G試驗和GM試驗對兒童惡性血液病侵襲性真菌感染的診斷價值

李泰階，李萌，郭世輝，梁宏潔，李山，秦雪，劉志明

(廣西醫科大學第一附屬醫院，南寧530021)

惡性血液病患兒由于長期或反復接受化療、廣譜抗生素、糖皮質激素、免疫抑制劑以及造血干細胞移植等治療，免疫功能損傷加重，侵襲性真菌感染(IFI)的發生率急劇升高。目前臨床確診IFI的傳統方法耗時長、敏感度低，難以實現IFI的早期診斷。目前，(1，3)-β-D-葡聚糖檢測(G 試驗)和半乳甘露聚糖檢測(GM試驗)在國內外已廣泛用于IFI的診斷，且被證實效果良好。為此，本研究就G試驗和GM試驗單獨和聯合診斷兒童血液病患者IFI的價值進行了探討。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇廣西醫科大學第一附屬醫院2013年4月～2014年5月臨床懷疑IFI的住院患兒246例，男165例、女 81例，年齡 1～14(5.43±3.64)歲。其中，急性淋巴細胞性白血病134例，急性髓性白血病58例，地中海貧血31例，淋巴瘤5例，噬血細胞綜合征6例，再生障礙性貧血3例，其他12例。根據歐洲癌癥研究和治療組織/IFI協作組和美國國立變態反應和感染病研究院真菌病研究組共識組修訂的侵襲性真菌病診斷標準［1］將患兒分為兩組:感染組27例，男18例、女9例，年齡(5.00±2.83)歲;非感染組219例，男147例、女72例，年齡(5.48±3.74)歲。

1.2 方法

1.2.1 G試驗 MB-80微生物動態快速檢測系統、冰浴漕、T01智能恒溫儀及GKT-1M動態真菌檢測試劑盒均采用北京金山川科技發展有限公司產品。G試驗嚴格按照儀器和試劑盒說明書操作，具體步驟如下:將待測血清0.1 mL加入0.9 mL的樣品處理液中，混勻后70℃孵育10 min，取出后立刻放入冷卻槽中冷卻5 min;然后取0.2 mL混合液直接加入酶反應主試劑中，溶解后使用加樣器轉移至9 mm×65 mm標準無熱源平底試管中;插入MB-80微生物動態快速檢測系統中進行反應，反應結束后儀器自動計算出待測血清中(1，3)-β-D-葡聚糖的含量。

1.2.2 GM試驗 ELISA檢測血清半乳甘露聚糖試劑盒為美國BIO-RAD公司產品。GM試驗嚴格按照試劑盒說明書操作，具體步驟如下:取待測血清300 μL 加入100 μL 處理液混勻，100 ℃ 水浴3 min。10 000 g離心10 min，取上清備用。ELISA檢測孔每孔加入50 μL結合液、50 μL處理后上清液，37℃孵育90 min。清洗后，每孔加入375 μL清洗液，吸干;每孔加入顯色液200 μL，室溫避光孵育30 min后，每孔加入終止液100 μL;在波長450 nm波長酶標儀下讀數，檢測血清半乳甘露聚糖含量。

1.2.3 統計學方法 應用SPSS13.0統計軟件，按照廠家推薦標準，G試驗以(1，3)-β-D-葡聚糖100 pg/mL為診斷界值;GM試驗以半乳甘露糖0.5 pg/mL為診斷界值。以感染組、非感染組、陽性及陰性作四格表資料分析G試驗和GM試驗的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值的差異。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 G試驗結果 感染組G試驗陽性24例，陽性率為88.89%;G試驗陰性3例，假陰性率11.11%。非感染組G試驗陽性18例，假陽性率為8.22%;G試驗陰性201例，陰性率為91.78%。見表1。G試驗以100 pg/mL為臨界值時，其診斷IFI敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值見表2。

2.2 GM試驗結果 感染組GM試驗陽性18例，陽性率為66.67%;GM試驗陰性9例，假陰性率為33.33% 。非感染組GM試驗陽性63例，假陽性率為28.77%;GM試驗陰性156例，陰性率為71.23%。見表1。GM試驗以0.5 pg/mL為臨界值時其診斷IFI敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值見表2。

2.3 G試驗和GM試驗并聯檢測結果 即G試驗或GM試驗其中一項試驗為陽性時判斷為陽性病例。感染組陽性27例，陽性率為100%;陰性0例，假陰性率0。非感染組陽性75例，假陽性率為34.25%;陰性144例，陰性率65.75%。其診斷IFI敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值見表2。

2.4 G試驗和GM試驗串聯檢測結果 即G試驗或GM試驗其中一項試驗為陰性時判斷為陰性病例。感染組陽性15例，陽性率為55.56%;陰性12例，假陰性率為44.44%。非感染組陽性6例，假陽性率為2.74%;陰性213例，陰性率97.26%。其IFI敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值見表2。

表1 兩組G試驗和GM試驗結果(例)

表2 G試驗和GM試驗單獨和聯合運用診斷IFI的效能(%)

3 討論

血液病患兒在治療中因化療藥物的影響，骨髓長時間處于抑制狀態，此時機體免疫力低，極易發生IFI。IFI的早期發現及早期診斷有利于原發疾病的治療，并能進一步改善預后。(1，3)-β-D-葡聚糖是真菌細胞壁的組成成分，它廣泛分布于除接合菌及隱球菌以外的真菌細胞壁中，包括念珠菌、曲霉菌、枝頂孢屬、毛孢子菌、鐮刀菌、組織胞質菌等。當人體吞噬細胞吞噬真菌后，能持續釋放(1，3)-β-D-葡聚糖，使血液和體液中含量增高;而淺部真菌感染或真菌定植時，(1，3)-β-D-葡聚糖極少釋放入血液中，所以G試驗可應用于深部真菌感染的輔助診斷［2］。本研究結果顯示兒童血液病患者G試驗的敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值分別為88.89%、91.78%、57.14%和98.53%;提示G試驗用于診斷IFI具有較好的臨床價值。這一結果與國外報道和國內外學者研究工作［3，4］基本吻合。G試驗影響因素較多，下列情況可出現假陽性:如使用纖維素膜進行血液透析、靜脈輸注血液制品、鏈球菌菌血癥等。本研究中，非感染組有18例G試驗出現假陽性，其中15例患兒有使用血液制品輸注史，包括5例患兒輸注血小板，4例患兒輸注去白紅細胞，6例患兒同時輸注去白紅細胞和血小板，提示非感染組假陽性可能與血液制品的輸注有關。

半乳甘露聚糖是曲霉菌細胞壁上的多聚抗原，曲霉菌感染患者出現臨床癥狀或影像學檢查異常前數天，其體內循環的半乳甘露聚糖即可呈陽性反應［5］。本研究結果顯示兒童血液病患者GM試驗的敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值分別為66.67%、71.23%、22.22%和94.55%，該結果與國內研究報道［6］基本相符。GM試驗影響因素較多，下列情況可出現假陽性:如使用半合成青霉素類尤其是哌拉西林/他唑巴坦［7］、食用含有半乳甘露聚糖的牛奶等高蛋白食品或污染的大米等。本研究中，非感染組有63例GM試驗出現假陽性，其中59例患兒有抗生素使用史，包括28例患兒使用哌拉西林/他唑巴坦。

G試驗和GM試驗檢測的物質不同，原理不同，代謝規律存在差異，影響因素復雜，二者不能相互代替。本研究結果顯示，G試驗和GM試驗并聯分析的敏感性為100%、特異性為65.75%、陽性預測值為26.47%、陰性預測值為100%，串聯分析敏感性為55.56%、特異性為97.26%、陽性預測值為71.43%、陰性預測值為94.67%。G試驗和GM試驗并聯分析時靈敏性和陰性預測值高，而串聯分析時特異性、陽性預測值較高。在日常工作中，可以通過對G試驗和GM試驗同時進行并聯分析和串聯分析，提高兒童血液病患者IFI診斷的效能。總之，G試驗聯合GM試驗診斷IFI具有早期、快速、敏感性和特異性高的特點，是診斷IFI的安全、高效的方法。

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［4］Theel ES，Jespersen DJ，Iqbal S，et al.Detection of(1，3)-beta-D-glucan in bronchoalveolar lavage and serum sampl collected from immunocompromised hosts［J］.Mycopathologia，2013，175(1-2):33-41.

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［7］Sulahian A，Porcher R，Bergeron A，et al.Use and limits of(1-3)-beta-d-glucan assay(Fungitell)，compared to galactomannan determination(Platelia Aspergillus)，for diagnosis of invasive aspergillosis［J］.J Clin Microbiol，2014，52(7):2328-2333.