第三代與第四代ELISA試劑檢測(cè)抗HCV結(jié)果的差異性分析

熊麗紅，楊莉娜，郭新宇 ，王旭菲

(1、江西省血液中心檢驗(yàn)科，江西 南昌 330077；2、江西省婦幼保健院，江西 南昌 330006)

丙型肝炎病毒(HCV)自從1989年被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，科學(xué)家們已進(jìn)行了大量研究，建立了各種檢測(cè)方法。中國(guó)于1993年成功研制出丙型肝炎病毒抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑（抗HCV ELISA)[1]，經(jīng)過(guò)近20年的研究應(yīng)用，試劑質(zhì)量越來(lái)越好，為保證輸血安全，上世紀(jì)90年代末，抗-HCV檢測(cè)已列入采供血機(jī)構(gòu)篩查獻(xiàn)血者的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目中。近兩年，抗-HCV四代試劑已研制成功并投入使用。第三代試劑實(shí)驗(yàn)原理為間接法檢測(cè)HCV抗體，第四代試劑實(shí)驗(yàn)原理為雙抗原夾心法檢測(cè)HCV抗體。現(xiàn)對(duì)第三代與第四代HCV ELISA檢測(cè)試劑在實(shí)際工作中的應(yīng)用結(jié)果進(jìn)行比較，報(bào)道如下。

1 材料方法

1.1 材料 2014年10月10日至2014年10月31日本中心無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本4410例，均用EDTA-K2抗凝。

1.2 儀器與試劑 STAR加樣系統(tǒng)和FAME全自動(dòng)酶聯(lián)檢測(cè)系統(tǒng)(瑞士Hamilton公司)；第三代試劑和第四代試劑均為北京萬(wàn)泰生物制品有限公司試劑盒，均在有效期內(nèi)使用；0.5NCU/ml抗-HCV質(zhì)控血清為北京康徹斯坦生物有限公司生產(chǎn)。

1.3 方法 4410例標(biāo)本平行使用第三代和第四代試劑同時(shí)檢測(cè)，兩種試劑初次反應(yīng)性標(biāo)本均使用原試劑進(jìn)行雙孔復(fù)試。大于CUTOFF值的80%即判為有反應(yīng)性（初篩陽(yáng)性）。單試劑有反應(yīng)性標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測(cè)(羅氏試劑)和免疫印跡法進(jìn)行確認(rèn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS 16.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢測(cè)0.5NCU/ml抗-HCV質(zhì)控血清S/CO值比較 見(jiàn)表1。

表1 0.5NCU/ml抗-HCV質(zhì)控血清S/CO值

2.2 第三代與第四代HCV ELISA試劑檢測(cè)4410例標(biāo)本的結(jié)果 4410例標(biāo)本雙試劑陽(yáng)性共4例，三代和四代單試劑陽(yáng)性6例，6例單試劑陽(yáng)性標(biāo)本采用羅氏試劑進(jìn)行核酸檢測(cè)均為陰性。對(duì)單試劑陽(yáng)性標(biāo)本采用WB法確認(rèn)，2例四代單試劑陽(yáng)性確認(rèn)后均為陰性結(jié)果，4例三代單試劑陽(yáng)性確認(rèn)后2例標(biāo)本可疑，2例確認(rèn)為陰性。2例可疑結(jié)果均出現(xiàn)NS3-2單片段，如需要確認(rèn)是否陽(yáng)性需采用其它方法進(jìn)一步確認(rèn)。見(jiàn)表2。

表2 4410例標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果

2.3 以三代試劑為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較 陽(yáng)性符合率=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性）=4/8×100%=50%； 陰性符合率=真陰性/（真陰性+假陽(yáng)性）=4400/4402×100%=99.95%；總體樣本的符合率=（真陽(yáng)性+真陰性）/總樣本數(shù)=（4+4400）/4410×100%=99.86%。

3 討論

丙型肝炎可通過(guò)血液途徑進(jìn)行傳播，為了保障血液安全，《血站技術(shù)操作規(guī)程》中明確要求獻(xiàn)血者血液必須采用不同廠家試劑進(jìn)行2次丙型肝炎檢測(cè)，丙型肝炎檢測(cè)陰性的血液才能發(fā)往臨床。目前酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)抗HCV檢測(cè)試劑盒均采用HCV的基因工程或合成多肽抗原[核心區(qū)、非結(jié)構(gòu)區(qū)(NS)3、NS4和NS5等]包被固相。由于上述HCV抗原的組合、來(lái)源及用量等方面的差異，可能會(huì)造成在臨床上使用不同生產(chǎn)廠家ELISA試劑盒測(cè)定結(jié)果出現(xiàn)較大的差異，存在一定數(shù)量的假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果[2-7]。據(jù)報(bào)道雙試劑陽(yáng)性反應(yīng)標(biāo)本的RIBA確認(rèn)陽(yáng)性率接近60%。而在單一試劑陽(yáng)性反應(yīng)的標(biāo)本中，無(wú)RIBA確認(rèn)陽(yáng)性結(jié)果，但存在較高比例的RIBA可疑結(jié)果(27.5%~54%)[8-10]。

從本實(shí)驗(yàn)室結(jié)果表1看，用兩種試劑同時(shí)檢測(cè)0.5NCU/ml抗-HCV質(zhì)控血清，第四代試劑S/CO為17.22±1.98，明顯高于第三代試劑 2.41±0.18，相差約7倍，突顯了第四代試劑靈敏度高于第三代試劑的特點(diǎn)。第三代試劑實(shí)驗(yàn)原理為間接法檢測(cè)HCV抗體，血清加樣量為10μl，而第四代試劑實(shí)驗(yàn)原理為雙抗原夾心法，血清加樣量為50μl，相比之下第四代試劑更加靈敏，加樣量更加準(zhǔn)確，提高了HCV抗體檢出率。第三代試劑和第四代試劑陰性符合率為99.95%和總樣本符合率99.86%，檢測(cè)結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)差異。因試驗(yàn)中陽(yáng)性樣本量過(guò)少，陽(yáng)性符合率只有50%，不具有實(shí)際的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，需進(jìn)一步研究。

目前我國(guó)現(xiàn)行的HCV血液篩查方案有兩種，部分血站已引進(jìn)核酸檢測(cè)，明顯縮短的HCV檢測(cè)的窗口期，但由于各種原因，核酸檢測(cè)尚未在全國(guó)范圍推廣。部分血站仍舊使用2種不同廠家的試劑檢測(cè)HCV抗體，還有部分血站雖然引進(jìn)核酸檢測(cè)，也同時(shí)使用2種不同廠家的試劑檢測(cè)HCV抗體。本實(shí)驗(yàn)中，6份單試劑陽(yáng)性標(biāo)本中無(wú)確認(rèn)陽(yáng)性結(jié)果，與有關(guān)報(bào)道相符[2]。采用2次檢測(cè)并未增加真陽(yáng)性標(biāo)本檢測(cè)能力，不能有效起到互補(bǔ)的作用，而是大量增加了假陽(yáng)性反應(yīng)，這無(wú)形中增加了血液的不必要浪費(fèi)和獻(xiàn)血者的不必要淘汰。為提高檢測(cè)功效，又盡量減少血液的不必要浪費(fèi)，血液篩查模式和試劑的選擇有必要進(jìn)行科學(xué)的探討。

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