泰山磐石散加味對大鼠流產模型母胎界面Th1/Th2型細胞因子平衡的調控*

申 劍，浦佳希，孫 亮，張小花，武權生，王虎平

(1.甘肅中醫學院中醫婦科教研室， 甘肅 蘭州 730000； 2.定西市婦幼保健院，甘肅 定西 743000)

·實驗研究·

泰山磐石散加味對大鼠流產模型母胎界面Th1/Th2型細胞因子平衡的調控*

申 劍1，浦佳希1，孫 亮2，張小花1，武權生1，王虎平1

(1.甘肅中醫學院中醫婦科教研室， 甘肅 蘭州 730000； 2.定西市婦幼保健院，甘肅 定西 743000)

目的：通過觀察泰山磐石散加味對大鼠流產模型白細胞介素4(IL-4)、γ干擾素(IFN-γ)的影響來了解其對母胎界面Th1/Th2型細胞因子平衡的調控，探究其作用機制。方法：將56只已孕Wistar大鼠按隨機數字表分為空白對照組、流產模型對照組、環境模型對照組、泰山低劑量組、泰山中劑量組、環境泰山低劑量組、環境泰山中劑量組7組。以米非司酮建立流產模型，涉及環境的組別在其基礎上再置于輻射和煙霧的環境造模。在妊娠第1天至第15天予以灌胃，分別給予低劑量 (7.26 g/kg)、中劑量 (14.52 g/kg)的泰山磐石散，空白對照組、模型對照組每日以4 mL蒸餾水灌胃1次。于大鼠妊娠第16天股動脈采血，ELISA法檢測IL-4、IFN-γ。結果：與流產模型對照組對比，泰山低、中劑量組IL-4升高、IFN-γ降低，差別有統計學意義(P<0.01)。與環境流產模型對照組對比，環境泰山低、中劑量組IL-4升高、IFN-γ降低，差別有統計學意義(P<0.01) 。環境泰山低劑量組與泰山低劑量組、環境泰山中劑量組與泰山中劑量組之間二指標對比，差別有統計學意義(P<0.05或P<0.01)。結論：泰山磐石散加味對流產模型、環境流產模型能有效上調Th2細胞因子并抑制Thl細胞因子，Th1/Th2傾斜使母體排異反應降低，對環境模型Th1/Th2傾斜調節效果更明顯。

泰山磐石散/藥效學;流產;IL-4;IFN-γ;環境

泰山磐石散出自《古今醫統大全·胎產須知/治懷胎慣墮之病》，“泰山磐石散：治婦人氣血兩虛，身體素弱，或肥而不實，或瘦而血熱，或脾胃少食，四肢倦息，素有墜胎之患……戒欲惱，遠酒酸辛熱之味，永保無墮”。[1]臨床常用其治療先兆流產、習慣性或復發性流產。本實驗通過觀察泰山磐石散加味對大鼠流產模型白細胞介素4(IL-4)、γ干擾素(IFN-γ)的影響來了解其對母胎界面Th1/Th2型細胞因子平衡的調控，探究其作用機制。

1 材料與方法

1.1 動 物

選取10～12周齡、體質量180～220 g的SPF級Wistar大鼠84只，其中雌性未孕大鼠56只，雄性大鼠28只。所有大鼠均由甘肅中醫學院動物實驗中心提供，許可證號：SCXK(甘)2004-0006。

1.2 藥品、試劑與儀器

泰山磐石散加味的藥物組成：黨參15 g，黃芪35 g，白術20 g，山藥15 g，白芍15 g，熟地黃12 g，川續斷15 g，桑寄生12 g，杜仲12 g，砂仁6 g，炙甘草6 g。根據人與實驗動物藥物劑量體質量折算系數[2]計算，煎煮2次后，藥液混合，濃縮到630 mL, 由甘肅中醫學院附屬醫院中藥房提供；米非司酮片，25 mg/片，北京紫竹藥業有限公司產品，批號43121703，由甘肅中醫學院附屬醫院西藥房提供。IL-4、IFN-γ ELISA分析藥盒，購自北京市福瑞生物工程公司，批號分別為20130711A、20130601A。

1.3 動物分組、給藥與模型的建立

將SPF級wistar大鼠按雌雄2∶1比例合籠，自由進食飲水，每日清晨觀察雌鼠陰栓，發現陰栓計為妊娠第1天。將56只已孕Wistar大鼠按隨機數字表法分為空白對照組、流產模型對照組、環境模型對照組、泰山低劑量組、泰山中劑量組、環境泰山低劑量組、環境泰山中劑量組7組。各藥物組在妊娠第1天至第15天予以相應藥物灌胃，根據文獻[2]給予低劑量 (7.26 g/kg)、中劑量 (14.52 g/kg)的泰山磐石散；空白對照組、模型對照組每日以4 mL蒸餾水灌胃1次。

先兆流產模型的建立：參照馮曉玲等[2]的造模方法及預實驗情況。除空白對照組外，在妊娠第10天給其余6組大鼠灌服米非司酮3.75 μg/g建立模型，觀察大鼠陰道出血及胚胎排出情況。

環境污染模型的建立：在米非司酮流產模型基礎上，建立輻射和煙霧的環境流產模型。在妊娠后將環境泰山低劑量組、環境泰山中劑量組、環境流產模型對照組放置于電話輻射、煙霧環境。參考陳鎮燕等[3]及張瑞等[4]被動吸煙造模，吸煙用玻璃箱容積 0. 25 m3(100 cm× 50 cm× 50 cm)。所有大鼠妊娠后開始吸煙,每日2次,每次1 h, 1 h內迅速燃完4支香煙。煙選甘肅煙草公司的蘭州煙，焦油含量7 mg，煙氣煙堿量0.6 mg,煙氣一氧化碳量8 mg。同時，參考李樂等[5]手機輻射造模：電話為常用三星手機s7562，孕鼠每次通話時間分別為30 min，每日于早、中、晚固定時間輻射，直至孕鼠處死。

1.4 檢測指標

各組大鼠于妊娠第16天股動脈采血后處死。將所采血液靜置30 min后，3 000 r/min離心10 min，取血清。采用ELISA法檢測各組大鼠血清IL-4、IFN-γ水平，操作方法嚴格按照試劑盒說明書。

1.5 統計學方法

2 結 果

2.1 各組一般情況對比

大鼠在造模前后進食量、飲水量均未發生明顯變化。除空白對照組外，其余各組孕鼠均出現不同程度的易激惹、陰道流血癥狀，但無妊娠物排出。

2.2 各組血清IL-4、IFN-γ水平對比

與空白對照組對比，流產模型對照組、環境流產模型對照組IL-4降低、IFN-γ升高，差別有統計學意義(P<0.01)，提示造模成功。與流產模型對照組對比，泰山低、中劑量組IL-4升高、IFN-γ降低，差別有統計學意義(P<0.01)；與環境流產模型對照組對比，環境泰山低、中劑量組IL-4升高、IFN-γ降低，差別有統計學意義(P<0.01)；環境泰山低劑量組與泰山低劑量組、環境泰山中劑量組與泰山中劑量組之間對比，差別有統計學意義(P<0.05或P<0.01)。見表1。

表1 各組大鼠血清IL-4、IFN-γ水平對比

組 別動物數IL-4IFN-γ空白對照組81.245±0.05 0.45±0.05 流產模型對照組80.819±0.06**0.81±0.01**環境流產模型對照組80.728±0.14**0.86±0.03**泰山低劑量組81.059±0.131##0.59±0.10##泰山中劑量組81.53±0.09## 0.43±0.05## 環境泰山低劑量組81.262±0.01△△**0.459±0.05△△**環境泰山中劑量組81.690±0.02△△▲▲0.361±0.05△△▲

注：與空白對照組對比，**P<0.01；與流產模型對照組對比，##P<0.01；與環境流產模型對照組對比，△△P<0.01；與泰山低劑量組對比，＊＊P<0.01；與泰山中劑量組對比，▲P<0.05，▲▲P<0.01。

3 討 論

導致流產的原因很多，免疫因素是其中之一。妊娠表達父母雙親的基因，因此母胎界面的滋養層細胞同時表達父系和母系雙方的同種異型抗原，可誘發同種異體的免疫識別或排斥反應。神經—內分泌—免疫組成了母胎界面的完整的調節網絡[6]。母胎界面的免疫調節對妊娠成敗非常重要。

細胞因子分為Thl與Th2型細胞因子兩類。Thl型細胞因子有白細胞介素2(IL-2)、γ干擾素(IFN-γ)、α腫瘤壞死因子(TNF-α)等，參與細胞介導的免疫過程。Th2型細胞因子有白細胞介素4(IL-4)、IL-6、IL-10等，主要為IL-4驅動誘發，輔佐B細胞產生抗體，促進抗體介導的體液免疫反應過程。Th2細胞因子作用增強而Thl細胞因子作用減弱在母胎界面中表現為正常妊娠。多量的Thl炎性細胞因子，具有流產傾向，不利于妊娠；但少量的炎性細胞因子不僅不會危害妊娠，而且還有助于蛻膜免疫微環境的保持，在一定程度上能夠清除異常的胎兒及入侵的微生物，對妊娠起到免疫防御作用[6]。免疫細胞因子在母胎界面的調節網絡中起著關鍵的作用。

泰山磐石散加味對流產大鼠干預結果表明：可使IL-4值升高，Th2表達上調，IFN-γ值降低，Th1表達下調，Th1/Th2傾斜使母體排異反應降低，泰山磐石散加味可通過對母胎界面調節達到維持妊娠，可防治流產目的，所有治療中劑量更有效。

環境因素是生活中難以避免的因素，張瑞等[4]、李樂等[5]都報道了環境對妊娠的影響。本實驗中流產模型對照組與環境流產模型對照組之間沒有統計學意義，可見輻射、煙霧因素累加后對孕鼠的影響與單獨米非司酮造成的影響沒有大的差別。環境泰山低劑量組與泰山低劑量組、環境泰山中劑量組與泰山中劑量組之間IL-4、IFN-γ值對比，差別有統計學意義(P<0.05或P<0.01)，表明泰山磐石散在有環境因素影響模型中上調Th2細胞因子并抑制Thl細胞因子的效果更明顯，提示其對有環境因素影響者更為有效。

方中人參(黨參代)、黃芪、白術、山藥、甘草補中益氣以載胎；川續斷、桑寄生養肝益腎以固胎，白芍、熟地黃補血滋陰以養胎；砂仁健脾理氣，防補藥之膩。原方當歸、川芎有活血功能，因此剔除不用。全方益氣健脾，開后天之源；養血固腎，攝先天之本。現代藥理研究表明：白術具有抗菌、抗凝、調節免疫功能、抑制子宮收縮的作用[8]。黃芪可影響多種免疫細胞活性、細胞因子的產生和分泌、抗體生成等[9]。黨參多糖能明顯增強實驗動物的細胞免疫。杜仲化學活性成分包含黃酮類、多糖類、苯丙素類，有提高機體免疫作用的重要作用[10]。杜仲、川續斷等補陽藥可促進垂體對促性腺激素釋放激素的反應性，促進卵泡發育，改善母胎界面Th1 / Th2型細胞的比值，調節滋養細胞的增殖與凋亡作用，對子宮平滑肌有鎮靜、鎮痛作用[11]。桑寄生能使卵巢hCG/LH受體結合力及受體數目增加，對下丘腦—垂體—性腺軸有調整作用[12]。

泰山磐石散加味臨床使用，對有流產史者，可預培其損；對檢查無異常但欲孕而未得者，可夯基址安心志；對因虛而經亂者，可補氣血調經水；對先兆流產、胎萎不長等，可補氣以托載固攝，養血以滋養濡潤；對不孕、胚胎停育、自然流產，復發性流產、習慣性流產等免疫因素導致者，療效顯著。

[1]徐春甫，崔仲平，王耀廷.古今醫統大全[M]. 北京：人民衛生出版社，1991：774.

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(編輯 陶 珠)

1001-6910(2015)05-0071-03

R285.5

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.05.33

張小花，講師，碩士，283005688@qq.com

甘肅中醫學院中青基金項目(ZQ2011-19)

2014-12-08；

2015-03-20