端粒酶熒光標記法在癌癥方面的應用研究

【摘要】近幾年，端粒酶的相關(guān)研究非常活躍，隨著研究的深入，人們對其結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、功能和性質(zhì)有了更深的了解，因此對細胞的癌變有了新的認識，即端粒酶的檢測技術(shù)對惡心腫瘤的早期診斷及后期監(jiān)測提供了數(shù)據(jù)支持，本文通過端粒酶的熒光檢測法對癌細胞的檢測方法進行了研究。

【關(guān)鍵詞】端粒酶；癌細胞；腫瘤診斷

1、實驗

1.1培養(yǎng)HeLa細胞

1.1.1培養(yǎng)基的制作：RPMI1640培養(yǎng)基，在加入1%至2%的瓊脂做冷凝劑后，補充培養(yǎng)100U/mL的鏈霉素、青霉素和10%的胎牛血清。

1.1.2細胞的培養(yǎng)：先將這些細胞放在含95%空氣，5%二氧化碳的37攝氏度的氣氛中培養(yǎng)，在細胞的繁殖期，再加入胰蛋白酶之前需要先將泛黃的培養(yǎng)基倒盡，再放入培養(yǎng)箱中大約五分鐘，待其消化完畢，倒出，再加入新的培養(yǎng)基，吹洗兩分鐘后，當觀察到細胞從壁上脫落，并且細胞團被吹散停止，然后用血球計數(shù)板計數(shù)。

1.2端粒酶的提取及預處理

1.2.1提取端粒酶：第一步，將計數(shù)收集到的1.0×106個細胞置于1.5mL的離心管中，在2000轉(zhuǎn)4攝氏度的條件下離心3分鐘達到去除培養(yǎng)基的作用，再用0.3M的氯化鈉溶液在弱堿性條件下洗滌三次，棄去上清液后，加入0.1mL的裂解液，然后冰浴裂解0.5h（移液槍抽取三次），再在4攝氏度1200轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，取出上清液于離心管中，迅速置于液氮中冷卻，備用。

1.2.2固定DNA探針：在處理好的金電極表面滴加疏基修飾的寡核咁酸探針的TE-氯化鈉緩沖液，在4攝氏度下組裝，然后將組裝完畢的電極放在弱堿性的氯化鈉溶液中清洗10分鐘，達到除去吸附探針的效果。……