血漿多巴胺β羥化酶與阿爾茨海默病相關性研究

孟 云，朱言亮

（襄陽市中心醫院神經內科，湖北襄陽441021）

血漿多巴胺β羥化酶與阿爾茨海默病相關性研究

孟 云，朱言亮＊

（襄陽市中心醫院神經內科，湖北襄陽441021）

阿爾茨海默病（AD）是一種神經退行性紊亂疾病，表現為記憶缺失和認知功能損傷，由于人的壽命普遍延長，老齡化是AD的主要危險因子之一，65歲以上的人群發病率急劇上升［1］，目前，所有關于AD病因的假說均不能解釋其全部病理特征，AD是遺傳兼環境等多因素相互作用的復雜疾病，神經影像研究發現大腦皮質和海馬及其他腦區有明顯的萎縮，早期膽堿能神經系統功能喪失［2－4］，AD患者腦干血清素能及去甲腎上腺素能神經元胞核缺失表明這些神經遞質系統在AD發病過程中起著重要作用［3］。其中，去甲腎上腺素能神經系統與AD的病因與疾病進程相關，但其從中所起的作用并不明確，多巴胺β羥化酶（DBH）作為一種兒茶酚胺合成酶，對去甲腎上腺素的合成與更新發揮著重要作用，在基因的調控下，血漿DBH的活性在不同個體間表現出廣泛的遺傳性，DBH可調節NA水平，但這一作用對AD的發生與疾病進程的影響卻尚不清楚，在AD患者中，海馬和皮質中DBH活性減低，可能是970T等位基因和隨后降低的DBH活性使去甲腎上腺素（NA）的合成減少并失去了神經保護作用，因而，血漿DBH很可能是AD疾病發展和認知功能損傷的生物標志物，由于血漿DBH活性受基因型控制，因而本研究通過測定患者血漿DBH活性及C－970T和C1603TDBH基因多態性，以闡明DBH調節NA對AD疾病進程的影響。

1 對象與方法

1.1 研究對象

2011年4月至2013年10月來本院接受治療的285名AD患者，患者均屬晚發散發型AD，年齡為63－95歲，平均年齡82±6.9歲，其中124名男性患者，161名女性患者；健康志愿者124名，年齡為64－96歲，平均年齡78.0±8.1歲，其中男性34人，女性90人，AD的診斷按照美國精神病學會制定的DSM－IV癡呆診斷標準和美國神經病學會制定的NINCDS－ADRDA老年性癡呆診斷標準，所有受試者均接受問詢以排除軸I精神障礙并評估當前和過去的治療狀況，排除AD患者和健康對照組中診斷患有嚴重心臟病、癲癇、腦創傷和癌癥者；主要功能性精神障礙，如抑郁和精神分裂癥；高血壓、吸煙及酗酒。患者服用膽堿酯酶抑制劑或抗精神病藥，但采血前停止用藥5天，患者認知狀況評價采用MMSE評分法，健康對照組評分為25－30平均值為28.46±2.24，AD患者評分為0－23，平均值為10.87 ±9.05，依據該評分進一步將AD患者分為3組，其中發病早期患者75人，評分為18－24，平均值為20.54±2.13，中期108人，評分為11－18，平均值為13.68±2.16，晚期102名，評分為0－10，平均值為2.01±3.11。

1.2 指標檢測

常規方法采血，每人采血4mL于含有1mL的抗凝劑的采血管中，血樣3 500r／min離心10分鐘，－20℃冰箱保存備用，血漿DBH活性檢測采用ELISA法，其操作嚴格按照多巴胺β羥化酶活性檢測試劑盒（上海研晶生化試劑有限公司，E－ELH1226）進行。血液樣品DNA的提取采用鹽析法，DBH（C－970T）、DBH（C 1603T）及ApoE（rs7412）多態性基因型采用ABI Prism 7000型基因測序儀進行測定，按照美國應用生物系統公司描述的步驟進行操作，引物和探針購自博奧生物有限公司。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 兩組患者血漿DBH活性比較 見表1。

2.2 兩組患者C－970T和C1603T DBH基因多態性分布比較

AD患者與健康對照組的DBH（C－970T）基因型多態性分布未出現明顯漂變（χ2＝0.619，P＞0.05），符合Hardy－Weinberg平衡；AD患者與健康對照組DBH（C1603T）基因型多態性分布也未出現明顯漂變（χ2＝4.233，P＞0.05）。AD患者C－970T DBH和C1603TDBH多態性的基因型和T等位基因（CT＋TT）載體頻率與健康對照組相比無顯著性差異（P＞0.05），見表2。

表1 健康對照組與AD組血漿DBH活性比較（±s）

表1 健康對照組與AD組血漿DBH活性比較（±s）

與男性比較＊P＞0.05，與對照組比較△P＜0.05，早期AD患者與中晚期AD患者比較＃P＜0.05

n血漿DBH活性（nmol／ml／min）124 16.45±8.12男34 17.95±9.85女90 16.23±10.22＊AD組285 8.61±5.21△男124 8.81±5.71△女161 9.23±6.02＊△發病早期75 7.09±6.11△發病中期108 13.24±7.93＃發病晚期102 2.09±7.88健康對照組＃

表2 健康對照組與AD組C－970T和C1603T DBH基因多態性分布構成比

2.3 兩組C－970T和C1603T不同基因型患者血漿DBH活性

在AD患者組中，DBH（C－970T）基因型CC、CT、TT載體組患者血漿DBH活性分別為11.26 ±5.12nmol／min／ml、6.51±4.26nmol／min／ml和3.31±3.01nmol／min／ml，三組間兩兩比較均具有顯著性差異（P＜0.01），DBH（C－970T）基因型CC、CT、TT載體健康對照組血漿DBH活性分別為21.01±10.34nmol／min／ml、11.66±7.78nmol／min／ml和4.68±1.57nmol／min／ml，三組間兩兩比較均具有顯著性差異（P＜0.01）。在AD患者組中，DBH（1603T）基因型CC、CT、TT載體組患者血漿DBH活性分別為9.38±6.11nmol／min／mL、6.13±3.43nmol／min／mL和5.75±1.78nmol／min／mL，三組間兩兩比較無顯著性差異（P＞0.05）；在健康對照組中，DBH（1603T）基因型CC、CT載體組患者血漿DBH活性分別為15.31± 11.02nmol／min／ml、12.48±6.03nmol／min／ml和11.22±2.17nmol／min／mL，三組間兩兩比較亦無顯著性差異（P＞0.05）。見表3。

表3 健康對照組與AD組C－970T和C1603T不同基因型患者血漿DBH活性（±s）

表3 健康對照組與AD組C－970T和C1603T不同基因型患者血漿DBH活性（±s）

注：A表示與CC組比，P＜0.01；B表示與CT組比，P＜0.01

患者組健康對照組DBH（C－970T）基因型血漿DBH活性（nmol／min／ml）AD CC 11.26±5.12 21.01±10.34 CT 6.51±4.26A11.66±7.78ADBH（C1603T）基因型4.68±1.57AB15.31±11.02 12.48±6.03 11.22±2.17 TT CC CT TT 3.31±3.01AB9.38±6.11 6.13±3.43 5.75±1.78

2.4 DBH C－970T和C1603T多態性對AD患者DBH活性的影響

為了進一步明確基因對血漿DBH活性的影響，對DBH C－970T和C1603T多態性對DBH活性的作用進行了評價，雙因素方差分析DBH C－970T多態性與分期診斷對血漿DBH活性影響表明，分期診斷（F＝24.734，P＜0.01）和基因型（F＝47.765，P＜0.01）均對血漿DBH活性有明顯影響，但分期診斷與基因型間無明顯相互作用（F＝0.281，P＞0.05），早、中、晚期AD患者CC、CT和TT基因型頻率亦無顯著性差異；通過調整年齡、性別及ApoE4等位基因等因素進行回歸分析表明，AD與DBH C－970T基因型CC和T等位基因之間無明顯相關性（OR＝1.12，95%CI 0.86－4.35，P＞0.05）；雙因素方差分析DBH C1603T多態性與分期診斷對血漿DBH活性影響表明，DBH C1603T基因型（F＝4.304，P＜0.05）和分期診斷（F＝13.240，P＜0.01）均對血漿DBH活性具有明顯影響，但二者之間無明顯相互作用（F＝0.004，P＞0.05），通過調整年齡、性別及ApoE4等位基因等因素進行回歸分析表明，AD與DBH C1603T基因型CC和T等位基因之間無明顯相關性（OR＝0.91，95%CI 0.35－2.23，P＞0.05）。

3 討論

去甲腎上腺素能神經系統有兩個主要部分，一個源于腹側被蓋區的去甲腎上腺素能細胞體，主要參與性行為和飲食行為，另一個源于藍斑，與學習、記憶和認知功能相關［5，6］，藍斑去甲腎上腺素能神經元缺失與胞外β淀粉樣蛋白（Aβ）沉積增加［6］、AD早期神經纖維異常、發病及持續性癡呆［7］有關，在AD患者的多個腦區NA濃度明顯降低［8］，另外，AD腦脊液NA水平升高支持了膽堿能神經和去甲腎上腺素能神經元缺失產生代償的假說［8，9］，一些研究認為NA不僅是AD的危險因子，而且是真正的病原因子［7，10，11，12］，除作為神經遞質，NA還是內源性抗炎物質，通過激活小膠質細胞來抑制炎癥［13］，因此，說明藍斑神經細胞死亡與NA介導的抗炎蛋白缺失可使炎癥加劇，從而導致AD的發生。

多巴胺β羥化酶（DBH）可催化多巴胺對NA的氧化羥化，DBH存在于去甲腎上腺素能神經元、外周神經節后交感神經元及腎上腺髓質，是突觸囊泡內唯一的兒茶酚胺合成酶，以游離和膜結合狀態存在，DBH與NA可通過胞吐作用共同釋放，可在腦脊液、血漿及血清中檢測到，血漿DBH活性受遺傳因素調控，其個體差異大，血漿DBH活性非常穩定，不會因機體活動等發生變化，單核苷酸多態性分析DBH基因啟動子C－970T區可解釋30%－50%的DBH活性差異，而且等位基因T－970可通過共顯性遺傳降低血漿DBH的活性［14］，后者似乎能夠解釋血漿DBH活性差異，但內含子11中C1603T多態性的作用幾乎沒有［15，16］。

本研究結果表明，與相同年齡條件下的健康對照組相比，AD患者血漿DBH活性的降低并不依賴于基因型，從血漿DBH活性與AD的嚴重程度的關系來看，AD發病初患者藍斑去甲腎上腺素能神經元能夠增加NA產生的活性，顯然是去甲腎上腺素能神經元缺失的一種代償作用，這一研究結果表明AD患者早期應用選擇性去甲腎上腺素重攝取抑制劑治療使藍斑缺失的去甲腎上腺素能神經元得到補償，后期將繼續研究DBH活性變化對去甲腎上腺素能神經元缺失的代償機制。

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2014－10－22）

1007－4287（2015）09－1505－03

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