兩種檢測方法在HbsAg低濃度標本檢測結果的分析

劉鵬1.焦作市第二人民醫院檢驗科，河南焦作　454000；2.河南理工大學第一附屬醫院檢驗科，河南焦作　454000

兩種檢測方法在HbsAg低濃度標本檢測結果的分析

劉鵬1，2
1.焦作市第二人民醫院檢驗科，河南焦作454000；2.河南理工大學第一附屬醫院檢驗科，河南焦作454000

[摘要]目的對于化學發光磁微粒子免疫分析法（CMIA）和酶聯免疫吸附法（ELISA）在乙肝表面抗原檢測中低濃度標本結果對比分析。方法先用時間分辨免疫熒光法（TRFIA）檢測并確定HbsAg低濃度標本（0.5～1.0 ng/mL）236份和HbsAg陰性標本（＜0.5 ng/mL）100份。分別使用CMIA和ELISA進行檢測，對檢測結果進行對比分析。結果ELISA法檢測出陽性標本為195例，陽性率為82.6%。CMIA法檢測出陽性標本為232例，陽性率為98.3%。差異有統計學意義（χ2=33.62，P<0.05)。ELISA法敏感度為84.1%，CMIA法敏感度為98.7%。差異具有統計學意義（χ2=30.21，P<0.05）ELISA法特異性為95%，CMIA特異性為97%。其差異無統計學意義（χ2=0.8353，P>0.05）。結論CMIA法敏感度和特異性均高于ELISA法，建議在HbsAg的檢測尤其是低濃度標本的檢測中使用高敏感度與高特異性的方法。

[關鍵詞]低濃度；乙肝病毒表面抗原；化學發光磁微粒子免疫分析法；酶聯免疫吸附法

我國是乙肝病毒性肝炎的高發區，約有超過10%乙肝病毒攜帶者。而乙肝表面抗原（HbsAg）是乙肝病毒感染（HBV）檢測中最重要的依據。長期以來，全國各個醫院的檢驗科均開展了乙肝的檢測。酶聯免疫吸附法（ELISA）和化學發光磁微粒子免疫分析法（CMIA）是比較常用的檢測方法。但是由于檢測方法的敏感度和特異性的差別，導致在試驗中經常出現對HbsAg低濃度標本檢測結果各異。為此，該研究使用了ELISA和CMIA兩種檢測方法對整群選取2012年4月—2014年7月期間236例HbsAg低濃度陽性標本和100例陰性標本做了比較和分析，并探討其臨床價值?，F將結果報告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

整群選取236例低濃度陽性標本均來自該院2012年4月—2014年7月門診與住院患者。其中男性91例，女性45例，年齡15～86歲（36.47±6.2)。100例陰性標本是同期的門診與住院患者，其中男性64例，女性36例,年齡16～72歲（χ2=44.48±15.2)。

1.2儀器與試劑

ELISA采用的是上?？迫A生物工程股份有限公司生產的試劑，CMIA法使用的是鄭州安圖生物工程有限公司生產的化學發光磁微粒子A2000儀器及其配套試劑，TRFIA法使用的是蘇州新波生物技術有限公司生產SYM—BIO時間分辨熒光分析儀及其配套試劑。

1.3首先使用TRFIA法對236例標本HbsAg進行濃度測定

經過檢測，236例標本的HbsAg濃度確定為0.5～1.0 ng/mL。再對100例標本檢測濃度確定為0.5 ng/mL以下。根據TRFIA試劑說明書HbsAg檢測濃度判定>0.5 ng/mL為陽性，＜0.5 ng/mL為陰性。然后使用ELISA法和CMIA法對236例低濃度標本和100例陰性標本進行檢測。按照試劑有關說明書，《ELISA法S/CO值》1.0為陽性，S/CO值﹤1.0為陰性。《CMIA法檢測值》0.15 ng/mL為陽性，﹤0.15 ng/mL陰性。兩者結果不一致的標本，最后使用TRFIA法進行復檢。

1.4統計方法

數據使用SPSS11.5軟件進行統計學分析，計數資料進行χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1在此次實驗中，使用ELISA法和CMIA法同時對236例標本和100例陰性標本進行檢測

ELISA法檢測出陽性標本為195例，陽性率為82.6%。CMIA法檢測出陽性標本為232例，陽性率為98.3%。差異有統計學意義（χ2=33.62，P<0.05)。ELISA法敏感度為84.1%，CMIA法敏感度為98.7%。其差異具有統計學意義（χ2=30.21，P<0.05）ELISA法特異性為95%，CMIA特異性為97%。其差異無統計學意義（χ2=0.8353，P>0.05）。正因為兩種檢測方法的敏感性的差距，導致了結果的顯著差異，見表1、表2。

表1　ELISA法與TRFIA檢測結果相比較

表2　CMIA法與TRFIA檢測結果相比較

3　討論

該研究中，首先使用TRFIA法作為標準的檢測對照方法，236例HbsAg陽性標本濃度和100例HbsAg陰性標本濃度是使用TRFIA方法檢測的。TRFIA法是以鑭系元素為示蹤物，標記抗原或抗體，用時間分辨技術測量的方法。具有靈敏度高、特異性強、穩定性好等特點，非常適合對標本的超微量測定。根據有關資料，TRFIA法對HbsAg靈敏度可達到0.05 ng/mL以下[1]，保障了結果的可靠性、準確性和精確性。236例HbsAg標本經TRFIA確定濃度為0.5～1.0 ng/mL。在使用兩種方法做檢測對比實驗中，CMIA法陽性率明顯高于ELISA法（98.3%/82.3%）。CMTA法敏感度與特異性也高于ELISA法（98.7%/84.1%）（97%/95%）。而ELISA法在該試驗中漏檢率較高，其漏檢率為17%（41/236)。因此，ELISA法與CMTA法在檢測HbsAg低濃度標本中，具有明顯的差異。

乙肝表面抗原（HbsAg）是醫院各實驗室最常見的檢測項目，其陽性是人體感染HBV最重要的標志。它具有免疫原性，可刺激人體產生相應的抗體[2]。而對一些HbsAg低濃度的標本使用不同的方法學檢測，結果并不一致，導致臨床診斷無所適從。而近年有關報道認為，部分急性或慢性乙肝患者體內的HbsAg自然轉陰和經過抗病毒治療后轉陰后，仍然在其血清中檢測出低濃度的HbsAg。成為長期、穩定的低水平病毒感染者,即HBV隱匿型感染[3]。因此，低濃度HbsAg的檢出對于臨床診斷治療和流行病學的研究都是重要的依據。

現在，各實驗室多數使用酶聯免疫吸附法（ELISA）進行檢測。而ELISA具有操作簡便、成本低廉、可靠性較高、適合批量檢測等優點，其敏感性可達0.7 ng/mL。但是由于方法學的局限性，容易受外界因素的影響。主要影響因素是：①膽紅素較高、自身免疫性疾病、類風濕性因子等內源性因素。②標本所用的抗凝劑和試劑包被抗體的質量等。③變異株所產生的干擾因素。④由于HbsAg含量過高，易產生后帶現象。⑤在操作中，由于人為因素使溫育時間不夠、加樣不當等原因而影響結果的準確性。根據有關資料，使用ELISA法檢測低濃度HbsAg，容易產生鉤狀效應和靈敏度低下而導致假陰性[4]。在該試驗中，ELISA法存在著一定的漏檢率，符合以上觀點。

隨著醫學檢驗技術的發展，近年來化學發光磁微粒子免疫分析法（CMIA）已經開始在實驗室廣泛使用，其特點也已經得到了印證。與傳統的ELISA法相比較，它具有操作簡便快速、高靈敏度、強特異性、試劑批間差異較小、穩定等特點。其線性范圍高出ELISA法3～4個數量級，是免疫分析技術的發展方向[5]。其原理是使用化學發光或生物發光體系與免疫反應相結合，用于檢測微量的抗原或抗體。根據有關資料，化學發光免疫分析技術檢測HbsAg的靈敏度可達到0.064 ng/mL[6]。從方法學的角度來看，CMIA法對于監測HBV感染進程與復制狀態以及對于抗病毒治療治療效果的評價都有重要的意義[7]。

在該試驗中，CMIA法在HbsAg低值標本檢測中敏感性與特異性均高于ELISA法。因此在日常的工作中，檢測HbsAg標本尤其是低值標本中，CMIA法優于ELISA法。另外，CMIA法由于是定量檢測，因此克服了使用定性方法對灰區結果的判斷困難。對灰區結果能夠做出明確客觀的評價和判斷[8]。HBsAg定量檢測不僅對于判斷感染HBV活躍度，有著重要的意義，也可預測患者治療過程中的的應答情況。進而指導患者的個體化治療，提高治療效果。

建議各實驗室如果有條件，盡可能使用CMIA法替代ELISA法，以保證檢測結果的準確性。

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Two Kinds of Detection Methods Analyzing the Results of HbsAg low Concentration Samples

LIU Peng1，2
1.Department of laboratory, Jiaozuo Second People's Hospital, Jiaozuo, Henan Province, 454000 China; 2.Department of laboratory, the First Affiliated Hospital of Henan Polytechnic University, Jiaozuo, Henan Province, 454000 China

[Abstract]Objective To compare and analysis the results for chemiluminescent magnetic micro particle immunoassay (CMIA) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in low concentration samples of hepatitis B surface antigen detection. Methods HbsAg low concentration (0.5～1.0 ng/mL) 236 and HbsAg negative samples (0.5 ng/mL) 100 were detected by time resolved im munofluorescence assay (TRFIA). CMIA and ELISA were used to detect and compare the results. Results 195 positive samples were detected by ELISA, the positive rate was 82.6%. 232 cases positive samples were detected by CMIA method, the positive rate was 98.3%. The two groups was statistically significant (χ2=33.62,P<0.05). The sensitivity of ELISA was 84.1%, and the sensitivity of CMIA was 98.7%, the difference was statistically significant (χ2=30.21, P<0.05) ELISA, the specificity was 95%, the specificity of CMIA was 97%. The difference was not statistically significant (χ2=0.8353, P>0.05). Conclusion The sensitivity and specificity of MIA were higher than ELISA, and it was suggested that the method of high sensitivity and specificity in the detection of HbsAg was used, especially in low concentration samples.

[Key words]Low concentration; Hepatitis b virus surface antigen; Chemiluminescence magnetic particles immune analysis; Enzyme-linked immunosorbent method

[中圖分類號]R446.6

[文獻標識碼]A

[文章編號]1674-0742（2015）07（c）－0188-03

[作者簡介]劉鵬（1973-），男，河南焦作人，本科，主管檢驗師，研究方向：免疫學檢驗專業。

收稿日期：（2015-04-25）