2.0 g，加75%甲醇25 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，加鹽酸1 mL，用乙酸乙酯萃取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。取丹參藥材粉末0.5 g，同法制成對照藥材溶液。取不含丹參的降脂復肝膠囊樣品，按供試品溶液制備方法制備，作為丹參陰性對照溶液。按薄層色譜法[2010年版《中華人民共和國藥典》（一部）附錄Ⅵ B]試驗，分別吸取上述3種溶液各5 μL，于同一硅膠G薄層板上點樣，以甲苯-三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇-甲酸（2∶3∶8∶1∶1）為展開劑，展開，取出，揮干。噴以1%FeCl3乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰，置日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，且陰性對照無干擾。

2.2 芍藥苷含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Phenomenex C18柱（5 μm， 4.6 mm×250 mm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（31∶69）；檢測波長：230 nm；柱溫：30 ℃；流速1.0 mL/min；進樣量：10 μL[1]147，[2-3]。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品適量，精密稱定0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL溶解，稱定質量，超聲提取（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定質量，用50%甲醇補足減失的質量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）過濾，即得。

2.2.3 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品適量，置棕色容量瓶中，加甲醇配成濃度為224.0 μg/mL的對照品貯備液。

2.2.4 陰性對照溶液的制備 按處方比例分別稱取缺赤芍的其余藥味，按照制備工藝制成缺赤芍的陰性樣品。準確稱取該陰性樣品0.5 g，按“2.2.2”項下方法制備，即得。

2.2.5 專屬性試驗 分別吸取上述對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液，按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，結果顯示陰性對照無干擾。色譜圖見圖1。

2.2.6 線性關系考察 分別精密量取芍藥苷對照品貯備液2、6、8、10、14、20 μL，按上述條件進樣測定。以進樣量為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制標準線性回歸曲線，得回歸方程Y=1 829 569.687 5X-194 161.3，r=0.999 5。結果表明，芍藥苷的進樣量在0.448～4.48 μg范圍內線性良好。

2.2.7 精密度試驗 精密量取芍藥苷對照品溶液10 μL，連續進樣6次，芍藥苷色譜峰的峰面積RSD=0.75%，結果表明儀器精密度良好。

2.2.8 穩定性試驗 取同一份供試品溶液，于配制后0、4、8、12、24 h進樣測定，芍藥苷色譜峰的峰面積RSD=1.31%，結果表明在室溫條件下該供試品溶液24 h內穩定性良好。

2.2.9 重復性試驗 稱定6份同一批號的樣品，按“2.2.2”項下制備，精密吸取10 μL，按上述色譜條件進樣測定，芍藥苷的含量RSD=1.87%，結果表明該方法重復性良好。

2.2.10 加樣回收率試驗 精密稱定9份已知含量同一批號的樣品，每份0.2 g，平均分為3組，每組芍藥苷對照品的加入量分別相當于供試品中原有含量質量分數的80%、100%、120%，按“2.2.2”項下方法制成低、中、高濃度的溶液，每個濃度各測定3次，分別精密吸取10 μL，注入高效液相色譜儀，以外標法進行測定，結果見表1。

2.3 丹參酮ⅡA含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Phenomenex C18柱（5 μm， 4.6 mm×250 mm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（75∶25）；檢測波長：270 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：10 μL。

2.3.2 供試品溶液的制備 取本品適量，精密稱定0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL溶解，稱定質量，超聲提取（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）過濾，即得[1]70。

2.3.3 對照品溶液的制備 取丹參酮ⅡA對照品適量，精密稱定，置棕色容量瓶中，加甲醇配制成濃度為28.8 μg/mL的對照品貯備液。

2.3.4 陰性對照溶液的制備 按處方比例分別稱取缺丹參的其余藥味，按照制備工藝制成缺丹參的陰性樣品。準確稱取該陰性樣品0.5 g，按“2.3.2”項下方法制備，即得。

2.3.5 專屬性試驗 分別吸取上述對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液，按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，結果顯示丹參陰性對照無干擾。色譜圖見圖2。

2.3.6 線性關系考察 分別精密量取丹參酮ⅡA對照品貯備液2、4、8、12、16、20 μL，按上述條件進樣測定。以進樣量為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制線性回歸曲線，得回歸方程Y=7 212 091.080 7X+45 539.907 7，r=0.999 4，結果表明，丹參酮ⅡA的進樣量在0.057 6～0.576 μg范圍內與其峰面積的線性關系良好。

2.3.7 精密度試驗 精密量取丹參酮ⅡA對照品溶液各10 μL，連續進樣6次，色譜峰峰面積RSD=0.79%，結果表明儀器精密度良好。

2.3.8 穩定性試驗 精密吸取同一供試品溶液，于配制后0、4、8、12、24 h進樣測定，丹參酮ⅡA色譜峰峰面積RSD=0.87%，結果表明，在室溫條件下該供試品溶液24 h內穩定性良好。

2.3.9 重復性試驗 稱定6份同一批號的樣品，按“2.3.2”項下方法制備供試品樣品溶液，精密吸取10 μL，分別按上述樣品測定法進樣測定，丹參酮ⅡA含量RSD=2.43%，結果表明該方法重復性良好。

2.3.10 加樣回收率試驗 精密稱定9份已知含量同一批號的樣品，每份0.2 g，平均分為3組，每組分別精密加入相當于供試品中原有含量質量分數80%、100%、120%的丹參酮ⅡA對照品，按“2.3.2”項下方法制成低、中、高濃度的溶液，每個濃度各測定3次，分別精密吸取10 μL進樣，以外標法進行測定，結果見表3。

2.3.11 樣品含量測定 精密稱取5批降脂復肝膠囊樣品，每批3份，按照“2.3.2”項下方法制備供試品溶液并測定，結果見表4。

3 討論

本試驗中，赤芍的薄層鑒別參考藥典方法，得到重復性好、專屬性強、陰性無干擾的定性鑒別方法。丹參的薄層鑒別中，藥典采用硅膠GF254高效薄層板，但本試驗發現GF254板的熒光對丹參中某些成分的鑒別有干擾，故通過查閱文獻在藥典方法上進行多次改進，最終確定其鑒別方法為硅膠G薄層板，FeCl3乙醇溶液顯色，日光下檢視。結果顯示其專屬性強、陰性對照無干擾。

赤芍藥材及不同制劑中芍藥苷的含量測定方法已有報道[2-3]，通過參閱藥典和相關文獻[4-7]，本試驗對樣品的提取方法進行了方法學考察。分別考察了超聲、煎煮2種提取方式，及提取時間、溶劑對供試品中芍藥苷和丹參酮ⅡA含量的影響，結果顯示，芍藥苷和丹參酮ⅡA分別采用50%甲醇和100%甲醇超聲處理30 min，溶出較完全，為最佳提取方式。分別考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸水、乙腈-磷酸水作為流動相對樣品分離效果的影響，結果表明，以甲醇-0.1%磷酸水為流動相時，樣品色譜峰峰型、分離度良好。

本研究采用HPLC對降脂復肝膠囊中芍藥苷和丹參酮ⅡA進行了含量測定，方法學考察結果表明，在選定的色譜條件下，其他成分無干擾，系統適用性符合要求，所建立的含量測定方法簡便可行，精密度好，方法穩定，重復性好，能有效地對降脂復肝膠囊進行質量控制。

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（收稿日期：2014-08-20；編輯：陳靜）