實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測結核分枝桿菌在結核性胸膜炎診斷中的價值

宋予娟 王華 李愛新 耿嵐 吳園園 韓玉芳

實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測結核分枝桿菌在結核性胸膜炎診斷中的價值

宋予娟 王華 李愛新 耿嵐 吳園園 韓玉芳

目的 探討實時熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)法檢測結核分枝桿菌在結核性胸膜炎診斷中的價值。方法 對362例臨床確診的結核性胸膜炎患者、可疑結核性胸膜炎患者和非結核性胸膜炎患者的胸水標本采用涂片、實時熒光定量PCR兩種方法進行檢測, 對其結果進行對比分析。結果 362例胸水標本中, 涂片陽性率為4.42%(16/362), PCR檢測陽性率為24.31%(88/362)。胸水涂片、PCR檢測102例臨床確診的結核性胸膜炎患者胸水標本陽性率分別為11.76%(12/102)和50.98(52/102)；檢測160例臨床可疑結核性胸膜炎患者胸水陽性率分別為2.50%(4/160)和22.50%(36/160)。兩種方法的陽性檢測率比較差異有統計學意義(χ2=10.654, P＜0.05)。100例非結核性胸膜炎患者胸水標本涂片及PCR檢測均為陰性。結論 熒光定量-聚合酶鏈反應(FQ-PCR)快速診斷結核性胸膜炎與涂片法相比較具有快速、靈敏、高特異性等優點。

結核分枝桿菌；胸水涂片；熒光定量聚合酶鏈反應；結核性胸膜炎

結核分枝桿菌(mucobacterium tuberculosos, MTB)是兼性的細胞內致病菌, 它能夠導致進行性疾病和無癥狀的潛伏感染, 其中潛伏感染占世界人口的1/3, 并且每年有900萬新增結核病例, 200萬人死于結核病［1］。本次采用熒光定量PCR技術檢測臨床標本中結核分枝桿菌并與涂片抗酸染色兩種方法, 對胸水標本進行檢測, 以評價FQ-PCR檢測結核分枝桿菌在結核性胸膜炎診斷中的應用。現報告如下。

1 資料與方法

定量PCR方法取胸水約15 ml離心處理后如含少量細胞用雙蒸餾水洗滌沉淀2次, 采用DNA提取試劑盒提取胸水DNA,根據深圳凱杰公司熒光定量PCR擴增試劑盒說明書操作。涂片抗酸染色：按照中國結核病防治規劃《痰涂片鏡檢標準化操作及質量保證手冊》中要求進行操作［3］。

1.4 統計學方法 應用SPSS17.0統計學軟件進行數據統計分析。計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

1.1 一般資料 2011年1月～2014年3月本院住院和門診胸部影像學診斷為胸腔積液的患者362例。其中臨床確診：102例結核性胸膜炎, 160例可疑結核性胸膜炎, 100例非結核性胸膜炎(其中肺癌12例, 其他呼吸系統疾病患者88例)全部患者根據X線、細菌學、免疫學、病理學等檢查進行了確診。

1.2 試劑與儀器 抗酸染色試劑為珠海貝索生物技術有限公司生產, 實時熒光定量PCR檢測試劑為深圳凱杰公司生產的結核分枝桿菌核酸檢測試劑盒。儀器采用上海宏石SLAN實時熒光定量PCR擴增儀。

1.3 方法 患者經胸腔穿刺及胸膜活檢, 送檢胸腔積液查常規、生化、病理學、涂片抗酸染色及結核桿菌培養。熒光

2 結果

362例胸水標本中, 涂片陽性率為4.42%(16/362), PCR檢測陽性率為24.31%(88/362)。102例結核性胸膜炎患者胸水標本涂片和FQ-PCR檢測結果：兩種方法檢測陽性率比較差異有統計學意義(χ2=10.021, P＜0.05)。160例可疑結核性胸膜炎患者胸水涂片和FQ-PCR檢測結果, 兩種方法檢測陽性率比較差異有統計學意義(χ2=10.654, P＜0.05)。對于臨床確診和可疑結核性胸膜炎患者的胸水標本FQ-PCR陽性率分別是涂片的4.33(50.98%/11.76%)倍和9.00(22.50%/2.50%)倍。100例非結核性胸膜炎患者胸水標本涂片和FQ-PCR檢測結果均為陰性。見表1, 表2。

表1 102例結核性胸膜炎患者胸水標本涂片和FQ-PCR檢測結果比較(n, %)

表2 160例可疑結核性胸膜炎患者胸水標本涂片和FQ-PCR檢測結果(n, %)

3 討論

結核病目前的主要途徑和手段還是以細菌學檢查為主,如涂片鏡檢分離培養菌型鑒定及藥敏實驗等。實時FQ-PCR技術自1996年問世以來短短幾年就以其獨特的優勢在生命科學的基礎研究和應用研究方面發揮巨大的作用, 本研究建立的FQ-PCR特異性、敏感性、質量性均較好。對102例確診結核性胸膜炎, 160例可疑結核性胸膜炎, 100例非結核性胸膜炎患者的胸水標本進行結合分型桿菌檢測, 結果顯示涂片和實時熒光定量檢測陽性率分別為11.76%、50.98%、2.50%、22.50%和0、0, 說明熒光PCR技術可有效檢測標本中特異基因片段, 而涂片鏡檢無法檢測。FQ-PCR陽性率,較涂片法顯著增高, 且差異有統計學意義(P＜0.05)。其原因可能有當標本中MTB濃度＞10 ml時涂片染色法才可檢出, MTB在標本中少聚集成團導致圖片分布不勻［3］, 染色過程中沖洗操作很有可能導致載玻片上的MTB流失。本研究102例確診的結核性胸膜炎患者中50例FQ-PCR檢測為陰性,可能是擴增中存在DNA聚合酶的抑制物或者患者此時不排菌, 需要對患者進行間斷性FQ-PCR定量動態觀察。另在160例可疑結核性胸膜炎患者胸水中檢測到36例陽性, DNA測序分析確診為陽性, 說明其具有很高的敏感性［2］。

綜上所述, FQ-PCR對于結核性胸膜炎具有較高的診斷、治療價值。其敏感、特異、污染少的可動態定量方法有利于臨床患者的動態觀察和療效觀察, 也有利于結核病的控制。

［1］ 吳睿彥, 陳志成, 肖芃, 等.結核分枝桿菌定量聚合酶鏈反應對結核性腦膜炎早期診斷價值.實用醫學雜志, 2012, 28(17): 2867-2869.

［2］ 金建東.TB-SA結核分支桿菌抗體檢測對結核性胸膜炎的診斷意義.臨床肺科雜志, 2013, 18(2):299-300.

［3］ 李銳成, 劉昕陽, 閻琳, 等.實時熒光定量聚合酶鏈反應技術在結核性腦膜炎診斷價值.臨床薈萃, 2014, 29(1):31-34.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.09.067

2014-11-19］

453000 新鄉市第一人民醫院檢驗科(宋予娟 王華 吳園園 韓玉芳)；新鄉市中心血站(李愛新)；新鄉市傳染病醫院(耿嵐)