一例農(nóng)戶小型種豬場(chǎng)偽狂犬病的凈化

黨曉鵬，寧明正

（陜西金冠牧業(yè)有限公司，西安 710018；陜西省蒲城縣龍陽(yáng)畜牧獸醫(yī)站，陜西 蒲城 715507）

豬偽狂犬病(Pseudorabies，PR)是由偽狂犬病病毒(PRV)引起的一種急性傳染病[1]，我國(guó)將其列為二類傳染病。近年來(lái)，豬偽狂犬病在陜西省流行范圍較廣，特別是農(nóng)戶散養(yǎng)豬場(chǎng)和小規(guī)模種豬場(chǎng)，野毒感染率較高。該病對(duì)種豬的危害主要是侵害繁殖系統(tǒng)，導(dǎo)致豬群繁殖力下降，產(chǎn)死胎、木乃伊數(shù)量增加，新生仔豬成活率下降[2]。

農(nóng)戶小型種豬場(chǎng)（基礎(chǔ)母豬100頭左右）在豬病凈化方面難度較大，豬場(chǎng)衛(wèi)生隔離消毒防疫等設(shè)施較差，種豬來(lái)源復(fù)雜多樣，豬瘟（HC）、豬2型圓環(huán)病毒（PCV-2）、豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）、豬傳染性胸膜肺炎（APP）、副豬嗜血桿菌病（HPS）等混合感染普遍，感染豬及帶毒豬淘汰措施難以執(zhí)行等。但針對(duì)豬偽狂犬病的凈化條件目前已基本具備，一是有商品化基因缺失疫苗免疫接種，二是有可區(qū)分疫苗免疫抗體與野毒感染抗體的PRV?gE抗體ELISA試劑盒和檢測(cè)PRV病原的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒，在此基礎(chǔ)上結(jié)合消毒隔離等生物安全措施，逐步淘汰陽(yáng)性感染豬，引入陰性種豬，在2～3年的時(shí)間里完全可以將豬偽狂犬病徹底凈化。國(guó)內(nèi)許多大型規(guī)模化種豬場(chǎng)已經(jīng)按照此方案對(duì)偽狂犬病成功進(jìn)行凈化，消滅了偽狂犬病野毒感染[3]。本試驗(yàn)用偽狂犬病病毒?gE抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，對(duì)陜西省蒲城縣一農(nóng)戶小型種豬場(chǎng)的偽狂犬病野毒感染情況進(jìn)行連續(xù)抽樣監(jiān)測(cè)，同時(shí)應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒，對(duì)表現(xiàn)有臨床癥狀的乳仔豬進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PRV病原檢測(cè)。然后根據(jù)抗體和病原檢測(cè)結(jié)果制定切實(shí)可行的凈化方案。

通過(guò)科學(xué)嚴(yán)格的疫苗接種，連續(xù)對(duì)豬群進(jìn)行5次抽樣檢測(cè)，包括PRV?gE抗體和疑似病仔豬病原檢測(cè)，嚴(yán)格隔離飼養(yǎng)抗體陽(yáng)性豬，并實(shí)時(shí)逐步淘汰處理。該豬場(chǎng)的偽狂犬病野毒感染率由最初的45.45%逐步降低至1.72%，發(fā)病仔豬偽狂犬病野毒陽(yáng)性率由48.28%降至0%，基本達(dá)到凈化豬群偽狂犬病的目標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

陜西蒲城某種豬場(chǎng)。存欄種公豬7頭，能繁母豬135頭。年出售商品仔豬近2?000頭。將豬群分組：哺乳仔豬、保育豬、中大豬、后備母豬、空懷母豬、妊娠母豬及種公豬。種公豬逐只采樣，其他每組分別抽樣20%。

1.2 豬群接種疫苗

豬場(chǎng)偽狂犬病免疫接種采用基因缺失弱毒疫苗。

1.3 檢測(cè)試劑盒

偽狂犬病gE缺失ELISA診斷試劑盒，購(gòu)自武漢科前公司；豬偽狂犬病病毒(gE基因)實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自北京世紀(jì)元亨公司。

1.4 血樣采集時(shí)間

豬偽狂犬病病毒gE抗體檢測(cè)在2014年3月、6月、9月、12月和2015年3月各采集血樣1次，按照豬偽狂犬病病毒gE抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)要求檢測(cè)PRV野毒感染抗體效價(jià)。

檢測(cè)結(jié)果判定：在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔OD630?nm值。試驗(yàn)成立條件是陰性對(duì)照孔平均OD630?nm值與陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD630?nm值之差≥0.4.

S=樣品孔OD630?nm值，N=陰性對(duì)照孔平均OD630?nm值。

若S/N比值≤0.6,樣品判為PRV抗體陽(yáng)性。

若S/N比值≤0.7但＞0.6,該樣品必須重測(cè)，如果結(jié)果相同，則過(guò)一段時(shí)間后重新采集血樣進(jìn)行檢測(cè)。

若S/N比值＞0.7,樣品判為PRV抗體陰性。

1.5 豬偽狂犬病病毒實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)

對(duì)有臨床癥狀的仔豬采集淋巴結(jié)組織，處理后進(jìn)行病原檢測(cè)，操作方法按照試劑盒生產(chǎn)廠家說(shuō)明書(shū)操作。

檢測(cè)結(jié)果判定：被檢組織樣品Ct?值≤30并出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線為豬偽狂犬病病毒野毒陽(yáng)性，被檢樣品30＜Ct＜37并出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線，需要重新取樣提取DNA，擴(kuò)增后進(jìn)行結(jié)果判定，如仍為可疑，則判定為陽(yáng)性；被檢樣品Ct值＞37時(shí)，判定為陰性；對(duì)于某些未呈現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線，但本底值較高的樣品，判為陰性。

1.6 免疫程序

2014年3月以來(lái)，選用豬偽狂犬病基因缺失弱毒疫苗進(jìn)行全群免疫。新生仔豬3日齡滴鼻免疫，8周齡時(shí)再肌注加強(qiáng)免疫1次；種公豬及后備母豬每3個(gè)月免疫1次。

1.7 飼養(yǎng)管理措施

每天及時(shí)打掃圈舍衛(wèi)生，清理生產(chǎn)垃圾，保持舍內(nèi)外干凈整潔，及時(shí)清理豬糞，盡量做到豬、糞分離，保持豬體、圈舍干凈。豬舍空圈后要清洗、消毒，種豬上床或調(diào)圈，要把空圈先沖洗后用廣譜消毒藥消毒，產(chǎn)房每斷奶一批、育成每育肥一批、育肥每出欄一批，先清掃，再用火堿噴霧消毒。注意通風(fēng)換氣，冬季做到保溫，舍內(nèi)空氣良好。夏季通風(fēng)防暑降溫，排出有害氣體。使用過(guò)的藥盒、藥瓶、疫苗瓶、消毒劑瓶、一次性輸精瓶等應(yīng)及時(shí)焚燒或銷毀處理。料袋能利用的返回飼料廠，不能利用的焚燒掉。四季滅鼠，夏季滅蚊蠅。

2 結(jié)果

2.1 PRV?gE抗體檢測(cè)結(jié)果（見(jiàn)表1）

豬群gE野毒抗體的陽(yáng)性率由首次檢測(cè)的45.45%降至第5次檢測(cè)的1.72%，說(shuō)明豬群偽狂犬病野毒抗體逐步降低，凈化初步成功。最后1頭陽(yáng)性帶毒豬建議豬場(chǎng)盡快淘汰，半年后應(yīng)再?gòu)?fù)查1次。

2.2 偽狂犬病野野毒實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)結(jié)果（見(jiàn)表2）

表 1?PRV?gE 野毒抗體檢測(cè)結(jié)果

表2 偽狂犬病野野毒實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)結(jié)果

在凈化之初，對(duì)有臨床癥狀的仔豬進(jìn)行偽狂犬病野野毒實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)，結(jié)果表明豬場(chǎng)新生仔豬及保育豬群呈現(xiàn)較為嚴(yán)重的感染狀態(tài)，陽(yáng)性率高達(dá)48.28%。采取凈化方案后，豬群繁殖性能明顯改善，產(chǎn)仔數(shù)、健仔數(shù)、新生仔豬成活率等指標(biāo)明顯提高。3個(gè)月后進(jìn)行第2次檢測(cè)時(shí)，新生仔豬群偽狂犬病野毒陽(yáng)性率已降至27.78%，效果明顯；到2015年3月，豬場(chǎng)新生仔豬抽樣結(jié)果顯示偽狂犬病野野毒實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)陽(yáng)性率已經(jīng)為0%，且再無(wú)新的偽狂犬病仔豬出現(xiàn)。

3 討論

我國(guó)預(yù)防豬偽狂犬病主要采取免疫接種的方式，首選疫苗為豬偽狂犬病gE基因缺失疫苗。豬偽狂犬病基因缺失疫苗免疫原性好、抗體產(chǎn)生快，保護(hù)力強(qiáng)，可把疫苗免疫豬與野毒感染豬區(qū)分開(kāi)。偽狂犬病gE抗體ELISA檢測(cè)試劑盒能區(qū)分偽狂犬病野毒和疫苗毒所產(chǎn)生的抗體，通過(guò)檢測(cè)結(jié)果可判斷豬只是否感染偽狂犬病野毒。豬偽狂犬病病毒(gE基因)實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒可對(duì)病料進(jìn)行野外強(qiáng)毒病原檢測(cè)。通過(guò)5次連續(xù)監(jiān)測(cè)結(jié)果表明，農(nóng)戶小型種豬場(chǎng)在實(shí)施科學(xué)免疫接種的基礎(chǔ)上，結(jié)合抗體和病原檢測(cè)，嚴(yán)格隔離、淘汰、凈化，完全能夠清除野毒感染,使種豬場(chǎng)成為偽狂犬病陰性豬場(chǎng)。

[1]?殷震，劉景華.動(dòng)物病毒學(xué)[M].第2版.?北京：科學(xué)出版社，1997：998—1009.

[2]?趙德明，張仲秋，沈建忠，譯.豬病學(xué)[M].第9版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2008：465—476.

[3]?萬(wàn)遂如.關(guān)于養(yǎng)豬場(chǎng)偽狂犬病的凈化問(wèn)題[J].今日畜牧獸醫(yī)，2014(8)：1—4.