TNF－α 對卵泡內膜細胞睪酮分泌及細胞增殖的影響

吳海明 (廣東省惠州市第二婦幼保健院，廣東 惠州 516001)

多囊卵巢綜合癥(PCOS)是一種發病機理尚不清楚的復雜性全身性內分泌神經代謝機制失控癥候群，以性腺軸失調為主要癥狀，一般認為引起該病癥發生的原因包括遺傳因素、胰島素抵抗、下丘腦神經內分泌功能異常、腎上腺功能出現亢進等因素，但因上述任一學說均無法對PCOS 病理變化及臨床表現進行全面解釋，該病癥仍是婦科內分泌領域的難點和研究熱點［1－2］。部分研究認為，PCOS 的發病原因可能類似動脈粥樣硬化以及糖尿病等炎性反應性疾病，其發病原因與白細胞介素－6(IL－6)、腫瘤壞死因子－α(TNF－α)以及C－反應蛋白(CRP)等炎性反應因子的高水平表達有關［3－4］，為探討PCOS 發病機制與炎性反應因子TNF－α 之間的關系，在此以豬卵泡內膜細胞為對象進行研究，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 儀器與試劑:本研究所用主要儀器包括γ 放射免疫計數器、流式細胞儀、倒置熒光顯微鏡以及二氧化碳細胞培養箱等，型號分別為安徽合肥中國科技大學中佳公司Gc－91、BDFACSCaibur、Nikon Eclipse TE2000－U 以及HEPA CLASS 100。所用試劑及試劑盒主要包括睪酮放射免疫測定試劑盒，由北京北方生物技術研究所生產;36%乙酸溶液，來自上海化學試劑公司;胎牛血清(FBS，杭州四季青);CFDA SE 細胞增殖與示蹤檢測試劑盒，來自碧云天生物技術研究所;還包括胰蛋白酶(Sigma)，透明質酸酶(Sigma)，膠原酶Ⅱ(TBD)，DMEM/F12［1∶1培養液(Hyclone)］以及豬重組TNF－α(prospec)。

1.2 方法:取新鮮豬卵巢放置于內含雙抗的冰生理鹽水中保存2 h，之后進行試驗，試驗前采用生理鹽水對卵巢進行反復沖洗，于平皿中選取直徑5 mm 左右的健康卵泡，并采用顯微解剖剪于解剖顯微鏡下將其對半剪開以流出卵泡液。……