民族藥小白薇的抗炎活性成分的初步研究*

陳 珠，陳海豐，楊彩霞，林玉萍，毛曉健

(云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500)

民族藥小白薇的抗炎活性成分的初步研究*

陳 珠，陳海豐，楊彩霞，林玉萍，毛曉健△

(云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500)

目的 研究小白薇各種提取物對小鼠的炎癥模型的影響，以明確小白薇抗炎活性的有效部位。方法 用棉球植入小鼠體內(nèi)的方法測肉芽的重量；用二甲苯致耳腫脹的方法測耳廓腫脹率。結(jié)果 醋酸潑尼松對照組和50%醇提物高、低劑量組對二甲苯所致小鼠耳腫脹有極為顯著的抑制作用(P<0.01)，其余各給藥組作用均不顯著；各給藥組除醋酸潑尼松組、正丁醇高劑量組外均能顯著抑制肉芽組織增生而有顯著的抗炎作用；各給藥組對小鼠胸腺、脾臟無明顯影響，陽性對照組醋酸潑尼松能顯著降低小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，有免疫抑制作用。結(jié)論 小白薇提取物對炎癥早期，毛細血管通透性增高時的抑制以50%醇提物作用顯著，小白薇各提取物對炎癥晚期肉芽組織增生有顯著的抑制作用。

小白薇；提取物；抗炎；耳廓腫脹；肉芽組織

小白薇為蘿摩科(Asclepiadaceae)植物云南娃兒藤(Tylophorayunnanensisschltr)的根，別名白龍須、白薇、水辣子根、老媽媽針線包、蛇辣子、白藤、娃兒藤、羊角草、中西林[1]。主產(chǎn)于云南、貴州和四川，生長于海拔2000 m以下山坡、向陽曠野及草地上[2]。根及根莖供藥用，有除虛煩、清熱散腫、生肌止痛之效[3]，亦為彝族習(xí)用藥物，彝醫(yī)常用小白薇單味水煎服，治療氣虛無力、腎炎，民間常用其治療尿路感染、腎炎、痢疾、肝炎等[4]。為明確小白薇抗炎活性的有效部位和有效成分，小白薇分別以水、95%乙醇、50%乙醇、正丁醇、氯仿將小白薇提取物分成五個極性段，通過小鼠耳廓腫脹、棉球肉芽腫炎模型，以篩選抗炎活性，明確抗炎的有效部位，對小白薇抗炎作用做出初步評價，以期為臨床應(yīng)用和我省民族藥資源開發(fā)提供一定的實驗依據(jù)。本研究來源于云南省教育廳科學(xué)研究基金項目《小白薇的抗炎活性成分的研究》的課題，現(xiàn)報道如下：

1 實驗材料

1.1 藥材 小白薇提取物：水提取物、50%乙醇提取物、95%乙醇提取物、正丁醇提取物、氯仿提取物。由課題組提供。

1.2 實驗動物 昆明種小白鼠，體重18～22 g，雄性。均購自昆明醫(yī)學(xué)院實驗動物中心。實驗動物生產(chǎn)許可證號：動物 SCXK(滇2011-0004)SPF級；飼料：SCXK(滇2011-0005)。

1.3 實驗器材及試劑 器材：手術(shù)剪刀，鑷子，手術(shù)針、線，注射器，小鼠固定板、線，脫脂棉，棉簽，手套，口罩等。

試劑：75%乙醇，碘酒，乙醚，二甲苯等均為市售分析純試劑；注射用頭孢拉定粉針劑(批號：100306)、生理鹽水。

陽性藥：醋酸潑尼松(批號：101132；浙江仙琚藥業(yè)有限公司)。

2 試驗方法及結(jié)果

2.1 藥液制備及給藥方法 將各種提取物放入蒸發(fā)皿中在水浴鍋上揮發(fā)，將溶劑揮發(fā)干，準(zhǔn)確稱取，放入研缽中研成粉末，適當(dāng)?shù)募尤肟扇苄缘矸郏賹⑵渑渲贸苫鞈乙?，以備給藥。陽性藥：醋酸潑尼松(5 mg/片)，臨用時取一片藥，放入研缽中研細后配成20 mL的混懸液，以備給藥。

分組給藥劑量：實驗動物均隨機分為12組，即每個提取組分的高、低劑量組，陽性對照組，空白對照組。高、低劑量組給藥劑量按體表面積折算，各極性段溶劑提取物按原生藥材10 g/d，低劑量組為等效劑量，高劑量組為等效劑量的3倍。陽性藥對照組選用醋酸潑尼松作為陽性藥，給藥劑量按體表面積折算，為人用量等效劑量。空白對照組給予同體積生理鹽水。劑量見表1。

表1 小白薇不同提物給藥劑量 (g/kg)

均灌胃給藥，各藥均配成0.2ml/10 g的混懸液，根據(jù)小鼠的體重，準(zhǔn)確計算每只小鼠的給藥劑量，每天1次，按時、準(zhǔn)確給藥，同時密切觀察、記錄動物的情況。

2.2 抗炎實驗

2.2.1 對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響[5]取雄性昆明種小白鼠144只，體重18～22 g，分組及給藥劑量如表1所示，隨機分為12組，每組12只，灌胃給藥，每天1次，連續(xù)10天。第10天給藥半小時后用二甲苯0.05 mL/只，涂于小鼠右耳廓致炎。致炎30 min后頸椎脫臼處死小鼠，立即用7 mm打孔器取左右耳片，電子天平稱重。計算腫脹率[腫脹率=(右耳片重—左耳片重)/左耳片重；×100%]，并各組間進行比較。經(jīng)統(tǒng)計比較，見表2。

表2 小白薇提取物對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響

注：與空白組比較，**P<0.05

結(jié)果表明：與空白對照組比較，醋酸潑尼松對照組和50%醇提高、低劑量組對二甲苯所致小鼠耳腫脹有極為顯著的抑制作用(P<0.01)，其余各給藥組作用均不顯著。

2.2.2 對小鼠肉芽組織增生的影響[6]雄性小鼠，18～22 g，隨機分為12組，每組12只。乙醚麻醉下，左右鼠蹊部消毒后剪開1 cm長的小口，一血管鉗擴充皮下組織，用鑷子將重量為10 mg的滅菌棉球植入皮下，然后縫合，必要時可加青、鏈霉素0.2 mi以防感染，手術(shù)次日開始灌胃給藥，聯(lián)系10天，第11天處死小鼠，打開原切口，將棉球連同周圍結(jié)締組織一起取出，剔除脂肪組織，放烘箱中60度12 h烘干稱重，將稱得的重量減去棉球原重量即得肉芽腫的重量。結(jié)果見表3所示。

表3 小白薇提取物對小鼠肉芽組織的影響

注：與空白組比較，**P<0.01；*P<0.05

結(jié)果表明：與空白組比較，各給藥組除醋酸潑尼松組、正丁醇高劑量組外均能顯著抑制肉芽組織增生而有顯著的抗炎作用。

2.2.3 對小鼠胸腺和脾臟的影響[7]將2.2.1試驗取耳后的小鼠，迅速剖腹，取出胸腺和脾臟，用電子天平稱其鮮重并計算胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)[胸腺(脾臟)指數(shù)=胸腺(脾臟)重量(g)/10(g)體重]，經(jīng)統(tǒng)計比較結(jié)果見表3：

表4 小白薇提取物對小鼠胸腺、脾臟的影響

注：與空白組比較，**P<0.01

結(jié)果表明：與空白組比較，各給藥組對小鼠胸腺、脾臟無明顯影響，陽性對照組醋酸潑尼松能顯著降低小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，有免疫抑制作用。

3 結(jié)論與討論：

本次研究初步得到以下結(jié)論：小白薇提取物對炎癥早期，毛細血管通透性增高時的抑制以50%醇提物作用顯著，其他各提取物有一定的抵制趨勢，但作用不顯著；小白薇提取物除正丁醇高劑量組外，對炎癥晚期肉芽組織增生有顯著的抑制作用。各給藥組對小鼠胸腺、脾臟無顯著影響。但本次實驗只針對小鼠耳腫脹和肉芽組織增生炎癥早期和晚期指標(biāo)做了小白薇的抗炎活性成份的初步研究，對于炎癥中期如白細胞游走等指標(biāo)的影響，有待進一步研究。本次實驗中也發(fā)現(xiàn)，各給藥組對小鼠胸腺、脾臟無顯著影響，即其對小鼠免疫無抑制作用，與其用于治療氣虛無力的臨床應(yīng)用是相符的。

據(jù)報道，娃兒藤生物堿有顯著的抗癌活性。從娃兒藤中提取出的娃兒藤總堿、娃兒藤寧定和娃兒藤寧在組織培養(yǎng)、抗白細胞指數(shù)測定和精原細胞法中均顯示有抗腫瘤活性。在亞急性毒性試驗中，發(fā)現(xiàn)該藥具有明顯降低白細胞的作用，因而推想其可能有抗白血病作用[8]；娃兒藤片具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用，可治療慢性支氣管炎，尤其對喘息型慢性支氣管炎有一定的遠期療效[9]；王遠興等報道了卵葉娃兒藤總生物堿對宮頸癌細胞株HeLa的增殖有強烈的抑制作用，呈現(xiàn)出細胞縮小、核濃縮、細胞質(zhì)紅染及細胞質(zhì)內(nèi)空泡等典型的凋亡現(xiàn)象[10]，具體的作用機理尚需要進一步研究。娃兒藤屬我國僅產(chǎn)31種，大多數(shù)資源貧乏，而鵝絨藤屬為蘿藦科種類最多的屬，從鵝絨藤屬植物中尋找菲駢吲哚里西啶生物堿為國內(nèi)今后開發(fā)該類抗癌劑資源的一條重要途徑[11]。故對小白薇值得做更深一步的研究。

[1]蘭茂.滇南本草(第一卷)[M].昆明，云南科技出版社，1975：340-341.

[2]中國科學(xué)院植物研究所.中國數(shù)字植物標(biāo)本館植物研究[M].昆明：中國植物志電子版，2006：526-529.

[3]中國科學(xué)院昆明植物研究所植物研究[M].昆明：云南植物志(第三卷).1983：588-591.

[4]楊本雷.中國彝族藥學(xué)[M].昆明：云南民族出版社，2004：546.

[5]陳奇，中藥藥理實驗方法學(xué)[M].第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：347.

[6]陳奇，中藥藥理實驗方法學(xué)[M].第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：355-356.

[7]陳奇，中藥藥理實驗方法學(xué)[M].第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：777-778.

[8]廣西壯族自治區(qū)藥物研究所.抗腫瘤藥娃兒藤的實驗研究Ⅱ.抗腫瘤作用及藥理研究[J].生物化學(xué)與生物物理學(xué)報，1977，9(2)：139-145.

[9]江西省余干縣醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所.娃兒藤片治療慢性氣管炎的療效觀察[J].中國中藥雜志，1983，11：21.

[10]王遠興，賈素花，曾雯瑜等.卵葉娃兒藤堿對宮頸癌細胞株HeLa的體外作用[J].食品科學(xué)，2008，29(11)：609-611.

[11]彭軍鵬，劉永和，李銑.娃兒藤生物堿的研究概況[J].西北藥學(xué)雜志.1989，4(4)：42-47.

A Preliminary Study of National Anti-Inflammatory Active Ingredients of Tylophora Yunnanensis

CHEN Zhu1, CHEN Hai-feng2, YANG Cai-xia1,2, LIN Yu-ping2, MAO Xiao-jian2,3

(1.SchoolofPostgraduateStudents,YunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Kunming650500,Yunnan; 2.YunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Kunming650500,Yunnan)

Objective: To study the effect of various extracts of Tylophora yunnanensis on mouse anti-inflammation model to assure the effective parts of its anti-inflammatory activity. Methods: Mice were implanted into cotton balls to measure the weight of granulation. Xylene-induced ear swelling in mice was used to measure the rate of ear swelling. Results: A prednisone control group and high-dose and low-dose groups of 50% ethanol extract had a significant inhibitive effect (P<0.01) on xylene-induced ear swelling in mice. The rest of medication administration groups had no significant effect. Except the prednisone control group and N-butyl alcohol high dose group, each medication group could significantly inhibit proliferation of granulation tissue and had significant anti-inflammatory effect. All the medication groups had no significant effect on the thymus and spleen of the mice. The prednisone of the positive control group could significantly reduce the thymus index and spleen index, with immunosuppressive effect. Conclusion: The extracts of Tylophora yunnanensis has a remarkable effect on early inflammation at 50% alcohol extract when the blood capillary permeability increases, and has obvious inhibition effect on tissue proliferation of advanced stage of inflammation granulation tissue.

Tylophora yunnanensis, extract, anti-inflammatory, ear swelling, granulation tissue

云南省教育廳科學(xué)研究基金項目(NO：09Z0046)

陳珠(1989-)女，河南，研究方向：中藥學(xué)。

R285.5

A

1007-2349(2015)08-0068-03

2015-0-15)

△通信作者：毛曉健，Tel：13888820657