PCDH9、BAG-1S蛋白表達對非小細胞肺癌新輔助化療預后狀況的影響*

羅好秋

中晚期非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）無法耐受手術，而大部分早期非小細胞肺癌患者術后仍需輔助化療[1]。化療是非小細胞肺癌的主要治療手段，但目前非小細胞肺癌化療有效率較低，其主要原因為化療敏感性降低[2]。原鈣黏附蛋白9（Protocadherin，PCDH9）在成人小腸、卵巢、前列腺、胸腺和脾臟組織中的表達明顯高于胎兒組織[3]。抗凋亡蛋白BAG-1S（Bcl-2associated athanogenel，BAG-1S）高表達提示惡性腫瘤局部復發和遠處轉移率較高[4]。但關于PCDH9、BAG-1S蛋白表達對非小細胞肺癌新輔助化療預后狀況的影響研究甚少，本研究就這一問題進行探究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2008年1月-2009年12月本院腫瘤科非小細胞肺癌患者178例作為研究對象。納入標準：全部患者均符合非小細胞肺癌的病理診斷標準，具有手術適應證，術后6~8周期新輔助化療[5]。排除標準：至隨訪截止日期2014年12月，隨訪資料不完整。所選患者中男90例，女88例，年齡42~77歲，平均（63.41±6.14）歲，組織學類型：腺癌96例，鱗癌82例。組織學分化程度：低分化60例，中分化52例，高分化66例。臨床分期：Ⅰ期42例，Ⅱ期57例，Ⅲ期79例。有淋巴結轉移113例，無淋巴結轉移65例。研究經本院醫院倫理委員會批準，全部患者均簽署知情同意書。

1.2 方法 采用免疫組化檢測法。（1）試劑與儀器：鼠抗BAG-1S多克隆抗體（CC9E8，工作稀釋度為1∶15）購自Santa Cruz公司，兔抗人PCDH9一抗及鼠抗兔二抗均購自美國Abcam公司，EDTA抗原修復液（pH=9.5）、DAB顯色試劑盒和SP免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物公司，（2）操作步驟：術中采集非小細胞肺癌組織（178例）和癌旁組織（距離腫瘤組織2 cm，154例），石蠟切片、脫蠟、水化，磷酸鹽（Phosphate Buffered Saline，PBS）緩沖液沖洗3 min×3次，高溫高壓下采用EDTA抗原修復液行抗原修復，滴加3%H2O2溶液，室溫下孵育10 min阻斷內源性過氧化物酶，PBS緩沖液沖洗3 min×3次，加第一抗體，室溫下孵育60 min，PBS緩沖液沖洗5 min×3次，滴加聚合物增強劑，室溫下孵育20 min，PBS緩沖液沖洗3 min×3次，加酶標抗鼠聚合物，室溫下孵育30 min，PBS緩沖液沖洗3 min×3次，滴加DAB顯色試劑，電子顯微鏡下觀察，棕黃色為陽性，自來水沖洗，HE復染，0.1%鹽酸分化，自來水沖洗，PBS緩沖液返藍，乙醇梯度脫水干燥，中性樹脂封片。

1.3 結果判定標準 組織切片由兩名病理學醫師重復觀察，隨機選取5個高倍鏡視野，按陽性細胞數比例分級，無細胞著色評定為0分，細胞著色≤10%評定為1分，細胞著色10%~25%評定為2分，細胞著色26%~50%評定為3分，細胞著色51%~100%評定為4分；組織切片無色評定為0分，淡黃色評定為1分，棕黃色評定為2分，棕褐色評定為3分。兩者積分相加≤2分為陰性；反之為陽性。

1.4 統計學處理 本研究數據采用SPSS 18.0統計軟件進行分析，計量資料以（±s）表示，比較采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組PCDH9、BAG-1S蛋白表達比較 非小細胞肺癌組織PCDH9陽性表達率明顯低于非小細胞肺癌癌旁組織，兩者比較差異有統計學意義（P<0.05），非小細胞肺癌組織BAG-1S陽性表達率明顯高于非小細胞肺癌癌旁組織，兩者比較差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

表1 兩組PCDH9、BAG-1S蛋白表達比較 例（%）

2.2 不同PCDH9蛋白表達對非小細胞肺癌新輔助化療預后的影響 PCDH9陽性表達者總生存期及無進展生存期均明顯高于PCDH9陰性表達者，兩者比較差異有統計學意義（P<0.05），見表 2。

表2 不同PCDH9蛋白表達對非小細胞肺癌新輔助化療預后影響的比較（x-±s） 個月

2.3 不同BAG-1S蛋白表達對非小細胞肺癌新輔助化療預后的影響 BAG-1S陽性者總生存期及無進展生存期均明顯低于BAG-1S陰性表達者，兩者比較差異有統計學意義（P<0.05），見表3。

表3 不同BAG-1S蛋白表達對非小細胞肺癌新輔助化療預后影響的比較（x-±s） 個月

3 討論

美國肺部惡性腫瘤總體5年生存率約為15%，而我國肺部惡性腫瘤總體5年生存率僅為10%，大部分國家肺部惡性腫瘤發生率呈逐漸增高趨勢，而關于肺部惡性腫瘤的病理發生機制尚未完全明確。非小細胞肺癌是常見的肺部惡性腫瘤之一，其病情進展較快，預后欠佳，且對常規放化療耐藥，5年生存率較低。

原鈣黏蛋白（PCDH）根據基因組結構差異分為團簇性和非團簇性，非團簇性PCDH具有細胞黏附分子的異質性和同質性，參與細胞黏附因子的生物功能[6-7]。PCDH9基因有1個特別長的外顯子編碼，其屬于細胞黏附分子cadherin超家族成員，鈣黏蛋白缺失可促進惡性腫瘤浸潤和轉移[8]。相關研究亦顯示，PCDH9在膠質瘤組織中的表達明顯低于癌旁組織，且在高級膠質瘤組織PCDH9表達缺乏，PCDH9陰性表達者生存期較PCDH9陽性表達者明顯縮短[9]。因此，PCDH9可作為膠質瘤預后的特異性指標。經臨床實踐研究同時證實，PCDH9在乳腺癌組織中表達顯著降低，明顯低于胸腺纖維腺瘤，且與淋巴結轉移及其侵犯呈明顯的負相關，揭示了PCDH9表達在乳腺癌的臨床治療效果和預后的預測中具有重要的意義。但關于PCDH9對肺部惡性腫瘤預后狀況的評估意義研究甚少。

BAG-1S歸屬BAG-1，后者是近期發現的抗凋亡蛋白，其包括BAG-1M、BAG-1L和BAG-1S等不同亞型。BAG-1與Bcl-2相結合發揮多種生物功能。BAG-1S通過與多種基因蛋白產物相互作用共同調節細胞增殖和凋亡，在細胞質內，BAG-1S分別與Bal-2和HSP70相結合調節細胞凋亡和增殖功能[10]。BAG-1S與RAF-1激酶、類固醇激素受體等蛋白發生作用，還可與Bal-2形成復合物，共同促進抗細胞凋亡功能。BAG-1S在人類正常組織中幾乎不表達，但在大部分惡性腫瘤組織中顯著性高表達。文獻[11]報道顯示，BAG-1S在食管鱗癌組織和胃腺癌組織中的表達明顯增高，其表達程度與組織分化程度、淋巴結轉移、浸潤深度和臨床分期等緊密相關。同時，食管鱗癌組織BAG-1S陽性表達顯著高于食管鱗癌癌旁正常組織，提示BAG-1S參與食管癌的發生和發展。但關于BAG-1S在非小細胞肺癌疾病的發生和發展中的作用有待進一步的臨床研究。

本研究結果顯示，非小細胞肺癌組織PCDH9陽性表達率明顯低于非小細胞肺癌癌旁組織，BAG-1S陽性表達率明顯高于非小細胞肺癌癌旁組織，兩者比較差異有統計學意義（P<0.05），研究結果揭示了非小細胞肺癌組織PCDH9表達缺失，而BAG-1S呈高表達，與相關研究報道結果一致[12]。PCDH9陽性表達者總生存時間和無進展生存期均明顯增高，BAG-1S陽性者總生存時間和無進展生存期均明顯降低。相關研究報道顯示，BAG-1S在正常人體組織中弱表達甚至不表達，而在大部分腫瘤細胞均明顯高表達[13-14]。該研究同樣表明，胃腺癌組織，食管鱗癌組織和大腸癌組織中的BAG-1S顯著性高表達，其與浸潤深度、分化程度、淋巴結轉移和臨床分期等緊密相關。大量研究證實了BAG-1S高表達參與的惡性腫瘤的發生和發展[4]。結合本研究結果，PCDH9陰性表達的非小細胞肺癌預后欠佳，而BAG-1S陽性表達的非小細胞肺癌預后欠佳。因此，PCDH9陽性或BAG-1S陰性表達有助于改善非小細胞肺癌新輔助化療患者的預后狀況。

綜上所述，PCDH9、BAG-1S蛋白表達可預示非小細胞肺癌新輔助化療預后狀況，其中PCDH9陽性表達越高，BAG-1S陽性表達越低，疾病預后越佳。

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