2，3－二氨基萘衍生化－氣相色譜－質譜法測定血漿中的亞硝酸鹽含量＊

劉國杰， 申小愛， 劉俊亭

（1.中國醫科大學 公共基礎學院 化學教研室，遼寧 沈陽110122；2.中國醫科大學 法醫學院，遼寧 沈陽110122）

近年來，臨床醫學對體內亞硝酸鹽的研究日趨活躍.研究證實NO2－能和人、動物體中的二級胺或三級胺結合轉化成強致癌物質亞硝胺，從而誘發癌變［1，2］.此外，最新的研究證實，NO2－在一些動物疾病模型中具有細胞保護作用，它能夠抑制缺血和再灌注帶來的心肌損傷［3，4］，減少梗塞面積，恢復心室功能［5］等，在預防和治療心血管疾病中具有重大意義.在臨床醫學亞硝酸鹽的研究中，體液內NO2－含量的測定貫穿于實驗的始終，成為影響研究進展的關鍵所在.GC－MS法具有靈敏度高、分析速度快和鑒別能力強等特點，在生物樣品分析中占有重要地位.但由于NO2－是水溶性無機陰離子，必須經過衍生化轉換成極性小、揮發性強的物質，再進行GC－MS檢測.文獻方法中NO2－的衍生化試劑有苯、三甲氧基苯、甲苯［7，8］、PFB－Br［9～15］，這些方法普遍具有操作復雜、耗時長及易受干擾等特點，因此，研究一種快速準確地測定生物樣品中亞硝酸鹽含量的方法，在臨床醫學研究中具有實際應用價值.

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

亞硝酸鹽血漿標準溶液，普羅地芬（SKF525A）內標溶液，2，3－二氨基萘溶液，甲醇，丙酮，異丙醇，乙酸乙酯，磷酸二氫鈉，磷酸氫鈉，碳酸銨.

Shimadzu GC－MS－QP2010，Rtx－5（10m×0.18mm×0.2μm），pH 測定儀，旋渦混合器，精密電子天平，TDZ4－WS臺式離心機.

1.2 分析方法

取0.5mL血漿于試管中，加入pH＝3的磷酸緩沖溶液1mL，10μL 2，3－DAN溶液，60℃水浴中加熱10min，冷卻后，加入內標；加入碳酸銨調pH至8.5，2mL乙酸乙酯萃取，震蕩1min，離心；……