鮮馬奶粉的體內抗氧化活性*

古麗巴哈爾·卡吾力，高曉黎，常占瑛，謝湘云，王玲

(新疆醫科大學藥學院，新疆烏魯木齊，830011)

馬奶含有的營養素能迅速溶解在水中，呈均勻的乳膠狀，容易被人體消化吸收。目前馬奶的研究以酸馬奶對心血管疾病、神經性疾病、消化系統疾病、肺結核及肺氣腫的治療為主。但鮮馬奶粉保健功能鮮見報道。近幾年人們保健意識的增強以及特色乳產品的上市使得人們逐漸認識到馬奶的醫學價值。馬奶中含有的多種抗體具有增強人體對抗細菌和病毒的作用。在營養結構上，馬奶是與母乳最接近的天然飲品，天天喝能延年益壽。因而，經常建議讓早產兒喝馬奶，以增強其免疫力。大約在20世紀90年代，我國逐步開展馬奶產品的開發與利用。

利用馬奶可開發馬奶酒、酸馬奶、馬奶啤酒、馬奶露、馬奶粉等產品，但一致認為馬奶具有高乳糖的特點，適宜于生產發酵乳制品。因此產品僅以傳統發酵酸馬奶為主。通過噴霧干燥方法制備的鮮馬奶粉，其外觀良好、極易溶解、性質穩定、具有濃郁的奶香味、使用方便。解決了鮮馬奶易發酵酸敗，儲存時間短，獲取困難等問題。

本研究通過采用皮下注射D-半乳糖建立小鼠氧化損傷模型，測定小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)等抗氧化酶系統，研究鮮馬奶粉抗氧化作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

清潔級昆明小鼠72只，清潔級，18～22 g左右，雌雄各半，購自新疆醫科大學實驗動物中心，許可證號:SCXK(新)2003－001。

鮮馬奶粉，新疆特豐藥業有限公司提供;超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)檢測試劑盒，南京建成生物工程有限公司生產;D-半乳糖，Sigma公司;其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設備

UV-9100型紫外分光光度計，北京萊伯泰科儀器有限公司;實驗室小型噴霧干燥機，日本東京理化器械株式會，FDU-2100;旋轉蒸發儀，上海愛朗儀器有限公司，EYELA SB-1000型。

1.3 實驗方法

1.3.1 動物分組及給藥

小鼠飼養溫度18～26℃，相對濕度45% ～65%，自由采食，飼養一周后根據體重將小鼠隨機分為6組:空白對照組，模型對照組、陽性對照組，鮮馬奶粉高劑量組、鮮馬奶粉中劑量、鮮馬奶粉低劑量組，每組12只。除了空白組外，其他組每日腹腔注射D-半乳糖80 mg/kg，空白組注射同劑量的生理鹽水，為期15 d。從第16天開始，注射D-半乳糖的同時，陽性對照組每日灌胃1 g/kg的Vc，3個鮮馬奶粉組灌胃120、80、40 mg/kg的鮮馬奶粉進行干預，45 d后處死動物，測定生化指標。干預期間每10 d稱重。

1.3.2 測試樣品的準備

于末次造模給藥結束24 h后，稱量小鼠體重，眼眶取血，脫臼處死小鼠取脾臟、肝臟。血漿在40℃放置30 min、3 000 r/min進行離心，分離血清，備用。脾臟、肝臟，稱取0.1 g，按照質量與體積比1∶9比例加入0.9%生理鹽水，冰浴條件下，機械勻漿，制成10%的勻漿液，2 500～3 000 r/min，取上清液備用。按照南京建成測試試劑盒黃嘌呤氧化酶(XOD)、髓過氧化物酶(MPO)、蛋白質(考馬斯亮藍染色法)、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)的說明書要求分別測定血清和組織中的上述指標活力和含量。

1.4 數據處理

2 結果與分析

2.1 不同處理組小鼠體重的影響

不同給藥組給藥在給藥期間測定小鼠體重，其變化見表1。表1顯示，在給藥45 d期間，前10 d體重變化不明顯，從第20天開始除了模型組小鼠體重有所減少，其余組小鼠體重有逐漸增加趨勢。模型組與其他5組小鼠體重對比有顯著性差異，但5組彼此之間無顯著性差異。說明氧化損傷對小鼠體重變化有一定程度的影響，鮮馬奶粉灌胃有益于氧化損傷小鼠恢復。

表1 不同處理組小鼠體重的變化(±s，n=12)Table 1 In the different groups of mice weight(±s，n=12)

表1 不同處理組小鼠體重的變化(±s，n=12)Table 1 In the different groups of mice weight(±s，n=12)

注:“* ”，與模型組相比 P＜0.05。

組別 劑量體重變化/g 0天 10天 20天 30天 40天 45天空白對照組 0 19.92±0.23 21.11±1.23 24.62±0.70 27.12±1.06 33.22±1.46 39.22±0.76*模型組 0 20.71±0.24 19.91±1.03 19.12±0.99 18.81±1.08 18.18±1.06 17.92±1.23*陽性對照組 1g/kg 19.56±0.68 22.94±1.31 23.74±1.06* 28.42±0.98* 33.57±1.58* 41.13±1.56*馬奶粉高劑量組 120mg/kg 20.84±0.63 23.56±1.26 26.23±1.03* 31.21±1.23* 36.19±1.47* 43.14±1.66*馬奶粉中劑量組 80mg/kg 20.63±0.75 23.03±0.98 24.94±1.06* 30.31±1.25* 34.65±0.79* 42.35±1.54*馬奶粉低劑量組 40mg/kg 20.21±0.86 23.15±0.96 24.57±1.35* 31.05±0.96* 36.14±1.69* 42.44±1.63*

2.2 不同處理組對小鼠血清中各抗氧化指標的影響

不同處理組對小鼠血清抗氧化指標的影響見表2。除了空白對照組外，其余5組皮下注射D-半乳糖后血清中 NO、MDA、NOS、MPO、XOD 量明顯增加，而GSH、SOD的量明顯減少，說明造模成功。從表2可以看出，模型組與其他組相比具有顯著性差異(P＜0.05)，即陽性組和各給藥組血清中 NO、MDA、NOS、MPO、XOD量減少，GSH、SOD的量明顯增加，并且各實驗組之間也有顯著性差異，具有一定的濃度依賴性。僅空白對照組與鮮馬奶粉低劑量組之間無顯著性差異(P＞0.05)，量較低時其抗氧化活性不明顯。說明鮮馬奶粉在一定濃度范圍內具有一定抗氧化活性。

2.3 不同處理組對小鼠肝臟及脾臟中各抗氧化指標的影響

不同處理組對小鼠肝臟及脾臟中抗氧化測定指標的影響見表3、表4。從表3、表4可以看出，不同處理方法對氧化損傷小鼠的保護有不同程度的改善。不同劑量鮮馬奶粉對氧化損傷小鼠具有不同程度的保護作用，并且有一定濃度依賴性，與模型組、陽性對照組及空白對照組對比具有顯著性差異(P＜0.01)。其中鮮馬奶粉高劑量組抗氧化活性大于陽性對照組，差異具有顯著性(P＜0.01)。鮮馬奶粉低劑量組與陽性組對比無顯著性差異(P＞0.05)，但與模型組有顯著性差異(P ＜0.05)。其中 NO、MDA、MPO、XOD、TNOS、INOS明顯減少，而GSH、SOD明顯增加，并差異顯著。

3 結論

機體處于缺氧狀態時，機體內半乳糖濃度升高，在醛糖還原酶作用下，還原成半乳糖醇，破壞機體抗氧化防御系統，同時在半乳糖被還原成半乳糖醇的過程中也產生超氧陰離子，過氧化物脂質增加，出現衰老。小鼠皮下注射D-半乳糖后血清及組織當中NO、MDA、NOS、MPO、XOD 量明顯增加，而 GSH、SOD 的量明顯減少，說明動物氧化損傷模型成立。灌胃給予45天鮮馬奶粉后機體開始恢復，抗氧化測定指標產生明顯變化［5－7］。

表2 不同處理組對小鼠血清抗氧化測定指標的影響(，n=12)Table 2 Different treatment group effect on the determination of serum antioxidant indexes in mice(，n=12)

表2 不同處理組對小鼠血清抗氧化測定指標的影響(，n=12)Table 2 Different treatment group effect on the determination of serum antioxidant indexes in mice(，n=12)

注:“＊＊”，與模型組對比P＜0.01;“▲”，與空白組對比P＜0.05。

組別血清超氧化物歧化酶(SOD)/(U·L －1)一氧化氮(NO)/(U·L －1)黃嘌呤氧化酶(XOD)/(U·L －1)髓過氧化物酶(MPO)/(U·L－1)一氧化氮合酶(INOS)/(U·mL－1)一氧化氮合酶(TNOS)/(U·mL－1)丙二醛(MDA)/(mol·mL －1)谷胱甘肽(GSH)/(mg·mL －1)空白對照組 73.33±0.134 61.31±2.58 29.76±1.12 30.36±1.71*21.34±0.93 11.40±1.57 21.14±0.44 3.35±0.46模型組 41.24±1.24 98.38±4.17 43.14±.1.33 42.78±1.16 36.45±5.12 26.38±2.49 39.94±1.20 1.69±0.88陽性對照組 115.65±2.36＊＊▲＊ 18.84±3.52＊＊▲ 22.53±0.82＊＊▲ 20.56±1.72＊＊▲ 6.03±2.34＊＊▲ 4.64±1.63＊＊▲ 13.93±1.18＊＊▲ 12.31±1.34＊＊▲馬奶粉高劑量 126.99±3.24＊＊▲ 21.08±3.82＊＊▲ 20.36±0.78＊＊▲ 24.04±1.02＊＊▲ 13.34±1.30＊＊▲ 5.31±1.25＊＊▲ 4.16±1.58＊＊▲ 11.91±2.10＊＊▲馬奶粉中劑量 106.36±2.33＊＊▲ 40.52±6.84＊＊▲ 26.96±0.92＊＊▲ 27.55±1.48＊＊▲ 20.70±1.69＊▲＊ 11.28±1.76＊＊▲ 7.21±1.01＊＊▲ 7.08±0.33＊＊▲馬奶粉低劑量 89.66±1.65＊＊▲ 68.03±1.09＊＊▲ 25.41±0.36＊＊▲ 34.38±1.94＊＊▲ 25.97±0.85＊＊▲ 19.64±2.23＊＊▲ 20.53±6.35＊＊▲ 5.01±0.46＊＊▲

表3 不同處理對小鼠肝臟抗氧化測定指標的影響(，n=12)Table 3 Different treatment effects on mice liver antioxidant measurement indicators(，n=12)

表3 不同處理對小鼠肝臟抗氧化測定指標的影響(，n=12)Table 3 Different treatment effects on mice liver antioxidant measurement indicators(，n=12)

注:“＊＊”，與模型組對比P＜0.01;“*”與模型組對比P＜0.05;“▲”，與空白組對比P＜0.05。

組別肝臟超氧化物歧化酶(SOD)/(U·mg－1蛋白)一氧化氮(NO)/(U·mg－1蛋白)黃嘌呤氧化酶(XOD)/(U·mg－1蛋白)髓過氧化物酶(MPO)/(U·g－1濕重)一氧化氮合酶(INOS)/(U·g－1濕重)一氧化氮合酶(TNOS)/(U·g－1濕重)丙二醛(MDA)/(n mol·mg－1蛋白)谷胱甘肽(GSH)/(mg·g－1蛋白)空白對照組 43.34±1.22* 7.74±0.56* 6.48±0.21* 2.42±0.092* 0.13±0.029* 0.16±0.039 5* 16.36±0.48* 2.91±0.05*模型組 21.12±3.64 20.31±4.17 10.33±0.36 1.98±0.23 0.49±0.040 0.53±0.035 1 22.24±1.25 1.86±0.36陽性對照組 65.56±2.65＊＊▲ 1.52±0.86＊＊▲ 5.01±0.22＊＊▲ 0.47±0.07＊＊▲ 0.033±0.001＊＊▲ 0.056±0.035 1＊＊▲ 5.67±0.66＊＊▲ 4.04±0.16＊＊▲馬奶粉高劑量 86.33±1.44＊＊▲ 2.28±0.48＊＊▲ 6.16±0.42＊＊▲ 1.64±0.24＊＊▲ 0.072±0.021＊＊▲ 0.11±0.015 1＊＊▲ 8.46±1.14＊＊▲ 3.53±0.21＊＊▲馬奶粉中劑量 66.27±1.28＊＊▲ 6.53±1.18＊＊▲ 7.43±0.32＊＊▲ 2.43±0.076＊＊▲ 0.13±0.044＊＊▲ 0.16±0.030 6＊＊▲ 13.26±2.06＊＊▲ 2.98±0.15＊＊▲馬奶粉低劑量 49.36±1.87* 11.14±0.67* 8.08±0.28* 2.56±0.03* 0.26±0.023* 0.25±0.032 2* 15.68±0.18* 2.40±0.25*

表4 不同處理對小鼠脾臟抗氧化測定指標的影響(，n=12)Table 4 Different treatments on the spleen of mice antioxidant measurement indicators(，n=12)

表4 不同處理對小鼠脾臟抗氧化測定指標的影響(，n=12)Table 4 Different treatments on the spleen of mice antioxidant measurement indicators(，n=12)

注:“＊＊”，與模型組對比P＜0.01;“*”與模型組對比P＜0.05;“▲”，與空白組對比P＜0.05。

組別脾臟超氧化物歧化酶(SOD)/(U·mg－1蛋白)一氧化氮(NO)/(U·g－1蛋白)黃嘌呤氧化酶(XOD)/(U·g－1濕重)髓過氧化物酶(MPO)/(U·g－1濕重)一氧化氮合酶(INOS)/(U·g－1濕重)一氧化氮合酶(TNOS)/(U·g－1濕重)丙二醛(MDA)/(n mol·mg－1蛋白)谷胱甘肽(GSH)/(mg·g－1蛋白)空白對照組 23.22±0.66* 6.13±0.36* 11.86±0.88* 2.42±0.092* 2.63±0.051* 0.250±0.033* 11.05±0.48* 1.97±0.22*模型組 11.36±1.87 9.06±0.54 25.26±1.72 1.98±0.23 3.55±0.057 0.55±0.069 13.76±0.66 0.78±0.40陽性對照組 35.57±1.66＊＊▲ 0.22±0.097＊＊▲ 9.10±0.39＊＊▲ 0.47±0.066＊＊▲ 2.045±0.12＊＊▲ 0.031±0.022＊＊▲ 4.65±0.49＊＊▲ 4.46±0.51＊＊▲馬奶粉高劑量 66.69±2.33＊＊▲ 0.62±0.15＊＊▲ 10.10±0.30＊＊▲ 1.64±0.24＊＊▲ 2.29±0.046＊＊▲ 0.056±0.012＊＊▲ 4.82±0.33＊＊▲ 4.02±0.29＊＊▲馬奶粉中劑量 46.63±1.56＊＊▲ 3.09±0.32＊＊▲ 10.73±0.14＊＊▲ 2.43±0.076＊＊▲ 2.67±0.052＊＊▲ 0.14±0.024＊＊▲ 6.15±0.59＊＊▲ 1.89±0.099＊＊▲馬奶粉低劑量 29.55±1.57＊▲ 5.36±0.30＊▲ 16.08±1.20＊▲ 2.56±0.030＊▲ 2.79±0.20＊▲ 0.26±0.047＊▲ 9.32±0.62＊▲ 1.45±0.11＊▲

MDA是脂質過氧化的產物，其高低間接反映了機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度;GSH-Px是機體內一種重要的催化過氧化氫分解的酶，其特異的催化還原型谷胱甘肽(GSH)對過氧化氫的還原反應，可以保護細胞膜結構和功能完整的作用。SOD能夠清除超氧陰離子自由基，其變化能夠反映機體氧化損傷的程度。髓過氧化物酶(MPO)是一種氧化能力很強的自由基，其性質很活潑，氧化各種有機物和無機物的反應速率極快，是造成組織脂質過氧化、核酸斷裂、蛋白質和多糖分解的主要因素，與機體的衰老、腫瘤、輻射損傷和細胞吞噬能力有關。黃嘌呤氧化酶(XOD)屬于需氧脫氫酶類，是體內核酸代謝的重要酶，在肝損傷時釋放于血清中，并且升高明顯，而且在缺氧過程中黃嘌呤脫氫酶很快形成黃嘌呤氧化酶，它再催化次黃嘌呤形成黃嘌呤，產生超氧陰離子自由基。如果機體處于缺氧狀態腦組織中NOS和NO含量異常升高，產生腦組織損傷［8－10］。

故本實驗選測上述幾項指標來考察鮮馬奶粉體內抗氧化活性。按照不同濃度給予鮮馬奶粉45 d后，小鼠血清、肝臟及脾臟中GSH、SOD量明顯升高，而 NO、MDA、NOS、MPO、XOD 量明顯減少，并且在一定濃度范圍內具有濃度依賴性。其中鮮馬奶粉高劑量組抗氧化活性高于陽性對照組，并差異具有顯著性(P＜0.05)。鮮馬奶粉有一定抗氧化活性。這對于鮮馬奶粉以后保健功能研究提供一定的理論依據和實驗基礎。

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